牛乳β-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用制造技术

本发明专利技术涉及蛋白领域，具体涉及多个来源于β-酪蛋白的乳源性生物活性多肽QNIP、QQPV、GEIVE、VSKVK、PYPQRD。经过体外抗氧化实验和体外免疫功能促进实验，发现了本发明专利技术的生物活性多肽具有不同的抗氧化生物学活性和促进细胞免疫的活性；研究结果表明本发明专利技术的五种乳源性生物活性肽作为一类小分子物质具有潜在的延缓衰老的功能。另外，模拟消化实验结果表明发现的五条生物活性多肽在通常的动物体内消化条件下稳定，不会被进一步降解，能够被动物机体直接吸收利用发挥其具有的生物活性功能，对开发具有抗氧化功能、增强免疫功能及延缓衰老的乳制品、保健品及药物具有十分重要的意义。

【技术实现步骤摘要】
牛乳β-酪蛋白来源生物活性肽的制备和应用
本专利技术涉及蛋白领域，具体涉及多种来源于β-酪蛋白的生物活性多肽及其制备和应用。
技术介绍
由于生物活性肽作为促进健康的生物活性成分，具有传递生理信息，调节生理功能的作用，对于人体的神经、消化、生殖、生长、运动、代谢、循环等系统的正常生理活动的维持非常重要。它们不仅具有抗病毒、细菌、抗高血压、降胆固醇等作用，而且作为免疫调节剂具有调节免疫反应、抗肿瘤等功能；能够清除自由基具有延缓衰老的功效，是当前国际食品界最热门的研究课题和极具发展前景的功能因子。各种活性肽常作为功能食品添加成分用于食品的实践生产，特别是在乳饮料、食品添加剂的应用方面已经取得良好效果。乳源性生物活性肽生物的功能及对消费者的健康的影响正备受重视。近年来，越来越多的科学研究表明很多来源于生物蛋白的小肽具有多种生物学活性，如激素作用、免疫调节、抗血栓、抗高血压、降胆固醇、抑菌、抗病毒、抗癌作用等。同时，研究发现小肽可以被人体更好地吸收和利用，改变了传统的蛋白质只能被降解成氨基酸才能被吸收利用的观点。在众多生物蛋白中各种牛乳蛋白是非常重要的生物活性多肽来源之一，它们被乳酸菌分解利用，并发生了一系列生理生化反应，使蛋白质变为多肽或者游离的氨基酸，最终被人体消化吸收或通过小肠上皮细胞的吸收转运直接进入人体的血液循环，发挥其生物活性作用。因此，这些生物活性小肽不仅成为筛选药物的天然资源宝库，也是功能性食品工业的主要原料成分。目前，生物活性肽的制备及其应用开发已经成为世界范围内研究的热点。免疫活性肽是继阿片肽发现后首次从乳中获得并证明其生理活性的一类生物活性肽。1981年，Jolles等人首次发现，利用胰蛋白酶水解人乳蛋白，从水解物中得到一种免疫活性肽段，其氨基酸序列为Val-Glu-Pro-Ile-Pro-Tyr，该短肽被证明在体外实验中能够增强小鼠腹腔巨噬细胞对绵羊血红细胞的吞噬作用，静脉注射，则能增强小鼠对肺炎克氏杆感染的抵抗能力。Elitsur等人经胃蛋白酶处理酪蛋白得到Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu-Glu和Arg-Tyr-Leu-Gly-Tyr-Leu，研究证明该两短肽不仅具有阿片样活性，也具有免疫调节活性，可增强淋巴细胞增殖，提高自然杀伤细胞(NK)能力，促进噬中性白细胞的移动。张少辉等人利用瑞士乳杆菌发酵脱脂乳获得了生物活性多肽QEPVL及其降解产物QEPV，经过体外抗氧化实验、体外免疫功能促进实验，验证了多肽QEPV具有较好的抗氧化生物学活性和促进细胞免疫的活性，一方面能够清除机体内的自由基，减少自由基对人体的伤害；另一方面，生物活性多肽QEPVL和QEPV还能够增强机体免疫力，增强淋巴细胞、巨噬细胞的增殖能力，使巨噬细胞一氧化氮诱生量增加，并促巨噬细胞分泌细胞因子。尽管牛乳蛋白内隐含有许多具有生物活性的肽序列，但这些生物活性肽序列只有通过一定的手段将其释放出来才能发挥作用。获取乳蛋白源活性肽的主要手段有两种：发酵，利用微生物(乳酸菌)发酵乳源蛋白获取；酶解，包括来自动物的消化道酶和来自植物和微生物的蛋白酶。研究结果表明乳源性生物活性肽作为一类小分子物质，以其分子量低、活性强、用量少的独特优势，已越来越多的引起人们的重视。所以它们不仅仅作为功能性食品原料用于各种功能性食品的制造，而且作为免疫调节剂具有调节免疫反应、抗肿瘤等功能；能够清除自由基具有延缓衰老的功效。此外，多数乳源性生物活性肽能够抵抗胃肠道的消化，在小肠内以完整的形式被机体吸收，而不必被分解成单个氨基酸，具有易消化吸收，食用安全性极高。因此乳源性生物活性肽的能够提高机体抵御外界不良因素的刺激、降低机体发病率等功能特性备受重视，有望成为具有清除自由基、减少患癌几率和延缓衰老的非药物性物质原料，在功能性食品和医药领域具有非常广阔的应用前景，今后必将成为国际食品界和生物医药产业界的最热门的研究课题，为提高人类健康水平、不得病或者说少得病、延缓衰老、延长寿命发挥重要的作用。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供：一种分离的生物活性多肽QNIP，其包括(a)由Gln-Asn-Ile-Pro(SEQIDNO：1)所示的氨基酸组成的多肽；(b)或在SEQIDNO：1所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(a)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽QQPV，其包括(c)由Gln-Gln-Pro-Val(SEQIDNO：2)所示的氨基酸组成的多肽；(d)或在SEQIDNO：2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(c)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽GEIVE，其包括(e)由Gly-Glu-Ile-Val-Glu(SEQIDNO：3)所示的氨基酸组成的多肽；(f)或在SEQIDNO：3所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(e)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽VSKVK，其包括(g)由Val-Ser-Lys-Val-Lys(SEQIDNO：4)所示的氨基酸组成的多肽；(h)或在SEQIDNO：4所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(g)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽PYPQRD，其包括(i)由Pro-Tyr-Pro-Gln-Arg-Asp(SEQIDNO：5)所示的氨基酸组成的多肽；(j)或在SEQIDNO：5所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(i)衍生的多肽。较优的，所述生物活性多肽的来源为乳源性。β-酪蛋白的氨基酸序列为既有技术，β-酪蛋白氨基酸序列的GenBank编号AAA30431.1，序列如SEQIDNO：6所示：MetLysValLeuIleLeuAlaCysLeuValAlaLeuAlaLeuAlaArgGluLeuGluGluLeuAsnValProGlyGluIleValGluSerLeuSerSerSerGluGluSerIleThrArgIleAsnLysLysIleGluLysPheGlnSerGluGluGlnGlnGlnThrGluAspGluLeuGlnAspLysIleHisProPheAlaGlnThrGlnSerLeuValTyrProPheProGlyProIleProAsnSerLeuProGlnAsnIleProProLeuThrGlnThrProValValValProProPheLeuGlnProGluValMetGlyValSerLysValLysGluAlaMetAlaProLysGlnLysGluMetProPheProLysTyrProValGluProPheThrGluSerGlnSerLeuThrLeuThrAspValGluAsnLeuHisLeuProLeuProLeuLeuGlnSerTrpMetHisGlnProHisGlnProLeuProProThrValMetPheProProGlnSerValLeuSerLeuSerGlnSerLysValLeuProValProGlnLysAlaValProTyrProGlnArgAspMetProIleGlnAlaPheLeuLeuTyrGlnGlu本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种分离的生物活性多肽QNIP，其包括(a)由SEQ ID NO：1所示的氨基酸组成的多肽；(b)或在SEQ ID NO：1所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(a)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽QQPV，其包括(c)由SEQ ID NO：2所示的氨基酸组成的多肽；(d)或在SEQ ID NO：2所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(c)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽GEIVE，其包括(e)由SEQ ID NO：3所示的氨基酸组成的多肽；(f)或在SEQ ID NO：3所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(e)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽VSKVK，其包括(g)由SEQ ID NO：4所示的氨基酸组成的多肽；(h)或在SEQ ID NO：4所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(g)衍生的多肽；一种分离的生物活性多肽PYPQRD，其包括(i)由SEQ ID NO：5所示的氨基酸组成的多肽；(j)或在SEQ ID NO：5所示的氨基酸序列中经取代、缺失或添加一个或几个氨基酸且具有同等活性的由(i)衍生的多肽。...

【技术特征摘要】
1.一种分离的生物活性多肽QNIP，其氨基酸序列如SEQIDNO：1所示；一种分离的生物活性多肽QQPV，其氨基酸序列如SEQIDNO：2所示；一种分离的生物活性多肽VSKVK，其氨基酸序列如SEQIDNO：4所示；一种分离的生物活性多肽PYPQRD，其氨基酸序列如SEQIDNO：5所示。2.编码权利要求1所述生物活性多肽QNIP、QQPV、VSKVK、PYPQRD的核苷酸片段。3.权利要求1所述生物活性多肽QNIP...

【专利技术属性】
技术研发人员：张少辉，徐海红，金赢凯，马鎏镠，钱蕙佶，高扬，程志才，卢飞，
申请(专利权)人：上海交通大学，
类型：发明
国别省市：上海;31