本发明专利技术涉及一种利用肝素钠下脚料制备高纯度硫酸皮肤素的方法，它是以生产精品肝素钠产出的下脚料为原料，通过乙醇分级沉淀，得到类肝素粗品和硫酸皮肤素粗品，然后类肝素粗品通过乙醇分级沉淀、双氧水进行氧化，得到正比旋类肝素和负比旋类肝素；硫酸皮肤素粗品通过亚硝酸盐降解，使粗品中含有的肝素类物质降解成低分子肝素类物质，再通过乙醇分级沉淀、双氧水氧化得到纯度达98%以上的硫酸皮肤素。解决了长期以来市场上存在的硫酸皮肤素纯度不高的问题，实现了将下脚料变废为宝过程，可以为企业创造出较大的额外收益，其工艺步骤简易，工艺过程绿色环保，不产生有毒有害物质，成本低廉，易于规模化生产。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及从制备精品肝素钠过程中产出的下脚料中制备高纯度硫酸皮肤素的方法，属于黏多糖生物制药
技术介绍
硫酸皮肤素（dermatan sulfate，简称DS），是一种天然的糖胺聚糖，由重复的二糖单位组成，其二糖为乙酰氨基硫酸半乳糖和艾杜糖醛酸，主要为N-乙酰半乳糖胺4-硫酸和L-艾杜糖醛酸构成的双糖链结构。硫酸皮肤素广泛分布于动物组织中，具有抗血栓、抗水肿、促进皮肤更新、阻止皮肤的过度角质化和棘皮症、滋润皮肤、保持水分的作用，近年来受到国内外专家的日益重视。硫酸皮肤素的治疗效果与其纯度有直接关系，一般情况下硫酸皮肤素的纯度越高，其抗凝效价越低，激活肝素辅因子Ⅱ活性越高，出血副作用发生的可能性越小，在用于长期治疗血栓的过程中更加安全可靠。硫酸皮肤素除本身具有的治疗作用外，还能用于制备抗血栓药物舒洛地特。舒洛地特是由硫酸乙酰肝素和硫酸皮肤素两种组分组成，两种组分可以协同发挥作用，可以发挥较强的抗栓作用，且其引起出血的可能性小，尤其适合抗血栓的长期治疗。由于该药物良好的治疗效果，因而具有很大的市场需求，CN100384884C中采用了从肝素钠副产物中通过乙醇分级沉淀分离提纯硫酸皮肤素和低分子硫酸乙酰肝素的方法，虽然该方法对于分级沉淀时药液浓度、盐含量及乙醇浓度均做了研究，但未公开影响药液沉淀分离效果的重要因素pH值和沉淀温度。其制备的硫酸皮肤素检测结果为比旋度-55°～-63°，抗凝效价≤10USPu/mg，由于硫酸皮肤素的纯度越高其比旋度越低，抗凝效价越低，说明其制备的硫酸皮肤素纯度较低，因而无法发挥更好的治疗效果。
技术实现思路
本专利技术在于改进现有技术缺陷而提供一种利用肝素钠下脚料制备高纯度硫酸皮肤素的方法。本专利技术建立的方法主要是从肝素钠下脚料中通过乙醇分级沉淀，得到硫酸皮肤素粗品；采用亚硝酸盐降解硫酸皮肤素粗品，使得粗品中含有的肝素降解成小分子肝素或单、双糖，并通过乙醇分级沉淀去除小分子肝素和单、双糖肝素以及少量的硫酸软骨素，从而得到高纯度硫酸皮肤素。其具体工艺包括以下步骤：a. 粗分将肝素钠下脚料按湿重5～30%w/v浓度加入纯化水溶解后加入2～10%w/v氯化钠，氯化钠溶解后，调整药液pH4.0～6.5后加入乙醇，当药液中乙醇的浓度为30～38%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀2～10小时后将沉淀物与上清液分离，在分离的上清液中补加乙醇，当药液中乙醇的浓度为40～50%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀6～12小时后收集沉淀得到硫酸皮肤素粗品；b. 精制将上述硫酸皮肤素粗品按湿重10～50%w/v的浓度加入纯化水溶解后，调节药液pH2.0～2.5，再向药液中加入0.6～3.0%（w/w）亚硝酸钠后（以硫酸皮肤素粗品湿重计），在常温下搅拌反应2～5小时，然后静置24小时后加入1～6%（w/v）氯化钠，调整药液pH4.0～6.5后，加入乙醇，当药液中乙醇浓度为37～45%（v/v）时，在10～25℃静置沉淀，沉淀8～24小时后收集沉淀得到比旋度≤-65°的硫酸皮肤素精品；c. 氧化脱色将硫酸皮肤素按湿重10～50%（w/v）加纯化水溶解后，在25～35℃下调整药液pH9.0～12.0后，加入过氧化氢进行反应，其中过氧化氢在药液中的浓度为0.5～4.0%v/v；d. 沉淀上述反应8～36小时后，按质量体积比向药液中加入1～6%的氯化钠，氯化钠溶解后调整药液pH4.0～6.5，再加入1.5～3.0倍药液体积的乙醇，然后在10～25℃下静置沉淀，沉淀8～24小时后收集硫酸皮肤素沉淀；e. 冷冻干燥将上述硫酸皮肤素沉淀物按湿重30～45%浓度加入纯化水溶解后降温，降温至-40～-60℃时抽真空，当真空度≤15Pa后缓慢加热，加热至50～55℃后保温，保温3～5小时后制得硫酸皮肤素目标产品。经取样检测，硫酸皮肤素分子量为8000～40000道尔顿，比旋度为-65°～-70°，抗凝效价≤2uspu/mg，硫酸基与羧酸基比值为0.8～1.2，纯度≥98%。本专利技术取得的技术进步：本专利技术采用从粗品肝素钠到精品肝素钠生产过程中产生的下脚料为原料，从下脚料中进一步深加工出高纯度硫酸皮肤素，实现了将下脚料变废为宝的过程，可以为企业创造出较大的额外收益。本专利技术主要采用亚硝酸钠降解和乙醇分级沉淀，制得的硫酸皮肤素产品的比旋度为-65°～-70°，抗凝效价≤2USPu/mg，分子量为8000～40000道尔顿，硫酸基与羧酸基比值为0.8～1.2，且经毛细管电泳分析，用硫酸皮肤素标准品作为对照，测得制备的硫酸皮肤素的纯度在98%以上。高纯度的硫酸皮肤素临床可发挥更好的治疗效果，更具有市场竞争力，可为企业带来更大的经济收益，工艺绿色环保，不产生有毒有害物质，工艺步骤简易，成本低廉，易于规模化生产。具体实施方式下面结合具体实施例对本专利技术作进一步说明。实施例1：a. 粗分取生产肝素钠精品的下脚料湿品2kg加纯化水溶解并定容至40L后，加入3.2kg氯化钠，氯化钠溶解后，用3mol/L盐酸溶液调整溶液pH6.0后加入乙醇，使溶液中乙醇的浓度为37.5%L/L，然后在15±1℃静置沉淀，沉淀8小时后分离沉淀物和上清液。收集上清液，上清液中补加乙醇，使药液中乙醇的浓度为49%L/L时，在15±1℃下静置沉淀，沉淀8小时后收集沉淀得到硫酸皮肤素粗品1.4kg；b. 硫酸皮肤素的精制将上述1.4kg硫酸皮肤素粗品加纯化水溶解并定容至10L，用3mol/L盐酸溶液调节药液pH2.2后向溶液中加入11.2g亚硝酸钠（以硫酸皮肤素粗品湿重计），采用亚硝酸钠溶于45ml纯化水后加入药液中，在常温下搅拌反应2小时，静置24小时后在药液中加入500g氯化钠，搅拌溶解后，用3mol/L氢氧化钠溶液调整药液pH6.2，加入乙醇，使药液中乙醇的浓度为43%L/L，在15±1℃静置沉淀，沉淀16小时后收集沉淀得到硫酸皮肤素精品1.1kg，取样检测比旋度为-66.0°；取样检测如果若硫酸皮肤素不能满足比旋度≤-65°，须重复上述沉淀过程；当硫酸皮肤素检测结果符合要求后，则可进行以下氧化脱色；c. 硫酸皮肤素氧化脱色将1.1kg硫酸皮肤素湿精品加纯化水溶解并加水定容至4L后，在30±1℃下用3mol/L氢氧化钠溶液调整药液pH10.6后，加入40ml 30%的过氧化氢进行反应；d. 氧化后沉淀上述反应10小时后，向药液中加入140g氯化钠，氯化钠溶解后用3mol/L盐酸溶液调整药液pH6.3，再加入8L乙醇，然后在15±1℃静置沉淀，沉淀10小时后收集硫酸皮肤素沉淀；e. 硫酸皮肤素冷冻干燥向硫酸皮肤素沉淀中加入2000ml纯化水搅拌溶解后，补加纯化水定容至3000ml，将药液装入冻干盘放入冻干机中，开始对药液降温，当制品温度降至-57℃后，对整个系统抽真空，当干燥箱内真空度为14Pa后，对制品缓慢加热，当制品温度升至51℃后保温，保温3.5小时后制得硫酸皮肤素367g。经取样检测，硫酸皮肤素比旋度为-66.1°，抗凝效价为<2USPU/mg，分子量为25163，硫酸基与羧酸基比值1.0。经毛细管电泳测定，用硫酸皮肤素标准品做对照，测定制得的硫酸皮肤素样品的纯度为98.2%。实施例2：本实本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种肝素钠下脚料制备高纯度硫酸皮肤素工艺，其特征包括以下步骤：a. 粗分将肝素钠下脚料按湿重5～30%w/v浓度加入纯化水溶解后加入2～10%w/v氯化钠，氯化钠溶解后，调整药液pH4.0～6.5后加入乙醇，当药液中乙醇的浓度为30～38%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀2～10小时后将沉淀物与上清液分离，在分离的上清液中补加乙醇，当药液中乙醇的浓度为40～50%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀6～12小时后收集沉淀得到硫酸皮肤素粗品；b. 精制将上述硫酸皮肤素粗品按湿重10～50%w/v的浓度加入纯化水溶解后，调节药液pH2.0～2.5，再向药液中加入0.6～3.0%（w/w）亚硝酸钠后（以硫酸皮肤素粗品湿重计），在常温下搅拌反应2～5小时，然后静置24小时后加入1～6%（w/v）氯化钠，调整药液pH4.0～6.5后，加入乙醇，当药液中乙醇浓度为37～45%（v/v）时，在10～25℃静置沉淀，沉淀8～24小时后收集沉淀得到比旋度≤‑65°的硫酸皮肤素精品；c. 氧化脱色将硫酸皮肤素按湿重10～50%（w/v）加纯化水溶解后，在25～35℃下调整药液pH9.0～12.0后，加入过氧化氢进行反应，其中过氧化氢在药液中的浓度为0.5～4.0%v/v；d. 沉淀上述反应8～36小时后，按质量体积比向药液中加入1～6%的氯化钠，氯化钠溶解后调整药液pH4.0～6.5，再加入1.5～3.0倍药液体积的乙醇，然后在10～25℃下静置沉淀，沉淀8～24小时后收集硫酸皮肤素沉淀；e. 冷冻干燥将上述硫酸皮肤素沉淀物按湿重30～45%浓度加入纯化水溶解后降温，降温至‑40～‑60℃时抽真空，当真空度≤15Pa后缓慢加热，加热至50～55℃后保温，保温3～5小时后制得硫酸皮肤素。...
【技术特征摘要】
1.一种肝素钠下脚料制备高纯度硫酸皮肤素工艺，其特征包括以下步骤：a. 粗分将肝素钠下脚料按湿重5～30%w/v浓度加入纯化水溶解后加入2～10%w/v氯化钠，氯化钠溶解后，调整药液pH4.0～6.5后加入乙醇，当药液中乙醇的浓度为30～38%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀2～10小时后将沉淀物与上清液分离，在分离的上清液中补加乙醇，当药液中乙醇的浓度为40～50%v/v时，在10～25℃静置沉淀，沉淀6～12小时后收集沉淀得到硫酸皮肤素粗品；b. 精制将上述硫酸皮肤素粗品按湿重10～50%w/v的浓度加入纯化水溶解后，调节药液pH2.0～2.5，再向药液中加入0.6～3.0%（w/w）亚硝酸钠后（以硫酸皮肤素粗品湿重计），在常温下搅拌反应2～5小时，然后静置24小时后加入1～6%（w/v）氯化钠，调整药液pH4.0～6.5后，...
【专利技术属性】
技术研发人员：赵焕荣，田志鹏，张素艳，白文举，王鹏飞，高树华，
申请(专利权)人：河北常山生化药业股份有限公司，
类型：发明
国别省市：河北;13
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