本发明专利技术公开一种香菇生物活性肽的制备方法，具体步骤如下：1)香菇足粉中加入6～12倍质量的蒸馏水溶解；2)超声波破碎处理，每kg香菇足粉加入10～20万国际单位纤维素酶，调pH至4.0～5.0，温度40～50℃，水解60～120min；3)冷却至室温，氢氧化钠调pH9.5～10.5，5～15℃冷水浴提取20～40min，离心取上清液，减压浓缩，加无水乙醇至浓度为83％～85％。4℃下静置60～90min。离心，收集沉淀，烘干得香菇蛋白；4)将香菇蛋白溶于40～60倍质量的蒸馏水中，调pH至6.0～7.0，加入0.2％～0.4％复合蛋白酶水解，温度45～55℃，水解150～200min。灭酶，离心，收集滤液；5)用0.22μm的滤膜微滤，超滤，收集相对分子质量在5～10KD的肽段，真空冷冻干燥，得棕色香菇生物活性肽冻干粉末。本发明专利技术制得的香菇生物活性肽具有较好的体外抗氧化活性和醒酒活性。
【技术实现步骤摘要】
一种香菇生物活性肽的制备
本专利技术涉及，属于现代食品加工生物
。
技术介绍
香燕属担子菌纲(Basidaiomycetes)、伞菌目(Agaricales)、口蘑科(Tricholomataceae)、香燕属(Lent inus),学名Lentinus edodes,是我国久负盛名的珍贵食用菌。据分析，干香菇食用部分占72%，每100g食用部分中含水13g、脂肪1.8g、碳水化合物54g、粗纤维7.8g、灰分4.9g、|^ 124mg、磷415mg、铁25.3mg、维生素BI0.07mg、维生素B21.13mg、尼克酸18.9mg。香燕中的氨基酸十分丰富,构成人体蛋白质的20种氨基酸,香燕就有18种，其中包含8种人体必需氨基酸，其营养价值是牛肉的4倍。香菇不仅营养丰富，而且具有很高的药用价值。自古以来就被认为是延年益寿的珍品，可治疗多种疾病。元代《日用草木》记载香菇有益气、治风破血的功能；清代黄富继的《本草求真》中也有“香菇味甘性平，能益气、助食及理小便失禁”的记述。现代研究证明:香菇中香菇多糖、香菇太生、香菇腺嘌呤、香菇生物活性肽等均具有一定的生理功能，如调节人体免疫力，抗肿瘤，降血压、降血脂，促进人体新陈代谢，提高机体免疫力，预防肥胖症、结肠癌、便秘、冠心病等疾病，香菇是不可多得的保健品之一。氨基酸彼此以酰胺键相互连接形成的化合物称作肽，对生物体的生命活动有益或具有生理作用的肽类化合物称为生物活性肽。相对于蛋白质而言，活性肽分子小，生物活性高，少量肽就可以发挥 重要作用。目前，人们从动物、植物和微生物中分离得到了多种生物活性肽，这些活性肽有多种生理功能，如降血压、调节血糖、降血脂、抑制病毒、抗癌等。近年的研究证实，消化道可以完整的吸收小肽，小肠内存在一个寡肽的吸收通道，因此生物活性肽可以直接被人体吸收。与氨基酸相比，肽的吸收效率更高且不易饱和。常见的生物活性肽有大豆肽、谷胱甘肽、白蛋白肽、鱼肉肽、玉米肽、小麦肽、各种乳源肽。《玉米肽的醒酒活性体外试验及其醒酒机理研究》(《中国粮油学报》，2008年第23卷第5期，2008/9，P54-58，隋玉杰等)中针对玉米肽对ADH的激活率及对.0H的抑制率进行的研究探讨，并对玉米肽的醒酒机理进行深入报道。研究表明，体外测定玉米肽对ADH的激活率及对.0Η的抑制率，两者基本上是正相关关系。而文中并未指出醒酒肽的相对分子质量，未进行其他抗氧化活性的研究以及未深入研究玉米肽对ALDH的影响。香菇生物活性肽，又称香菇低聚肽。是以香菇足粉为原料，酶解后获得的低相对分子质量肽产物。低聚肽吸收速度快、耗能低、易于被人体消化、吸收和利用，具有抗氧化、抗疲劳、醒酒护肝等重要的生理活性。《复合酶法水解香菇工艺的研究》(《微生物学通报》，2012年第39卷第一期，2011/9，Ρ62-67，陈海强等)中研究了复合酶法水解香菇的工艺条件，并计算出此法所得香菇水解液的水解度。《双酶法水解香菇蛋白的工艺研究》(《食品科技》，2003年第12期，2003/8，Ρ14-16，闻欲晓等)中研究了纤维素酶和枯草杆菌中性蛋白酶共同水解香菇蛋白的工艺，确定了两种酶的水解条件。以上研究只是简单探索了香菇生物活性肽的水解工艺，得到香味浓郁的香菇蛋白水解液。并未对香菇生物活性肽进一步分离，研究其生物活性。目前国内现有的专利200710061492.5 “香菇抽提物的生产工艺”、200810013119.7 “具有抗肿瘤活性的香菇发酵纯蛋白、提取方法及其制剂”、200810183845.3 “从香菇足粉中综合提取多种生物活性成分的方法”、2009101937.7 “一种香菇生物活性肽粉的制备方法”、201110230360.7 “一种多肽菌菇精的制备方法”、201110314779.0 “从香菇中提取具有抗氧化降血糖作用的活性蛋白的方法”等，大部分是将香菇粉用蛋白酶酶解的方法制备成香菇抽提物、调味剂或是含有香菇生物活性肽的饮品。制备具有生物活性的香菇蛋白，而很少将香菇生物活性肽提纯，并研究某一相对分子质量肽段的生物活性。中国专利申请201110155206.8“香菇生物活性肽的制备方法和用途”，公开了，包括前处理、酶解、脱色、超滤、干燥得到香菇生物活性肽。所制得香菇生物活性肽粉纯度为50%以上，具有抗疲劳作用。本专利技术采用超声波辅助纤维素酶解方法，首先提取香菇蛋白，并首次公开利用Protamex蛋白酶(诺维信公司购买)酶解香菇蛋白制取香菇生物活性肽的最佳工艺，通过对比不同相对分子质量肽段的抗氧化活性及不同浓度香菇生物活性肽的体外醒酒活性，挑选出活性最高肽段，制备出一种具有抗氧化活性及醒酒活性的香菇生物活性肽。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对之前专利技术的不足，提供一种以香菇足粉为原料，制备具有醒酒、抗氧化功能香菇生物活性肽的方法。本专利技术的香菇生物活性肽具有纯度高、相对分子质量已知、吸收利用率高等特点。 本专利技术制备方法的技术方案包括:超声波破碎技术辅助纤维素酶提取香燕内容物，乙醇沉淀香菇蛋白，用Protamex蛋白酶酶解制备香菇生物活性肽，纯化香菇生物活性肽，检测不同相对分子质量香菇生物活性肽的醒酒、抗氧化活性。最终制备高纯度、高活性，具有醒酒、抗氧化功能的香菇生物活性肽。具体说，本专利技术研究，步骤如下:I)溶解:称取一定量香菇足粉，加入6~12倍质量的蒸馏水溶解，并充分搅拌；2)破壁:将香菇水溶液超声波破碎处理15~25min，按照每kg香菇足粉加入10~20万国际单位纤维素酶,调pH至4.0~5.0,加热温度至40~50°C,水解60~120min ；3)制取香菇蛋白:冷却至室温，加入氢氧化钠将pH调至9.5~10.5，在5~15°C冷水浴中提取20~40min，离心，取上清液，减压浓缩，加入无水乙醇至浓度为83%~85%沉淀，冰水浴。在4°C条件下静置60~90min。离心弃去上清液，收集沉淀，40~50°C烘干，得香菇蛋白；4)酶解:将香菇蛋白溶于40~60倍蒸馏水中，调pH至6.0~7.0，加入0.2%~0.4% Protamex蛋白酶水解，温度保持在45~55°C，水解150~200min。灭酶后降至室温。离心，收集滤液；5)获取香菇生物活性肽:用孔径大小为0.22tm的滤膜微滤，得浅黄色澄清液体，用不同滤膜超滤，收集相对分子质量在5~IOKD的肽段，真空冷冻干燥，得棕色香菇生物活性肽冻干粉末。其中，香菇足粉的水解度随着料液比的增加而增加，综合考虑水解程度及浓缩的方便，在一个特别优选的方案中，料液比为1: 6~1: 10 (m/m)，首选，料液比为1: 8~1: 10(m/m)。超声波在食品加工中的应用越来越广泛，在液体中它可以产生空化作用，由空化作用产生的冲击波和射流又可破坏细胞和细胞膜结构，从而增加细胞内容物通过细胞膜的穿透力和传输能力。可提高香菇蛋白质提取率。香菇细胞壁结构比较坚实，细胞内容物不易流出，通过超声方法可以增加内容物的流出，同时使用纤维素酶水解细胞壁组成物质，可以最大程度获得香菇蛋白，最终获得香菇醒酒活性肽。在一个特别优选的实施方案中，将香燕水溶液超声处理15~20min,在处理后的溶液中按照每kg香菇足粉加入10~20万国际单位纤维素酶，调pH至4.本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种香菇生物活性肽制备的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤：①溶解：称取一定量香菇足粉，加入6～12倍质量的蒸馏水溶解，并充分搅拌；②破壁：将香菇水溶液超声波破碎处理15～25min，按照每kg香菇足粉加入10～20万国际单位纤维素酶，调pH至4.0～5.0，加热温度至40～50℃，水解60～120min；③制取香菇蛋白：冷却至室温，加入氢氧化钠将pH调至9.5～10.5，在5～15℃冷水浴中提20～40min，离心，取上清液，减压浓缩，加入无水乙醇至浓度为83％～85％，沉淀，冰水浴，在4℃条件下静置60～90min，离心弃去上清液，收集沉淀，40～50℃烘干，得香菇蛋白；④酶解：将香菇蛋白溶于40～60倍质量的蒸馏水中，调pH至6.0～7.0，加入0.2％～0.4％Protamex蛋白酶水解，温度保持在45～55℃，水解150～200min，灭酶后降至室温，离心，收集滤液；⑤获取香菇生物活性肽：用孔径大小为0.22μm的滤膜微滤，得浅黄色澄清液体，用不同滤膜超滤，收集相对分子质量在5～10KD的肽段，真空冷冻干燥，得棕色香菇生物活性肽冻干粉末。
【技术特征摘要】
1.一种香菇生物活性肽制备的方法，其特征在于所述方法包括以下步骤: ①溶解:称取一定量香菇足粉，加入6~12倍质量的蒸馏水溶解，并充分搅拌； ②破壁:将香菇水溶液超声波破碎处理15~25min，按照每kg香菇足粉加入10~20万国际单位纤维素酶，调pH至4.0~5.0,加热温度至40~50°C,水解60~120min ； ③制取香菇蛋白:冷却至室温，加入氢氧化钠将PH调至9.5~10.5，在5~15°C冷水浴中提20~40min，离心，取上清液，减压浓缩，加入无水乙醇至浓度为83%~85 %，沉淀，冰水浴，在4°C条件下静置60~90min，离心弃去上清液，收集沉淀，40~50°C烘干，得香菇蛋白； ④酶解:将香菇蛋白溶于40~60倍质量的蒸馏水中，调pH至6.0~7.0，加入0.2 %~0.4% Protamex蛋白酶水解，温度保持在45~55°C，水解150~200min，灭酶后降至室温，离心，收集滤液； ⑤获取香菇生物活性肽:用孔径大小为0.22 μ m的滤膜微滤，得浅黄色澄清液体，用不同滤膜超滤，收集相对分子质量在5~IOKD的肽段，真空冷冻干燥，得棕色香菇生物活性...
【专利技术属性】
技术研发人员：任迪峰，杨宇迪，程湛，匡绮蓉，鲁军，任剑，
申请(专利权)人：北京林业大学，
类型：发明
国别省市：北京;11
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