本发明专利技术涉及乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，属于生物技术领域。一种牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，其制备步骤为：（1）牦牛乳酪蛋白溶解；（2）加胰蛋白酶水解；（3）灭活胰蛋白酶；（4）沉淀酪蛋白；（5）离心除沉淀；(6)葡聚糖凝胶层析分离；（7）质谱测定分子量；（8）超滤。用截留量1000Da和2500Da的超滤膜，收集1000Da至2500Da分子量范围的肽片段。（9）喷雾干燥。该方法制备的抑菌肽，肽分子量分布集中，抑菌活性强，金黄色葡萄球杆菌最小抑制浓度270μg/mL，大肠埃希氏菌最小抑菌浓度980μg/mL。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，属于生物
技术介绍
乳是新生哺乳动物的主要食物来源。新生婴儿尚未完成免疫系统的发育，其抗病和免疫作用主要来源于母乳，这是由于其中存在着多种生物活性肽的缘故。乳中含有多种生物活性因子，包括像乳铁蛋白这样的抗菌、抗病毒生物活性肽等。研究表明，在体外条件下，用适当的蛋白酶对乳中的蛋白进行水解，可以将这些生物活性肽释放出来。酪蛋白占牛乳蛋白质含量的78. 8%，是一种全价蛋白质。近年来研究表明，酪蛋白 除了营养功能外，还具有非常重要的生理功能，是生物活性肽的重要来源，包括抑菌肽、酪啡肽、降血压肽、抗血栓肽、免疫活性肽、促进矿物离子吸收肽等活性肽。抑菌肽在体外条件下能抑制多种细菌的生长，在体内具有类似抗生素的活性，可以预防感染、提高机体对病原菌的抵抗能力。抑菌肽还可以通过参与非特异性细胞的吞噬作用和激活免疫系统使动物产生长效的免疫抵抗力。抗菌肽因其稳定性好，对高等动物正常细胞无害等特点而备受关注，但以食物蛋白来源的抗菌肽的研究报道还较少。
技术实现思路
本专利技术的目的在于避免现有技术的不足，提供一种。用胰蛋白酶水解牦牛乳酪蛋白制备抑菌肽，实现了牦牛乳酪蛋白的深加工，工艺简单，水解产物抑菌活性高，适合工业化推广生产。水解产物对金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌具有较强的抑制活性。为实现上述目的，本专利技术采取的技术方案为一种，其主要特点是包括以下步骤(I)牦牛乳酪蛋白溶解配置2%_10%的牦牛乳酪蛋白水溶液，调节温度300C -65°C,pH6. 5-9. O，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解；(2)加胰蛋白酶水解称取按步骤(I) 2%_10%的牦牛乳酪蛋的量加入O. 5%-2%的胰蛋白酶，维持反应温度30°C -65°C,pH6. 5-9. O,反应I 4小时；(3)灭活胰蛋白酶，升温至80°C -100°C，维持15-30分钟(4)沉淀酪蛋白用盐酸调节pH到3. 8-4. 6,使酪蛋白在其等电点处析出(5)离心4000g-12000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液(6)葡聚糖凝胶层析分离采用SephadeXG25凝胶柱对离心液进行分部收集，检测各收集液抑菌活性；(7)质谱测定分子量采用质谱仪对抑菌组分层析液进行分子量测定，确定肽分子量，确定超滤膜分子量范围；(8)超滤取离心后上清液，过截留量1000Da_2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da-2500Da之间的多肽；(9)喷雾干燥取超滤液，采用喷雾干燥机，进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽。所述的牦牛乳酪蛋白为食品级；所述的盐酸为食品级。所选用的酶制剂为胰蛋白酶。本专利技术的有益效果I.本专利技术采用牦牛乳酪蛋白为原料，原料蛋白含量高，价格低，间接降低了生产成本；同时酶水解牦牛乳酪蛋白，产物溶解性好，不但提高了牦牛乳酪蛋白的营养价值，而且赋予产品功能特性。2.食源牦牛乳酪蛋白抑菌肽，与抗生素产品相比，安全性高，不存在抗性和过敏反 应，肽段结构简单，分子量小，稳定性高。3.操作工艺简单，绿色环保，生产成本低，适合工业化生产和推广。附图说明图I :本专利技术活性组分质谱图。具体实施例方式以下对本专利技术的原理和特征进行描述，所举实例只用于解释本专利技术，并非用于限定本专利技术的范围。实施例I :一种，其特征是包括以下步骤(I)牦牛乳酪蛋白购自华羚酪蛋白股份有限公司，食品级。(2)牦牛乳酪蛋白溶解称取牦牛乳酪蛋白25g，加水500mL，调节反应温度55°C，pH8. O，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解。(3)加胰蛋白酶胰蛋白酶购自北京格源天润生物技术有限公司，效价测定不少于2500单位，按牦牛乳酪蛋白25g计算，称取O. 25g酶，维持反应反应温度55°C，pH8. O,反应2小时。(4)灭活胰蛋白酶，升温至80°C，维持15分钟。(5)沉淀酪蛋白用5mol/L食用级盐酸调节pH到4. 6,使酪蛋白在其等电点处析出。(6)离心4000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液。(7)超滤取离心后上清液，过截留量IOOODa和2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da-2500Da之间的肽段。(8)喷雾干燥取超滤透过液，采用喷雾干燥机，对产品进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽，得到干粉7. 3g，得率29. 2%。(9)抑菌活性测定，金黄色葡萄球杆菌最小抑制浓度270 μ g/mL,大肠埃希氏菌最小抑菌浓度980 μ g/mL。实施例2 : —种，其特征是包括以下步骤(I)牦牛乳酪蛋白购自华羚酪蛋白股份有限公司，食品级。(2)牦牛乳酪蛋白溶解称取牦牛乳酪蛋白20g，加水500mL，调节反应温度55°C，pH8. O，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解。(3)加胰蛋白酶加胰蛋白酶胰蛋白酶购自北京格源天润生物技术有限公司，效价测定不少于2500单位，按牦牛乳酪蛋白20g计算，称取O. 5g酶，维持反应反应温度55°C，pH8. 0，反应2小时。(4)灭活胰蛋白酶，升温至80°C，维持15分钟。(5)沉淀酪蛋白用5mol/L食用级盐酸调节pH到4. 6,使酪蛋白在其等电点处析出。(6)离心12000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液。(7)超滤取离心后上清液，取离心后上清液，过截留量IOOODa和2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da-2500Da之间的肽段。(8)喷雾干燥取超滤透过液，采用喷雾干燥机对产品进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽，得到干粉5. 12g，得率25. 6%。 (9)抑菌肽活性测定,对金黄色葡萄球杆菌最小抑制浓度314 μ g/mL,大肠埃希氏菌最小抑菌浓度I. 07mg/mL。实施例3 : —种，其特征是包括以下步骤(I)牦牛乳酪蛋白购自华羚酪蛋白股份有限公司，食品级。(2)牦牛乳酪蛋白溶解称取牦牛乳酪蛋白40g，加水500mL，调节反应温度55°C，pH8. O，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解。(3)加胰蛋白酶加胰蛋白酶胰蛋白酶购自北京格源天润生物技术有限公司，效价测定不少于2500单位，按牦牛乳酪蛋白40g计算，称取O. 5g酶，维持反应反应温度55°C，ρΗ8· 0，反应2小时。(4)灭活胰蛋白酶，升温至80°C，维持15分钟。(5)沉淀酪蛋白用5mol/L食用级盐酸调节pH到4. 6,使酪蛋白在其等电点处析出。(6)离心12000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液。(7)超滤取离心后上清液，取离心后上清液，过截留量IOOODa和2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da-2500Da之间的肽段。(8)喷雾干燥取超滤透过液，采用喷雾干燥机对产品进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽，得到干粉12. 2g，得率30. 4%。(9)抑菌肽活性测定,对金黄色葡萄球杆菌最小抑制浓度276 μ g/mL,大肠埃希氏菌最小抑菌浓度982 μ g/mL。实施例4 :一种，其特征是包括以下步骤(I)牦牛乳酪蛋白购自华羚酪蛋白股份有限公司，食品级。(2)牦牛乳酪蛋白溶解称取牦牛乳酪蛋白10g，加水500mL，调节反应温度30°C，pH6. 5,搅拌,使牦牛乳酪蛋白溶解。(3)加胰蛋白酶胰蛋白酶购自北京格源天润生物技术有限公司，效价测定不少于2500单位，按牦牛乳酪蛋白IOg计算，称取Ig酶，维持反应温度30°C，pH6. 5，反应4小时。(4)灭本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种牦牛乳酪蛋白抑菌肽的制备方法，其特征是包括以下步骤：（1）牦牛乳酪蛋白溶解：配置2%？10%的牦牛乳酪蛋白水溶液，调节温度30℃？65℃，pH6.5？9.0，搅拌，使牦牛乳酪蛋白溶解；（2）加胰蛋白酶水解：称取按步骤（1）2%？10%的牦牛乳酪蛋的量加入0.5%？2%的胰蛋白酶，维持反应温度30℃？65℃，pH6.5？9.0，反应1~4小时；（3）灭活胰蛋白酶，升温至80℃？100℃，维持15？30分钟：（4）沉淀酪蛋白：用盐酸调节pH到3.8？4.6，使酪蛋白在其等电点处析出：（5）离心：4000g？12000g离心力，离心除去酪蛋白沉淀，留上清液：（6）葡聚糖凝胶层析分离：采用SephadexG25凝胶柱对离心液进行分部收集，检测各收集液抑菌活性；（7）质谱测定分子量：采用质谱仪对抑菌组分层析液进行分子量测定，确定肽分子量，确定超滤膜分子量范围；（8）超滤：取离心后上清液，过截留量1000Da？2500Da的超滤膜，收集分子量在1000Da？2500Da之间的多肽；（9）喷雾干燥：取超滤液，采用喷雾干燥机，进行喷干，得到牦牛乳酪蛋白抑菌肽。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：谢小冬，宋礼，纪银莉，高维东，何潇，葛静微，苏艳萍，
申请(专利权)人：甘肃华羚生物技术研究中心，
类型：发明
国别省市：
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