本发明专利技术提出EMS诱变W64A玉米花粉高效获得分蘖突变体的方法。涉及技术领域为EMS诱变玉米花粉的方法。本发明专利技术要解决获得玉米显性分蘖突变体所需EMS最适浓度和最适玉米自交品系等技术问题。国际通用(《玉米突变体手册Mutants?of?Maize》)EMS玉米花粉诱变浓度较大(9.99X10-3，体积比v/v)，国内公认EMS玉米花粉诱变浓度较小(6.67X10-4，体积比v/v)，且玉米自交系品种难以掌握，获得分蘖玉米突变体较少，遗传稳定性差。本发明专利技术采用EMS低浓度(9.99X10-4，体积比v/v)，处理玉米自交系W64A花粉，高效获得稳定遗传的分蘖玉米突变体，突变率达0.03％，稳定遗传率高达87.5％。本发明专利技术可高效获得具有农业增产和生物能源价值的分蘖突变体，拓宽玉米育种的种质范围，并提供较高学术价值的玉米突变体。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种EMS诱变玉米花粉的方法，特别是涉及到一种甲基磺酸乙酯EMS诱变W64A花粉高效获得分蘖突变体的方法。
技术介绍
玉米是世界上仅次于小麦·和水稻的农作物。通过杂交手段培育的新品种的发展空间较小，品种的抗逆性不全面。利用诱变技术培育玉米新品种，其变异范围广，可产生自然突变难以出现的新基因突变体。所以，玉米诱变技术是一种高效快速培育新品种的方法。目前，玉米诱变技术有化学诱变、电离辐射诱变以及空间诱变方法等。甲基磺酸乙酯EMS (Ethyl methanesulfonate)是目前在玉米上使用最广和使用效果最好的化学诱变剂。用EMS-石蜡油处理花粉，平均单个基因的显隐性突变率可达1/1000-1/10000，可以在较大的诱变后代群体中筛选出目标突变体。利用EMS处理玉米花粉的诱变技术不存在转基因产品的安全性问题，所以EMS化学诱变在2个世代(Ml、M2)就可创造迄今为止所积累的所有特用玉米类型，包括白玉米、甜玉米、糯玉米、超甜玉米、抗除草剂玉米、高油酸玉米和高直链淀粉玉米。利用EMS处理玉米花粉的诱变技术，不仅可以创造新型实用的具有经济价值的突变体种质资源，而且为玉米生长发育等基础性研究提供较高学术价值的玉米突变体。玉米分蘖突变体有3-10根独立的分蘖，可形成独立的根系、节点、内部节点、叶、玉米雌穗(玉米棒子)和雄穗。分蘖可增加产量和生物质，在农业生产和生物能源等领域有着重大的经济和社会效益。通过EMS诱变技术产生的玉米分蘖突变体比率较小，且遗传不稳定，主要原因是对EMS诱变溶液浓度和玉米自交品系的掌握。不同自交系对EMS的敏感程度不同，而且不同玉米自交系中的特定基因不尽相同，甚至一些重要的基因在某些玉米自交系中根本不存在，这就给重要突变体的筛选造成了障碍。目前，国际上通用的(如《玉米突变体手册Mutants of Maize)) )EMS玉米花粉诱变使用的浓度为9. 99X 1(Γ3(体积比ν/ν),国内公认的EMS玉米花粉诱变浓度为6.67Χ 10_4(体积比ν/ν)。本专利技术测试了不同EMS诱变溶液浓度(6. 67Χ Kr4 9. 99Χ 1(Γ3)以及不同玉米自交品系(W64A、Β73、Mo 17)对获得玉米分蘖突变体比率的影响。本专利技术获得了在玉米自交系W64A中可作为EMS诱发分蘖突变体的参考浓度9. 99Χ10_4(体积比，ν/ν)。
技术实现思路
EMS花粉诱变在玉米自交系W64A中高效获得分蘖玉米突变体的方法，其特征在于以下操作-下午(晴天)选取30株处于散粉早中期的W64A玉米自交系，给雄穗套袋；-下午(晴天)选取100株处于玉米授粉期的W64A玉米自交系，减去雌穗花丝顶立而并套袋;-次日上午8时(晴天)，取50晕升石腊油倒入200晕升量筒内，加入O.05晕升甲基磺酸乙酯EMS，制备成EMS诱变溶液，加入磁力搅拌子，在搅拌器上以IOOOrpm连续搅拌混匀；-9-10时(晴天)从30个雄穗中采集5毫升花粉，放入干燥的15ml塑料管中；-30分钟内将塑料管中的花粉倒入EMS诱变溶液，在搅拌器上以IOOOrpm连续搅拌混匀50分钟，分装至新的50毫升的塑料管；-20分钟内，用毛笔刷蘸着EMS处理的花粉，均匀刷在100株玉米雌蕊的花丝上，并套袋。整个授粉过程控制在30分钟内。EMS诱变溶液的配方 甲基磺酸乙酯EMS O. 05毫升石蜡油50毫升本专利技术EMS花粉诱变在玉米自交系W64A中高效获得分蘖玉米突变体的方法，有以下优点I.显性诱变率高EMS花粉诱变玉米自交系W64A Ml代26498植株中，除获得8株显性分蘖玉米突变体，突变率达O. 03%。此外，还获得其他显性突变体包括29株雄性不育、15株黄化苗、12株抽雄期提早、15株早熟、9株晚熟、59株矮杆、33株细杆、9株斑马条纹、17株带状条纹、2株顶端雌蕊、卷叶片7株等。平均显性诱变率高达O. 8%。2.特异性较强EMS诱变浓度9. 99X 10_4在玉米自交系W64A中，可高效获得8株分蘖显性突变体，获得率高达O. 03%。而相同浓度(9.99X 10_4)在不同的玉米自交系(B73、Mol7)中，获得率仅有O. 0038%。其他浓度(6. 67X 1(Γ4 9. 99X 1(Γ3)在相同玉米自交系W64A中，分蘖显性突变体的获得率仅有O. 0035%。3.稳定遗传在玉米自交系W64A中Ml代检测到的8株分蘖显性突变体，经与其他玉米自交系品种(Β73、Mo 17)杂交后，7株MlFl代均遵循分蘖性状正常性状=I I的分离规律，稳定遗传率达87. 5 %。然而，在玉米自交系Β73中代检测到的2株分蘖显性突变体，经与其他玉米自交系品种(W64A、Mol7)杂交后，只有I株在其MlFl代遵循分蘖性状正常性状=I I的分离规律，稳定遗传率达50%。4.简单易行设备要求简单，整个EMS处理花粉和授粉过程不足2小时。5.成本低试剂仅需甲基磺酸乙酯EMS(Ethyl methanesulfonate)化学诱变剂和石腊油(paraffinoil)。具体实施例方式下面详细说明本专利技术实施例本专利技术测试了不同EMS诱变溶液浓度(6. 67X 10_4 9. 99X 10_3)以及不同玉米自交品系(W64A、B73、Mol7)对获得玉米分蘖突变体比率的影响。试验重复5次。本专利技术获得了在玉米自交系W64A中可作为EMS诱发分蘖突变体的参考浓度9. 99X 10_4(体积比，v/ V)。表I.相同玉米自交系W64A中不同EMS浓度对产生分蘖显性突变体的影响权利要求1.EMS花粉诱变在玉米自交系W64A中高效获得分蘖玉米突变体的方法，其特征在于以下操作 -下午(晴天)选取30株处于散粉早中期的W64A玉米自交系，给雄穗套袋； -下午(晴天)选取100株处于玉米授粉期的W64A玉米自交系，减去雌穗花丝顶端并套袋; -次日上午8时(晴天)，取50晕升石腊油倒入200晕升量筒内，加入O. 05晕升甲基磺酸乙酯EMS，制备成EMS诱变溶液，加入磁力搅拌子，在搅拌器上以IOOOrpm连续搅拌混匀； -9-10时(晴天)从30个雄穗中采集5毫升花粉，放入干燥的15ml塑料管中； -30分钟内将塑料管中的花粉倒入EMS诱变溶液，在搅拌器上以IOOOrpm连续搅拌混匀.50分钟，分装至新的50毫升的塑料管； -20分钟内，用柔软的毛刷蘸着EMS处理过的花粉，均匀刷在100株玉米雌蕊的新鲜花丝上，并套袋。整个授粉过程控制在30分钟内。2.EMS花粉诱变在玉米自交系W64A中高效获得分蘖玉米突变体的方法，其特征在于EMS诱变溶液的配方浓度(9.99X10—4，体积比v/v) 甲基磺酸乙酯EMS O. 05毫升 石蜡油50毫升3.EMS花粉诱变获得分蘖玉米突变体的方法，其特征在于玉米自交品系W64A。全文摘要本专利技术提出EMS诱变W64A玉米花粉高效获得分蘖突变体的方法。涉及
为EMS诱变玉米花粉的方法。本专利技术要解决获得玉米显性分蘖突变体所需EMS最适浓度和最适玉米自交品系等技术问题。国际通用(《玉米突变体手册Mutants of Maize》)EMS玉米花粉诱变浓度较大(9.99X10-3，体积比v/v)，国内公认EMS玉米花粉诱变浓度较小(6.本文档来自技高网...
【技术保护点】
EMS花粉诱变在玉米自交系W64A中高效获得分蘖玉米突变体的方法，其特征在于以下操作：？下午(晴天)选取30株处于散粉早中期的W64A玉米自交系，给雄穗套袋；？下午(晴天)选取100株处于玉米授粉期的W64A玉米自交系，减去雌穗花丝顶端并套袋；？次日上午8时(晴天)，取50毫升石蜡油倒入200毫升量筒内，加入0.05毫升甲基磺酸乙酯EMS，制备成EMS诱变溶液，加入磁力搅拌子，在搅拌器上以1000rpm连续搅拌混匀；？9？10时(晴天)从30个雄穗中采集5毫升花粉，放入干燥的15ml塑料管中；？30分钟内将塑料管中的花粉倒入EMS诱变溶液，在搅拌器上以1000rpm连续搅拌混匀50分钟，分装至新的50毫升的塑料管；？20分钟内，用柔软的毛刷蘸着EMS处理过的花粉，均匀刷在100株玉米雌蕊的新鲜花丝上，并套袋。整个授粉过程控制在30分钟内。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：不公告发明人，
申请(专利权)人：匡贤彦，李伟，应开，
类型：发明
国别省市：
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