一种制备低酸银杏叶提取物的方法技术

本发明专利技术涉及一种制备低酸银杏叶提取物的方法，包括以下步骤：(1)银杏叶粗提物与聚酰胺树脂混合；(2)超临界CO

Method for preparing low acid ginkgo leaf extract

The invention relates to a method for preparing low acid ginkgo leaf extract, which comprises the following steps: (1) mixing ginkgo leaf crude extract and polyamide resin; (2) supercritical CO;

【技术实现步骤摘要】
一种制备低酸银杏叶提取物的方法
本专利技术涉及一种中药有效成分提取分离方法，具体涉及一种制备低酸银杏叶提取物的方法。
技术介绍
银杏叶又名白果叶，是银杏科银杏属银杏的叶子。银杏是我国特有的物种，裸子植物，落叶乔木，是我国最古老的中生代孑遗稀有植物之一，素有“活化石”之称，其资源占世界总量的70％左右。虽然银杏叶作为药用已有很长历史，但自20世纪60年代起国内外学者对银杏叶的化学成分和药理作用进行了全面而系统的研究发现：银杏中的化学成分比较多，目前发现已有100多种，其中主要是黄酮类化合物、萜类内酯等。研究表明，银杏叶中含黄酮类化合物30多种，是优良的氧自由基清除剂和脂质抗氧化剂，对治疗和预防心脑血管疾病具有突出功效。银杏叶中的银杏内酯属萜类化合物，迄今尚未发现存在于其他植物中，具有独特的生理作用和治疗作用，是血小板活化因子的拮抗剂，尤其在预防和治疗气喘、肺过敏反应、抗凝血和防止脑血栓方面具有良好功效。银杏酸是银杏叶中含有的一种有机酸，是一类碳数13-17的烷基酸或烷基酚类化合物，被认为具有潜在的致敏和突变作用、强烈的细胞毒性，可引起严重的过敏反应、基因突变、神经损伤，导致恶心、胃灼热、过敏性休克、过敏性紫癜、剥脱性皮炎等不良反应。从药品安全性角度考虑，德国Schwabe公司于1991年在专利中提出银杏酸类化合物含量要求低于10ppm，德国卫生部又于1997年提出银杏酸含量应低于5ppm，如果制剂不能达标，将强制取消其注册号及销售权，《中国药典》2010版颁布的银杏叶提取物标准中要求黄酮醇苷含量大于24％、萜类内酯大于6％、银杏酸含量低于5ppm、水溶性大于5％。因此，在提取黄酮和内酯的同时，降低银杏酸量成了我们首要攻克的技术难题。低酸银杏叶提取物的生产工艺有多种，可从银杏酸的化学结构和物质性质入手进行研究。例如可以通过银杏酸的羧基与可溶性铅盐形成沉淀的方法去除银杏酸，但是铅盐有剧毒，在产品质量指标和环境排放中有严格要求，且难以与不含羧基的烷基酚形成沉淀，所以该方法不适用；由于银杏酸长链烷基的存在，使得银杏酸的极性大大减弱，水溶性差，所以可以通过冷却沉降提取液的方法析出银杏酸，专利技术专利CN102335209A公开了《超低酸水溶性银杏叶提取物的制备方法及产品》，利用絮凝沉淀结合冷藏的方法降低银杏酸含量，但此法比较粗糙，选择性不是太高，在降低银杏酸的同时也损失了有效成分；专利技术专利CN106038619A公开了《一种银杏叶提取物及其制备方法》，采用超临界CO2提取纯化和大孔树脂法有机结合，先采用超临界CO2萃取的方法进行初提，再进一步通过大孔树脂法进行纯化，其中虽然提到低温冷却可去除部分银杏叶酸，但是并未专门针对银杏叶酸含量进行严格控制。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，提供一种工艺简单，在高效提取黄酮和内酯的同时，能够有效脱除银杏酸的制备低酸银杏叶提取物的方法。本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为：一种制备低酸银杏叶提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)银杏叶粗提物与载体混合：将银杏叶粗提物用50～55℃无水乙醇溶解，过滤后滤液与聚酰胺树脂进行混合，加入的聚酰胺树脂与银杏叶粗提物的质量比为1～3：1；(2)超临界CO2萃取：将步骤(1)的混合物投入萃取釜中，封闭萃取釜，设定萃取的温度为50～65℃，压力为25～40MPa，CO2流量为2～3L/min，萃取时间为1～3小时，通入CO2进行萃取，收集分离釜中的产物；(3)加入改性剂萃取：通入体积分数为20～28％的乙醇改性剂进行超临界CO2萃取，萃取1～3小时，收集分离釜中的产物；(4)树脂梯度洗脱：将步骤(3)中经过超临界CO2萃取的吸附有银杏叶粗提物的聚酰胺树脂干法装柱，然后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，首先用体积分数为15～20％乙醇水溶液洗脱，然后用体积分数为72～78％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(5)浓缩：将步骤(4)所得的低浓度洗脱的洗脱液和步骤(3)分离釜中的产物减压浓缩，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(6)萃取：将步骤(5)所得浓缩液用乙酸乙酯萃取3～4次；(7)浓缩干燥：将步骤(6)所得的萃取液减压浓缩后水浴蒸干，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(8)醇沉：将步骤(7)所得的干燥品加入少量无水乙醇溶解，在-15～-25℃下静置36～60小时，析出絮状沉淀；(9)浓缩：将步骤(4)所得的高浓度洗脱的洗脱液减压浓缩，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(10)真空干燥：将步骤(8)所得的沉淀和步骤(9)所得的浓缩液在70～80℃，0.08～0.09MPa条件下分别进行真空干燥后，得到目标产物内酯和黄酮；(11)混合：将步骤(10)所得的内酯和黄酮混合得到目标产物。银杏酸为6-烷基水杨酸，其结构中虽有芳羟基和羧基等极性基团，但因6位上的侧链是碳数为13-17的长链，使得银杏酸为脂溶性成分、显弱极性，可溶于非极性的超临界CO2中。而银杏叶中的主要药用成分黄酮和内酯的极性较大，不加极性剂无法用超临界CO2萃取出来。所以利用超临界CO2不仅可以选择性的萃取出银杏叶中的银杏酸，且对其中的有效成分黄酮和内酯无影响。通入改性剂的超临界CO2流体中，同等压力下黄酮的溶解力比内酯大，所以降压后内酯优先析出，而黄酮则在树脂梯度洗脱时才大部分析出，超临界CO2流体萃取与树脂梯度洗脱结合，实现内酯和黄酮的精制纯化。作为优选，所述步骤(1)中银杏叶粗提物用52℃的无水乙醇溶解，加入的聚酰胺树脂与银杏叶粗提物的质量比为1：1。作为优选，所述步骤(2)中萃取的温度为55℃，压力为30MPa，CO2流量为2.5L/min，萃取时间为1小时。作为优选，所述步骤(3)中通入的改性剂为体积分数为25％的乙醇水溶液，萃取时间为2.5小时，该条件下黄酮基本上未被萃取出来，而内酯则在分离釜中得到了相当大地富集。作为优选，所述步骤(4)中梯度洗脱为首先用体积分数为17％乙醇水溶液洗脱，再用体积分数为75％乙醇水溶液洗脱。根据相似相溶原理，内酯被低浓度乙醇水溶液洗脱出，黄酮被高浓度乙醇水溶液洗脱出。作为优选，所述步骤(5)和步骤(9)中减压浓缩的温度为55℃，压力为0.08MPa。作为优选，所述步骤(6)中浓缩液用乙酸乙酯萃取三次。作为优选，所述步骤(7)中减压浓缩的温度为55℃，压力为0.08MPa。作为优选，所述步骤(8)中干燥品经无水乙醇溶解后，在-18℃下静置48小时。作为优选，所述步骤(10)中真空干燥的温度为80℃，压力为0.09MPa。与现有技术相比，本专利技术的优点：1.本专利技术采用超临界CO2萃取和聚酰胺树脂过柱结合的方法，首先在不加改性剂的条件下，采用超临界CO2萃取的方法脱除银杏酸，随后加入改性剂实现内酯和黄酮的初步分离，最后再对经过超临界CO2萃取的吸附有银杏叶粗提物的聚酰胺树脂进行梯度洗脱，进一步分离纯化内酯和黄酮，此方法在有效提取内酯和黄酮的同时，也脱除了银杏酸，制得的银杏叶提取物的银杏酸含量低于5ppm；该制备低酸银杏叶提取物的方法步骤设计合理，工艺简单，克服了现有技术工艺繁琐，不能在提取内酯和黄酮的同时高效脱除银杏酸的缺陷；其中本专利技术所述本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种制备低酸银杏叶提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)银杏叶粗提物与载体混合：将银杏叶粗提物用50～55℃无水乙醇溶解，过滤后滤液与聚酰胺树脂进行混合，加入的聚酰胺树脂与银杏叶粗提物的质量比为1～3：1；(2)超临界CO

【技术特征摘要】
1.一种制备低酸银杏叶提取物的方法，其特征在于，包括以下步骤：(1)银杏叶粗提物与载体混合：将银杏叶粗提物用50～55℃无水乙醇溶解，过滤后滤液与聚酰胺树脂进行混合，加入的聚酰胺树脂与银杏叶粗提物的质量比为1～3：1；(2)超临界CO2萃取：将步骤(1)的混合物投入萃取釜中，封闭萃取釜，设定萃取的温度为50～65℃，压力为25～40MPa，CO2流量为2～3L/min，萃取时间为1～3小时，通入CO2进行萃取，收集分离釜中的产物；(3)加入改性剂萃取：通入体积分数为20～28％的乙醇改性剂进行超临界CO2萃取，萃取1～3小时，收集分离釜中的产物；(4)树脂梯度洗脱：将步骤(3)中经过超临界CO2萃取的吸附有银杏叶粗提物的聚酰胺树脂干法装柱，然后用乙醇水溶液进行梯度洗脱，首先用体积分数为15～20％乙醇水溶液洗脱，然后用体积分数为72～78％乙醇水溶液洗脱，收集洗脱液；(5)浓缩：将步骤(4)所得的低浓度洗脱的洗脱液和步骤(3)分离釜中的产物减压浓缩，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(6)萃取：将步骤(5)所得浓缩液用乙酸乙酯萃取3～4次；(7)浓缩干燥：将步骤(6)所得的萃取液减压浓缩后水浴蒸干，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(8)醇沉：将步骤(7)所得的干燥品加入少量无水乙醇溶解，在-15～-25℃下静置36～60小时，析出絮状沉淀；(9)浓缩：将步骤(4)所得的高浓度洗脱的洗脱液减压浓缩，减压浓缩的温度为50～60℃，压力为0.07～0.09MPa；(10)真空干燥：将步骤(8)所得的沉淀和步骤(9)所得的浓缩液在70～8...

【专利技术属性】
技术研发人员：欧文静，安亚楠，王萌，唐小龙，盛雷，
申请(专利权)人：宁波中药制药股份有限公司，
类型：发明
国别省市：浙江,33