本发明专利技术公开了一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成。本发明专利技术操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取基因组DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于分子生物学
中组织细胞基因组DNA分离方法，具体涉及ー种用于组织细胞基因组DNA分离试剂及核酸吸附离心套管，采用该核酸吸附分离方法，能快速分离出组织细胞基因组DNA，分离出的DNA产量和纯度高，无蛋白质及RNA污染。
技术介绍
目前，国内外提取组织细胞中基因组DNA，利用蛋白酶消化后采用有机溶剂抽提的方法。该方法实验周期长、操作繁琐，提取的基因组DNA纯度和产量不高，常含有蛋白质和RNA的污染，直接影响下游实验工作。
技术实现思路
针对上实验方法存在的缺陷或不足，本专利技术的目的在于，提供ー种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，该方法能快速分离组织细胞中基因组DNA，其分离的DNA纯度和产量高、无蛋白质及RNA污染。为了实现上述任务，本专利技术采用如下的技术解决方案ー种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA ；所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为悬浮溶液0.01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量为去离子水；离解溶液0. 5-1OmoI/L胍盐，余量为去离子水；清除溶液0. l-10mol/L胍盐，0. 01_4mol/L C4H11NO3,余量为こ醇和去离子水的混合溶液(2:1，v/v)；洗涤溶液0. 01-8mol/L NaCl, 0. 001-3mol/L C4H11NO3，余量为こ醇和去离子水的混合溶液(2:1，v/v);分离溶液0.01-10mol/L EDTA,0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3,余量为去离子水。所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。本专利技术的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取血液DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。附图说明图I是实验流程图下面结合附图和实施例对专利技术进ー步详细说明。具体实施例方式按照本专利技术的技术方案，本专利技术的用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸提取试剂和核酸吸附离心套管。其中，核酸提取试剂包含悬浮溶液，离解溶液，清除溶液，洗涤溶液和分离溶液。所述的核酸提取试剂中，离解溶液的作用是使基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离,从而获得超纯的DNA。DNA提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为悬浮溶液0.01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量为去离子水；离解溶液0. 5-1OmoI/L胍盐，余量为去离子水；清除溶液0. l-10mol/L胍盐，0. 01_4mol/L C4H11NO3,余量为こ醇和去离子水的混合溶液(こ醇去离子水=2:1，v/v)；洗涤溶液0. 01_8mol/L NaCl, 0. 001-3mol/L C4H11NO3,余量为こ醇和去离子水的混合溶液(こ醇去离子水=2:1，v/v)；分离溶液0.01-10mol/L EDTA，0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3,余量为去离子水。核酸吸附材料为圆形纸片，核酸吸附离心套管包含内层吸附管和外层收集管，当每加一次试剂时需将内层吸附管插入到外层收集管中，经离心后弃去收集管中废液，再将吸附管插回收集管中，当最后加分离液时需将吸附管插入到ー干净(新的)的收集管中，再经过离心获得纯化的DNA。以下是专利技术人给出的具体实施例，操作流程參见图I所示I、收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，室温放置5min。2、加离解溶液混匀，室温放置5min。3、将液体吸入吸附管中，室温放置2min，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。4、加清除溶液，12000r离心30s，弃去收集管中的废液，将吸附管插回收集管中。5、加洗涤溶液，12000r,离心30s，弃去收集管中的废液。6、将吸附管插入ー干净的收集管中，加分离溶液室温放置2min后，12000r离心Imin，获得超纯的DNA。权利要求1.ー种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是 收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA ； 所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度(摩尔/升)组成按终浓度体积为悬浮溶液0. 01-0. 2mol/L C4H11NO3, 0. 001-0. 5mol/L EDTA，0. 0001-0. 9mol/LC15H28NaNO3,余量为去离子水； 离解溶液0. 5-lOmol/L胍盐，余量为去离子水； 清除溶液0. 1-lOmol/L胍盐，0.01-4mol/L C4H11NO3,余量为こ醇和去离子水的混合溶液； 洗涤溶液0.01-8mol/L NaCl,0. 001-3mol/L C4H11NO3，余量为こ醇和去离子水的混合溶液； 分离溶液0. 01-10mol/L EDTA，0. 001-0. 6mol/L C4H11NO3，余量为去离子水。2.如权利要求I所述的方法，其特征在于，所述核酸吸附离心套管包括内层吸附管和外层收集管，其中，内层吸附管中含吸附介质层，外层套管为液体收集管，使用时将内层吸附管插入到外层收集管中。全文摘要本专利技术公开了一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成。本专利技术操作简便，耗时短，提取的基因组DNA纯度高，无蛋白质及RNA污染。显示其较传统提取基因组DNA方法的优势，更体现出具有普及临床对疾病诊断和研究的应用价值。文档编号C07H1/08GK102864139SQ20121033275公开日2013年1月9日 申请日期2本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种用于组织细胞基因组DNA的核酸快速分离方法，其特征在于，该方法采用核酸吸附离心套管，用DNA提取试剂从匀浆后的组织或消化后的细胞中快速分离DNA，所述的DNA提取试剂由悬浮溶液、离解溶液、清除溶液、洗涤溶液、分离溶液组成，具体操作过程是：收集经匀浆后的组织或消化后的细胞，加悬浮溶液悬浮，然后用离解溶液将基因组DNA从组织或细胞中离解出来，通过核酸吸附管中吸附层的吸附，用清除溶液清除蛋白质及其他杂质，再用洗涤溶液清洗，最后用分离溶液使DNA与核酸吸附层脱离，从而获得超纯的DNA；所述的DNA提取试剂各组分及物质浓度（摩尔/升）组成按终浓度体积为：悬浮溶液：0.01？0.2mol/L？C4H11NO3，0.001？0.5mol/L？EDTA，0.0001？0.9mol/L？C15H28NaNO3，余量为去离子水；离解溶液：0.5？10mol/L胍盐，余量为去离子水；清除溶液：0.1？10mol/L胍盐，0.01？4mol/L？C4H11NO3,余量为乙醇和去离子水的混合溶液；洗涤溶液：0.01？8mol/L？NaCl，0.001？3mol/L？C4H11NO3，余量为乙醇和去离子水的混合溶液；分离溶液：0.01？10mol/L？EDTA，0.001？0.6mol/L？C4H11NO3，余量为去离子水。...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：饶国洲，李昂，苟建重，石建峰，魏红，
申请(专利权)人：西安交通大学口腔医院，
类型：发明
国别省市：
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