一种利用废弃茶渣制备抗氧化肽的方法技术

本发明专利技术涉及一种利用废弃茶渣制备抗氧化肽的方法，包括：利用碱溶酸沉法提取废弃茶渣中的蛋白质；采用复合蛋白酶对茶渣蛋白进行限制性酶解后，灭酶，制备茶渣蛋白酶解液；采用超滤膜对茶渣蛋白酶解液进行分离获得茶渣蛋白抗氧化肽混合液；将茶渣蛋白抗氧化肽混合液冷冻干燥；得到的茶渣蛋白抗氧化肽混合物具有高抗氧化活性，能有效抑制脂-肉体系的氧化变质，可以作为食品添加剂广泛应用于食品及相关领域中；本发明专利技术通过碱溶酸沉法可显著提高茶渣蛋白的提取率；通过控制酶解时间可有效控制蛋白的降解程度；通过超滤卷管式膜系统分离酶解液富集生物活性肽，分离操作工艺简单，提高生物活性肽的有效浓度。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及。
技术介绍
茶叶是我国的重要经济作物之一，也是我国农副产品出口中的重要产品。目前，国内外对茶叶功能性成分的研究，主要针对其水溶性成分，对茶多糖、茶多酚、咖啡碱的研究较多，而对占茶叶总干重为15% 30%的非水溶性茶叶蛋白的研究目前还很少。在茶叶有效成分的提取加工中，大量含有丰富茶叶蛋白的茶渣被废弃。在此背景下，如何充分利用这些茶叶蛋白以及研究其功效将成为茶叶研究的又一热门方向。我国茶叶资源十分丰富，但在茶叶生产过程中产生的大量茶末、修剪叶、甚至滞销的粗老茶，特别是茶饮料生产厂家水相浸提后的废弃物茶渣，到目前为止，对这些茶渣物的利用只停留在作为家禽饲料方面的研究，大量茶渣因为没有进一步的加工而全部当作废料处理。加工后的茶渣中仍然保留了绝大多数的蛋白质，造成了资源的巨大浪费，而且严重污染了环境。因此以茶叶残渣为原料，对茶叶蛋白进行深度开发和综合利用可以创造出巨大的社会效益和经济效益。随着现代食品工业的发展，食品加工中的油脂氧化问题亟待解决，通过添加具有抗氧化活性物质的方法可以增加食品体系的稳定性，目前采用的化学合成类抗氧化剂如ΒΗΤ、BHA, TBHA, TBHQ等虽然能抑制油脂氧化，却带来食品的安全性问题，因此对其使用要求也越来越高。
技术实现思路
本专利技术的目的在于针对现有技术存在的缺陷，提供，具有工艺操作简便、生产成本低、安全性高的优点。本专利技术的用废弃茶渣蛋白制备抗氧化肽的方法，包括如下步骤 (1)、碱溶酸沉利用碱溶酸沉法提取茶渣蛋白； (2)、酶解采用蛋白酶对提取的茶渣蛋白进行有限酶解，灭酶，冷冻干燥，制备茶渣蛋白多肽复合物； (3)、超滤采用超滤膜，选择截留分子量分别为<3500 Da、3500 8000 Da、> 8000Da的超滤膜对茶渣蛋白多肽复合物溶液进行分离，获得分子量< 3500 Da、3500 8000 Da或> 8000 Da的具有抗氧化活性的多肽复合物； (4)、冷冻干燥。步骤(I)中，所述碱溶酸沉的操作如下首先将茶渣沸水浴20-30分钟后纱布过滤得除杂后的茶渣，将除杂后的茶渣与O. 06-0. 25mol/L NaOH以w/v I :20-60的比例混合进行碱提，提取时间20-60min，温度50-100°C，提取后用纱布过滤，滤液为碱提的茶渣蛋白溶液，用盐酸调节碱提的茶渣蛋白溶液PH至2. 5-5. O进行蛋白沉淀，离心得沉淀蛋白，水洗至中性再次离心，将沉淀冷冻干燥即得茶渣蛋白。更优选地，所述碱溶酸沉的操作如下首先将茶渣沸水浴20-30分钟后纱布过滤得除杂后的茶渣，将除杂后的茶渣与O. 06-0. lmol/L NaOH以w/v I :40-60的比例混合进行碱提，提取时间40-60min，温度80_90°C，提取后用纱布过滤，滤液为碱提的茶渣蛋白溶液，用盐酸调节碱提的茶渣蛋白溶液PH至3-4进行蛋白沉淀，离心得沉淀蛋白，水洗至中性再次离心，将沉淀冷冻干燥即得茶渣蛋白。所述离心得沉淀蛋白中的离心条件是4000 r/min,4_10°C,离心10_20min。将步骤(2)得到的茶渣蛋白多肽复合物溶于蒸馏水中，配成浓度为O. 5-2. Omg/mL茶渣蛋白多肽复合物溶液。步骤(2)中，所述酶解的具体操作如下将茶渣蛋白溶解在水中使蛋白质量浓度达 O. 5-5. 5%，调节 pH 至 7. 0-7. 5，温度保持在 50-55°C，加入 Protamex 蛋白酶 200(T8000U/g茶渣蛋白，水解20-50min，水解度控制在8_10%，灭酶，冷冻干燥，得到茶渣蛋白多肽复合物。步骤(2)中所述灭酶的操作为酶解反应结束后,在沸水浴IOmin灭酶。以上w/v表示质量体积比,单位可以是g/ml或kg/L。本专利技术与现有技术相比，具有如下优点碱溶酸沉法提取废弃茶渣中的蛋白可显著提高废弃茶渣蛋白提取率，跟文献报道中所提到的水浸提法的提取率相比有显著的提高；通过控制茶渣蛋白酶解时间，得到具有显著抗氧化活性的生物活性肽；通过超滤卷管式膜系统对茶渣蛋白多肽复合物进行分离，得到不同分子量的抗氧化活性肽，使有效抗氧化肽得以富集。本专利技术具有工艺操作简便、生产成本低、安全性高等优点，既可解决大量废弃茶渣带来的污染问题，又能解除消费者对抗氧化剂在食品安全方面的顾虑，对科技、经济和食品业的发展将具有深远的意义。具体实施例方式实施例I 第一步将废弃茶渣沸水浴20-30分钟后纱布过滤得除杂后的茶渣，将茶渣与O. Imol/L NaOH以I :40 (w/v)混合进行碱提，提取时间60min，温度90°C，提取后用纱布过滤，滤液为碱提的茶渣蛋白溶液，用盐酸调碱提茶渣蛋白溶液PH至3. 0-4. O进行蛋白沉淀，离心沉淀蛋白，水洗至中性再次离心，将沉淀冷冻干燥即得茶渣蛋白，其提取率达71. 98%。第二步将茶渣蛋白溶解在水中使蛋白浓度达1.5%，用NaOH将溶液pH调节到7. 0-7. 5，温度保持在50°C，加入Protamex蛋白酶(诺维信生物酶制剂)6000U/g蛋白，采用甲醛滴定法测定水解度，取水解液5. OmL于小烧杯中，加入60mL蒸馏水，磁力搅拌下用O. 01mol/L标准NaOH滴定至酸度计指示pH8. 2，加入pH已调至8. 2的甲醛溶液20mL，记录将其PH滴至9. 2时所消耗的O. 01mol/L标准NaOH溶液的体积。计算公式 \Γ C Γ 离 uI I ； Pf0^ -h...—- " noι\ - Ti ■ : 00 DH:式中Λ V :滴定样品与滴定蛋白原液所消耗的标准NaOH溶液体积之差； C :NaOH标准溶液浓度(mol/L)； 胃原料克数(8)； V总酶解液的总体积(mL ); V :滴定取用的酶解液体积(mL)； n0 :水解前每克蛋白游离的氨基毫摩尔数(mmol/g)； η :水解后每克蛋白游离的氨基毫摩尔数(mmol/g)； htot :原料蛋白质中所含肽键总数(mmol/g)； Pro% :样品的蛋白质含量。水解度控制在9%，灭酶，冷冻干燥，得到茶渣蛋白多肽复合物。第三步将茶渣蛋白多肽复合物配成浓度为I. 5mg/mL茶渣蛋白多肽复合物溶液，利用超滤卷管式膜系统对茶渣蛋白多肽复合物进行分离，得到分子量3500 8000 Da的茶渣蛋白抗氧化肽混合液，将其冷冻干燥保存。采用邻二氮菲-Fe2+比色法测定羟基自由基清除能力。损伤管取O. 75 mmol/L邻二氮菲无水乙醇溶液0. 5mL加入0. 15mol/L磷酸盐缓冲液(pH 7.4) ImL和去离子水0. 5mL,充分混匀后加入0. 75mmol/L的FeSO4 0. 5mL,混匀后加入0. 01% (V/V )的H2O20. 5mL, 37°C水浴60min,在536nm下测其吸光值为A损。未损伤管以0. 5mL去离子水代替H2O2重复上述操作,在536nm下测其吸光值为A未损。样品管取0. 75mmol/L邻二氮菲无水乙醇溶液0. 5mL加入0. 15mol/L的磷酸盐缓冲液(pH 7. 4) ImL和样品溶液0. 5mL,充分混匀后加入 0. 75mmol/L 的 FeSO4 0. 5mL,混匀后加入 0. 01% (V/V本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种利用废弃茶渣制备抗氧化肽的方法，其特征在于包括如下步骤：（1）、碱溶酸沉：利用碱溶酸沉法提取茶渣蛋白；（2）、酶解：采用蛋白酶对提取的茶渣蛋白进行有限酶解，灭酶，冷冻干燥，制备茶渣蛋白多肽复合物；（3）、超滤：采用超滤膜，选择截留分子量分别为＜3500？Da、3500～8000？Da、＞8000？Da的超滤膜对茶渣蛋白多肽复合物溶液进行分离，获得分子量＜3500？Da、3500～8000？Da或＞8000？Da的具有抗氧化活性的多肽复合物；（4）、冷冻干燥。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：汪少芸，赵立娜，饶平凡，
申请(专利权)人：福州大学，
类型：发明
国别省市：