通过抑制膜结合转录因子肽酶，位点1(MBTPS1)的天然反义转录物来治疗MBTPS1相关疾病制造技术

本发明专利技术涉及调节膜结合转录因子肽酶，位点1(MBTPS1)的表达和/或功能的反义寡核苷酸，尤其是，通过靶向膜结合转录因子肽酶，位点1(MBTPS1)的天然反义多核苷酸。本发明专利技术还涉及这些反义寡核苷酸的鉴定和它们在治疗与MBTPS1表达相关的疾病和病症中的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本申请要求2009年12月16日提交的美国临时专利申请号61/286924的优先权，其以引用方式整体并入本文。本专利技术的实施方案包括调节MBTPSl及相关分子的表达和/或功能的寡核苷酸。
技术介绍
DNA-RNA杂交和RNA-RNA杂交对于核酸功能的许多方面是重要的，包括DNA复制、转录和翻译。杂交对于检测特定核酸或改变其表达的多种技术而言也至关重要。反义核苷酸，例如通过与靶RNA杂交从而干扰RNA剪接、转录、翻译和复制来破坏基因表达。反义DNA具有额外的特征，即DNA-RNA杂合体用作被核糖核酸酶H消化的底物，这是在大多数细胞类型中都存在的活性。反义分子可被递送到细胞中，如寡脱氧核苷酸(ODN)的情形，或反义分子可由内源基因表达为RNA分子。FDA最近批准了ー种反义药物VITRAVENE (用于治疗巨细胞病毒视网膜炎)，反映出反义药物具有治疗效用。专利技术概述提供该专利技术概述以展示本专利技术的内容，从而简要地指出本专利技术的性质和实质。应理解该专利技术概述的提交不会用来解释或限制权利要求书的范围或含义。在一个实施方案中，本专利技术提供通过利用靶向天然反义转录物任何区域的反义寡核苷酸，导致相应有义基因的上调而抑制天然反义转录物作用的方法。本文还预期，天然反义转录物的抑制可通过siRNA、核酶和小分子实现，它们被视为落在本专利技术的范围内。一个实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与包括SEQ ID NO: 2的核苷酸I至1240中的5至30个连续核苷酸的多核苷酸的反向互补序列具有至少50%序列同一性，从而在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达。在另ー个实施方案中，寡核苷酸靶向MBTPSl多核苷酸的天然反义序列例如SEQ IDN0:2所列的核苷酸以及其任何变体、等位基因、同系物、突变体、衍生物、片段和互补序列。 反义寡核苷酸的实例如SEQ ID N0:3至6所列。另ー实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与MBTPSl多核苷酸的反义的反向互补序列具有至少50%的序列同一'注；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达。另ー实施方案提供在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达的方法，其包括述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与MBTPSl反义多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少50%的序列同一'注；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中MBTPSl多核苷酸的功能和/或表达。在一个实施方案中，组合物包含一种或多种结合到有义和/或反义MBTPSl多核苷酸的反义寡核苷酸。在另ー实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰或取代的核苷酸。在另ー实施方案中，寡核苷酸包含一种或多种修饰的键。在又一实施方案中，修饰的核苷酸包含修饰的碱基，其包括硫代磷酸酷、膦酸甲酷、肽核酸、2’ -O-甲基、氟-或碳、亚甲基或其它锁核酸(LNA)分子。优选地，修饰的核苷酸为锁核酸分子，包括a-L-LNA。在另ー实施方案中，寡核苷酸经皮下、肌内、静脉内或腹膜内被施用于患者。在另ー实施方案中，寡核苷酸以药物组合物的方式施用。治疗方案包括向患者施用反义化合物至少一次；然而，可修改该治疗以包括经一段时间的多个剂量。该治疗可与一 种或多种其它类型的治疗联合。在另ー实施方案中，寡核苷酸被包封在脂质体中或被连接于载体分子(如，胆固醇、TAT肽)。其它方面在下文描述。附图简述图I是实时PCR结果的图,其示出通过用Lipofectamine 2000引入的硫代磷酸酯寡核苷酸处理H印G2细胞后与对照相比MBTPSlmRNA的倍数变化+标准差。实时PCR结果显示，用针对MBTPSl反义Hs. 568369设计的ー种寡核苷酸处理后48h，!fepG2细胞中MBTPSImRNA的水平显著增加。标为CUR-1317、CUR-1315、CUR-1316和CUR-1318的条柱分别对应用SEQ ID N0:3至6处理的样品。序列表描述-SEQ ID NO: I :智人膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl) ,mRNACNCBI检索号NM_003791)；SEQ ID NO:2 :天然 MBTPSl 反义序列(Hs. 568369) ；SEQ ID N0:3 至 6 反义寡核苷酸。*指示硫代磷酸酯键。专利技术详述下面參考用于说明的实例应用来描述本专利技术的多个方面。应理解的是，列出许多具体细节、关联和方法以提供对本专利技术的充分理解。然而，相关领域的普通技术人员将容易认识到，可在不存在一种或多种这些具体细节的情况下实践本专利技术或以其它方法实践本专利技术。本专利技术不限于行为或事件的顺序，因为ー些行为可以按不同顺序进行和/或与其它行为或事件同时进行。而且，并非所有列举的行为或事件都是实施根据本专利技术的方法所需的。本文公开的所有基因、基因名称和基因产物g在对应来自本文公开的组合物和方法可适用的任何物种的同系物。因此，这些术语包括但不限于来自人和小鼠的基因和基因产物。应理解的是，当公开来自具体物种的基因或基因产物时，此公开内容意为仅是示例，不应解释为限制，除非其出现的上下文中清楚地指明。因此例如对于本文公开的基因，其在一些实施方案中涉及哺乳动物核酸和氨基酸序列，意为涵盖来自其它动物的同源和/或直系同源基因和基因产物，所述其它动物包括但不限于其它哺乳动物、鱼、两栖类、爬行动物和鸟类。在一个实施方案中，基因或核酸序列是人的。定义本文所用的术语仅是为了描述具体实施方案的目的，不意为限制本专利技术。除非上下文另外清楚地指明，否则本文所用的単数形式“ー个/种”和“该/所述” g在包括复数形式。而且，在具体实施方式和/或权利要求中使用术语“包括”、“具有”、“带有”或其变化形式的程度上，此类术语以类似于术语“包含”的方式是包括在内的。术语“约”或“大约”是指对于由本领域普通技术人员确定的特定数值在可接受的误差范围内，其将部分地取决于如何測量或确定该数值，即，測量系统的限度。例如，按照本领域中的实践，“约”可表示在I个或多于I个标准差内。或者，“约”可表示直到给定数值的20%、优选10%、更优选5%、更优选1%的的范围。或者，尤其是有关生物系统或方法，该术语可表示在数值的ー个数量级内，优选地在5倍内，更优选地在2倍内。当在本申请和权利要求书中描述特定数值时，除非另外指明，否则应假设术语“约”对特定数值表示在可接受的误差范围内。本文所用的术语〃mRNA〃是指靶基因的目前已知的mRNA转录物和可阐明的任何进一步转录物。所谓“反义寡核苷酸”或“反义化合物”是指结合到另ー RNA或DNA (靶RNA、DNA)的RNA或DNA分子。例如，如果其为RNA寡核苷酸，则其借助于RNA-RNA相互作用结合到另一 RNA 革巴并改变革巴 RNA 的活性(Eguchi 等，(1991) Ann Rev. Biochem. 60，631-652)。反义寡核苷酸可上调或下调特定多核苷本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2009.12.16 US 61/286,9241.一种在体内或体外调节患者细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的至少一种反义寡核苷酸接触，其中所述至少一种寡核苷酸与包括SEQ ID NO:2 (图3)的核苷酸I至1240中的5至30个核苷酸的多核苷酸的反向互补序列具有至少50%序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达。2.一种在体内或体外调节患者细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的至少一种反义寡核苷酸接触，其中所述至少一种寡核苷酸与膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的天然反义的反向互补序列具有至少50%序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达。3.一种在体内或体外调节患者细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的至少一种反义寡核苷酸接触，其中所述寡核苷酸与所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的反义寡核苷酸具有至少.50%序列同一性；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中所述膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达。4.一种在体内或体外调节患者细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与至少一种靶向所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的天然反义寡核苷酸的区域的反义寡核苷酸接触；从而在体内或体外调节患者细胞或组织中所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的功能和/或表达。5.如权利要求4所述的方法，其中所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)的功能和/或表达相对于对照在体内或体外增加。6.如权利要求4所述的方法，其中所述至少一种反义寡核苷酸靶向膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的天然反义序列。7.如权利要求4所述的方法，其中所述至少一种反义寡核苷酸靶向包括膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的编码核酸序列和/或非编码核酸序列的核酸序列。8.如权利要求4所述的方法，其中所述至少一种反义寡核苷酸靶向膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)多核苷酸的重叠序列和/或非重叠序列。9.如权利要求4所述的方法，其中所述至少一种反义寡核苷酸包括选自以下的一种或多种修饰至少一种修饰的糖部分、至少一种修饰的核苷间键合、至少一种修饰的核苷酸及其组合。10.如权利要求9所述的方法，其中所述一种或多种修饰包括选自以下的至少一种修饰的糖部分2’ -O-甲氧乙基修饰的糖部分、2’ -甲氧基修饰的糖部分、2’ -0-烷基修饰的糖部分、二环的糖部分及其组合。11.如权利要求9所述的方法，其中所述一种或多种修饰包括选自以下的至少一种修饰的核苷间键合硫代磷酸酯、2’ -0甲氧乙基(MOE)、2’ -氟、膦酸烷基酯、二硫代磷酸酯、烷基硫代膦酸酯、氨基磷酸酯、氨基甲酸酯、碳酸酯、磷酸三酯、乙酰胺酯、羧甲基酯及其组合。12.如权利要求9所述的方法，其中所述一种或多种修饰包括选自以下的至少一种修饰的核苷酸肽核酸(PNA)、锁核酸(LNA)、阿拉伯糖-核酸(FANA)、类似物、衍生物及其组合 o13.如权利要求I所述的方法，其中所述至少一种寡核苷酸包括如SEQID N0:3至6所列的至少一种寡核苷酸序列。14.一种在体内或体外调节哺乳动物细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)基因的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的至少一种短干扰RNA (SiRNA)寡核苷酸接触，所述至少一种siRNA寡核苷酸对膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的反义多核苷酸具有特异性，其中所述至少一种siRNA寡核苷酸与所述膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的反义核酸分子和/或有义核酸分子的至少约五个连续核酸的互补序列具有至少50%序列同一性；以及，在体内或体外调节哺乳动物细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)的功能和/或表达。15.如权利要求14所述的方法，其中所述寡核苷酸与所述膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)多核苷酸的所述反义核酸分子和/或有义核酸分子互补的至少约五个连续核酸的序列具有至少80%序列同一性。16.一种在体内或体外调节哺乳动物细胞或组织中膜结合转录因子肽酶，位点I (MBTPSl)的功能和/或表达的方法，所述方法包括 将所述细胞或组织与长度为5至30个核苷酸的至少一种反义寡核苷酸接触，所述至少一种反义寡核苷酸对膜结合转录因子肽酶，位点I(MBTPSl)多核苷酸的有义和/或天然反义链的非编码序列和/或编码序列具有特异性，其中所述至少一种反义寡核苷酸与如SEQIDNO:l、2所列的至少一种核酸序列具有至少50%序...

【专利技术属性】
技术研发人员：J·克拉德，O·霍克瓦舍曼，
申请(专利权)人：库尔纳公司，
类型：发明
国别省市：