本发明专利技术涉及用于制备免疫配体/效应分子结合物的方法，该方法包括通过序列特异性转肽酶或其催化域将效应分子结合至免疫配体(图6b)。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及制备免疫配体/效应分子（payload)结合物的方法。
技术介绍
目前用于标记蛋白和/或将分子结合至蛋白（尤其是当涉及小分子效应分子或标 记时）的主要方法，包括在化学结合（conjugation)中使用特异性连接子（linker)分子， 将效应分子共价连接至蛋白质的自由赖氨酸和/或半胱氨酸。 但是，许多蛋白质，例如免疫靶向策略中尤为感兴趣的抗体，都是较大的蛋白质， 可能包含多个赖氨酸和半胱氨酸残基。由于连接子介导的化学结合是一种随机过程，因此， 连接子介导的效应分子化学连接反应得到的是结合蛋白的不同种混合物，其在疗效和/或 诊断用途上可能不同。显然，蛋白-效应分子结合物还给治疗性结合物的常规审批流程带 来了显著困难，因为出于潜在安全顾虑，有关管理部门对其批次差异和/或活性药学成分 (API)差异存在负面看法。 此外，若期望限定蛋白负载的效应分子比例，则常需要根据期望的结合化学计量 配比来纯化结合物。这不仅枯燥，而且可能限制提高生产过程中的商品成本，因为通常仅 有部分连接子介导的结合蛋白具有期望的效应分子比例。对治疗相关的抗体/药物结 合物（ADCs)而言尤为如此，其中根据所用的毒素，3-4个毒素分子似乎较为有利，但在典 型的连接子介导的化学结合反应中，存在每个抗体结合0-8个毒素的情况（Panowski et al. (2014)) 〇 虽然存在上述缺陷，目前临床测试中所用的或由卫生部门批准用于疾病治疗的 全部抗体/药物结合物，都是毒性小分子药物与抗体通过连接子介导的化学结合获得的 (Lambert (2012)或 Milliard(2013)).。 本领域的工业和科学专家们普遍认同，分子效应分子（包括毒性或标记分子）与 免疫配体的位点特异性化学计量配比结合，与连接子介导的化学结合反应相比，具有显著 优势。因此，存在以蛋白质结构中特定氨基酸作为化学结合反应目标的尝试（Panowski et al. (2014)) 〇 -方面，尝试通过蛋白质结构中某些位置上的突变，来删除多余结合位点和/或 提供作为连接子连接反应目标的期望结合位点（例如，赖氨酸和/或半胱氨酸残基）。 另一方面，尝试通过在某些位点加入非天然氨基酸，例如硒代半胱氨酸、对叠氮基 苯丙氨酸或乙酰苯丙氨酸（Hofer et al. (2009) ,Axup et al. (2012)，或Lemke (2011))，以 控制化学结合反应。 但是，所有这些途径都改变了将结合的蛋白质主要氨基酸序列，可能造成不期望 的功能性质。此外，上述非天然氨基酸的加入通常效率低下，且不能够对蛋白定量加入特异 性标记位点。
技术实现思路
因此，存在克服随机结合方法的已知问题的迫切产业需求，尤其是对于治疗相关 的免疫结合物的制备，包括但不限于ADCs。 因此，本专利技术的目标之一，在于提供一种联合免疫配体和效应分子（例如药物、毒 素、细胞因子、标记等）以制备位点特异结合抗体药物结合物的高效方法，优选为将全长单 克隆抗体结合至小分子量毒素。 本专利技术的又一目的在于，制备疗效更佳和/或生产再现性更高的免疫配体/效应 分子结合物。 本专利技术的又一目的在于，允许以位点特异性和/或序列特异性方式，将效应分子 与免疫配体结合。 本专利技术的又一目的在于，制备保存其组成部分的特征性质的免疫配体/效应分子 结合物，例如靶向亲和性、靶向特异性、靶向敏感性、溶解性、药理学功能等。 上述目的通过独立权利要求的主题达成，同时，其优选实施方式进一步公开于从 属权利要求及说明书中。 概念定义 本申请所称术语"免疫配体"意在限定一种对指定目标（例如受体、细胞表面蛋 白、细胞因子等）具有亲和性的实体、药剂或分子。可选地，所述免疫配体可以阻断或降低 激动剂介导的应答，或抑制受体-激动剂相互作用。但是，最重要的是，该免疫配体可用作 将效应分子递送到特异位点的穿梭载体，所述特异位点由所述免疫配体所识别的标靶所限 定。因此，免疫配体以例如但不限于一种受体为标靶，将其效应分子递送至以含有大量所述 受体为特征的位点。免疫配体包括但不限于，抗体、抗体片段、给予抗体的结合蛋白、拟抗 体、受体、可溶性诱饵受体、对指定标靶具有亲和性的支架蛋白，以及受体的配体。 "抗体"，以及其同义词"免疫球蛋白"（Ig)通常包含4条多肽链，其中有2条重链 (H)和2条轻链（L)，因此是多亚基蛋白或其等同Ig同系物（例如，含有仅一条重链的骆 驼科纳米抗体，可源于一条重链或轻链的单域抗体（dAbs));包括全长功能性突变体、变体 或其衍生物（包括但不限于，鼠科抗体、嵌合抗体、人源化抗体和全人抗体，其能够保存Ig 分子的必要表位结合特征），还包括双特异性、多特异性和双可变域免疫球蛋白，免疫球蛋 白分子可以是任何种类（例如，IgG, IgE, IgM, IgD, IgA,和IgY)或子类（例如IgGl，IgG2， IgG3, IgG4, IgAl，和IgA2)和同种异型体。 本申请所称的"基于抗体的结合蛋白"可以指其他非免疫球蛋白或非抗体衍生成 分的情况中，任何包含至少一个抗体衍生的VH，\，或Ch免疫球蛋白域的蛋白。所述基于抗 体的蛋白包括但不限于，（i)结合蛋白的F。-融合蛋白，包括具有部分或全部免疫球蛋白Ch 域的受体或受体成分了；（ii)VjP/或V 或连接替代性分子骨架的结合蛋白；或（iii)含 有以通常不存在于天然抗体或抗体片段中的方式结合和/或组装的免疫球蛋白％和/或 或的分子。 本申请所称的"抗体药物结合物"（ADC)指的是与小分子量活性药学成分（API) 连接的抗体或抗体片段或基于抗体的结合蛋白，其中API包括但不限于毒素（包括，例如， 但不限于，微管蛋白抑制剂、肌动蛋白粘合剂、RNA聚合酶抑制剂、DNA插入和修饰/破坏药 物）、激酶抑制剂或任何干扰细胞生存必需的和/或特定生理细胞通路必需的特定细胞通 路的API。 本申请所称的"抗体衍生物或片段"指的是包含至少一种源于非全长抗体的多肽 链的分子，包括但不限于：（i)Fab片段，其为由轻链可变域（\)、重链可变域（V H)、轻链恒 定域（Q)和重链恒定域I(ChI)组成的单价片段；（ii)F(ab'）2片段，其为包含由铰链区二 硫键连接的2个Fab片段组成的二价片段；（iii) Fab (Fd)片段的重链部分，由VjP C H1域组 成；（iv)可变片段（Fv)片段，由抗体单臂上的\和V "域组成；(V)域抗体（dAb)片段，其 包含单可变域；(vi)分离的互补决定区（CDR) ; (vii)单链Fv片段（sc Fv) ; (viii)双特异 抗体，其为在单一多肽链上表达但使用了其长度不允许同链两域配对的连接子的％和Vl 域的双价、双特异性抗体，由此迫使所述域与另一条链的互补区配对形成2个抗原结合部 位；以及（ix)线形抗体，包含一对与互补轻链多肽共同形成一对抗原结合区的串联F v片段 (Vh-ChI-Vh-ChI);和（X)其他免疫球蛋白轻链和/或重链的非全长部分，或其突变体、变体 或衍生物，或其组合。 本申请所称的"修饰抗体形式"包含抗体_药物-结合物、聚亚烷基氧化物修饰的 sc Fv、单体抗体、双体抗体、胳盤科抗体、域抗体、双特异性或三特异本文档来自技高网...
【技术保护点】
用于制备免疫配体/效应分子结合物的方法，所述方法包括：通过序列特异性转肽酶或其催化域，将效应分子连接到免疫配体上。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：乌尔夫·格劳乌德，罗格·伦佐·贝利，
申请(专利权)人：恩比伊治疗股份公司，
类型：发明
国别省市：瑞士;CH
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