本发明专利技术提供一种酰化肽或蛋白质的氨基的方法，该方法包括：a)在碱存在下，在质子溶剂中，将具有至少一个游离氨基的肽或蛋白质与通式I所示的酰化试剂反应，其中，n＝0-8；R1是COOR4；R2是亲脂部分；R3表示与羧基连接后形成活性酯或活性N-羟基亚氨酸酯的基团如N-羟基丁二酰亚胺基；和R4选自氢、C1-12烷基和苄基；和b)如果R4不是氢，在碱性条件下皂化酰化了的肽酯基(COOR4)；以得到N-酰化的肽。本发明专利技术酰化肽或蛋白质的氨基的方法采用质子溶剂，收率高，如通过分析RP-HPLC，表明反应混合物含有85％以上(峰面积)的产品，且质子溶剂毒性低价格低廉。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及将一个或多个酰基引入肽或蛋白质中的方法。更具体地说，本专利技术涉 及将天然存在的GLP-I或其类似物中含有赖氨酸残基的e-氨基酰化的改进方法。
技术介绍
利拉鲁肽（liraglutide，1)是人胰高血糖素样肽I(glucagon-likepeptide-1, GLP-1)的类似物，由丹麦诺和诺德公司研制，适用于单用二甲双胍或磺脲类药物最大可耐 受剂量治疗后血糖仍控制不佳的2型糖尿病患者。利拉鲁肽（liraglutide，1)的结构式为Arg34Lys26-(N_ e_(Y-Glu (N-a-十六酰 基）））-GLP_l。 中国专利申请CN1344248提供了酰化肽或蛋白质上的一个或多个氨基的方法，该 方法包括：在碱性条件下，在非质子传递极性溶剂和水的混合物中，将具有至少一个游离氨 基的肽（或蛋白质）与酰化试剂反应；该方法采用高沸点的N-甲基吡咯烷酮（NMP)与水的 混合溶剂作为反应溶剂，其收率通过分析RP-HPLC，发现反应混合物含有77% (峰面积）的 Arg34Lys26 -GLP-I。
技术实现思路
术语定义 术语"C3-39烷基"、"C3-39链烯基"和"C3-39链二烯基"分别包括C3-39直链和 支链烃基，优选为直链饱和、单不饱和二不饱和的C3-39烃基。C3-39烷基的具体实例为庚 基、壬基、十一烷基、十三烷基、十五烷基、十七烷基和十九烷基。 术语"留族残基"是指亲脂基团，其与和R2相连的羰基一起衍生于留族羧酸，即， 衍生于三_、四-和五环全饱和或部分不饱和C16_36烃，所述基团R2_C( = 0)-的实例是石胆 酸酰基（Iithocholoyl)、脱氧胆酸酰基（deoxycholoyl)和胆酸酰基（choloyl)。 术语"约"或"大约"通常是指在给定的值或范围的10%以内，适当地在5%以内 或者是在3 %以内。或者，对于本领域普通技术人员而言，术语"约"或"大约"表示在平均 值的可接受的标准误差范围内。 -种酰化肽或蛋白质的氨基的方法，该方法包括： 在碱存在下，在质子溶剂中，将具有至少一个游离氨基的肽或蛋白质与通式I的 酰化试剂进行酰化反应，【主权项】1. 一种酰化肽或蛋白质的氨基的方法，该方法包括： 在碱存在下，在质子溶剂中，将具有至少一个游离氨基的肽或蛋白质与通式I所示的 酰化试剂进行酰化反应，其中，n= 0-8 #是COOR4;R4选自氢； R2是亲脂部分；R3表示羧基的保护基团，可以是C1-C10的烷基或N-羟基丁二酰亚胺基 式（a)所示2. 根据权利要求1所述的方法，所述的酰化试剂是N-十六烷酰基谷氨酸y-N-羟基丁 酰亚氨酯，其结构如式（la)所示：3. 根据权利要求1所述的方法，所述的肽或蛋白质为GLP-1和其类似物，其 为Arg26-GLP-1、Arg34-GLP-1、Lys26-GLP-1、Arg26'34Lys36-GLP-l、 Arg26'34Lys38-GLP-l、Arg26'34Lys39-GLP-l、Arg26'34Lys4〇-GLP-l，或者为 Arg34-GLP-1 。4. 根据权利要求1所述的方法，所述的质子溶剂为醇类溶剂或水，或醇类溶剂与水的 混合溶剂，或者为甲醇、乙醇、异丙醇、正丁醇、或其组合；或者为甲醇，或者为水。5. 根据权利要求1所述的方法，所述的质子溶剂为乙醇与水的混合溶剂。6. 根据权利要求1所述的方法，在所述的混合溶剂中，醇类溶剂与水的体积比为大约 7:1至大约1:10，。7. 根据权利要求1所述的方法，所述的碱为烷基胺，选自三乙基胺、二乙胺、N，N-二异 丙基乙基胺或苯胺的一种或几种。8. 根据权利要求7所述的方法，相对于1. 0摩尔的肽，所述烷基胺的用量为40. 0摩尔 以上，或者为大约50摩尔至大约300摩尔，或者为大约60摩尔。9. 根据权利要求1所述的方法，所述酰化反应温度为5°C-35°C，或者为大约20°C。10. 根据权利要求1-9任一所述的方法，其包括：将2. 62g的Arg34-GLP-l溶 解于370ml的水中，控温20°C，搅拌下加入4. 73g三乙胺，然后加入N-十六烷酰基谷氨酸 Y-N-羟基丁酰亚氨酯（1. 13g)，反应2h后，取反应液0. 5ml，加入乙腈：水=1:1溶液稀释 至1. 5ml，送RP-HPLC检测，当液相检测Arg34-GLP-1的含量低于1 % (峰面积）后，终 止反应，后处理：用lmol/LHAc溶液调pH至中性，淬灭反应。【专利摘要】本专利技术提供一种酰化肽或蛋白质的氨基的方法，该方法包括：a)在碱存在下，在质子溶剂中，将具有至少一个游离氨基的肽或蛋白质与通式I所示的酰化试剂反应，其中，n＝0-8；R1是COOR4；R2是亲脂部分；R3表示与羧基连接后形成活性酯或活性N-羟基亚氨酸酯的基团如N-羟基丁二酰亚胺基；和R4选自氢、C1-12烷基和苄基；和b)如果R4不是氢，在碱性条件下皂化酰化了的肽酯基(COOR4)；以得到N-酰化的肽。本专利技术酰化肽或蛋白质的氨基的方法采用质子溶剂，收率高，如通过分析RP-HPLC，表明反应混合物含有85％以上(峰面积)的产品，且质子溶剂毒性低价格低廉。【IPC分类】C07K1-107, C07K14-605【公开号】CN104558097【申请号】CN201410823253【专利技术人】吴亚克, 黎达生, 陈志军 【申请人】广东东阳光药业有限公司【公开日】2015年4月29日【申请日】2014年12月23日本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种酰化肽或蛋白质的氨基的方法，该方法包括：在碱存在下，在质子溶剂中，将具有至少一个游离氨基的肽或蛋白质与通式I所示的酰化试剂进行酰化反应，其中，n＝0‑8；R1是COOR4；R4选自氢；R2是亲脂部分；R3表示羧基的保护基团，可以是C1‑C10的烷基或N‑羟基丁二酰亚胺基式(a)所示
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：吴亚克，黎达生，陈志军，
申请(专利权)人：广东东阳光药业有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44
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