本发明专利技术提供了一种通过把蒽醌-1，5-二磺酸加到酰化反应混合物中以从该酰化反应混合物中分离头孢克罗的方法。该酸与头孢克罗高选择性地形成沉淀，所以简化了分离和回收步骤。（*该技术在2014年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
在酶催酰化反应后分离头孢克罗的改进方法专利
本专利技术涉及由酶催酰化反应混合物中分离头孢克罗的工业便利方法，其是通过使头孢克罗与蒽醌二磺酸以2∶1盐的形式从混合物中沉淀出来。专利技术背景在美国专利3,816,253中公开了一种通过将氨基酸衍生物与7-氨基头孢菌素核缩合制备头孢菌素类化合物的酶催方法。在美国专利申请号07/874,257(1992年4月24日提交)(X-8505)中公开了一种制备头孢菌素类的改进的酶催方法，特别涉及的是将相应的7-氨基头孢菌素核与氨基酸缩合制备头孢菌素的改进的酶催方法。迄今，在这种酶催酰化反应之后，有价值的化合物，即头孢克罗是处于复杂的环境中，该环境中不仅含有头孢菌素核而且含有苯基甘氨酸、D-苯基甘氨酸甲酯及其盐。根据这种混合物的复杂性，采用了一系列分离柱来分离头孢克罗，当然，这既造成产物损失也花费时间。由以上看出，在本
中需要的是从复杂的酰化反应混合物中选择性分离头孢克罗的方法。本专利技术概述现已发现通过将酶催酰化反应混合物用蒽醌-1，5-二磺酸或其碱金属盐处理，可以从该酶催酰化反应混合物中选择性分离-->头孢克罗或其盐，该酶催酰化反应混合物包括头孢菌素核、苯基甘氨酸和D-苯基甘氨酸甲酯和其盐。当蒽醌二磺酸与以上所列的其他化合物形成盐的同时，该酸的加入选择性地从酶催反应混合物中沉淀出头孢克罗与蒽醌-1，5-二磺酸生成的2∶1的盐，这样就提供了一种有效的、花时间少的从酶催酰化反应混合物中分离头孢克罗的方法。令人惊奇的是，从该混合物中沉淀出头孢克罗/酸盐具有高的选择性。在1989年11月15日公开的欧洲专利申请341,991中描述了头孢克罗/酸盐本身。本专利技术的描述本专利技术的方法可用于分离下式(I)的头孢克罗或其盐：该酶催方法按流程I所概括的方式进行：-->用于该酶催方法中的酰基转移酶可以从任何已知的微生物源衍生得到，其中，有如下的微生物：黄单胞菌属(Xanthomonas)、假单胞菌属(Pseudomonas)、气单胞菌属(Aeromonas)、埃希氏杆菌属(Escherichia)、节细菌属(Arthrobacter)、棒状杆菌属(Corynebacterium)和杆菌属(Bacillus genera)。优选的是使用从大肠埃希氏杆菌(EscherichiaColi)ATCC9637衍生得到的青霉素酰基转移酶。酶催酰化反应和其后的分离是在一个含水的体系中进行的。然而，可以使用适宜的有机溶剂，它们包括乙二醇、低级醇(例如甲醇、乙醇、异丙醇、2-丁醇)、丙酮等。酶催酰化反应可以在本
中所述的温度下进行，其后的沉淀/分离步骤可以在约-->0°-约25℃的温度下进行，优选的温度范围是0°-10℃。以每摩尔待分离的头孢克罗需要约0.5摩尔-约2摩尔的量将蒽醌-1，5-二磺酸加入到酰化反应混合物中。该酸的优选摩尔用量是每摩尔待分离的头孢克罗需要0.5-0.7摩尔。该酸可以是碱金属盐(钠或钾)的形式。沉淀/分离步骤可以在pH约1.0-约4.0的条件下进行，优选的pH范围为约1.3-约1.7。该pH可以通过加入适宜的酸如盐酸和/或碱如三乙胺来控制。在头孢克罗/酸盐分离之后，可以用已知方法形成头孢克罗一水合物。例如，可以将该盐溶解在DMF/水混合物中，该混合物的pH可以提高到约5.7，从中结晶出头孢克罗DMF溶剂化物。然后，可将该DMF溶剂化物加入低pH(0.5-1.0)的水中，以溶解该混合物，在pH3.5时头孢克罗一水合物从中结晶出来。下面举例说明本专利技术。 制备例1 7-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3- 头孢烯-4-羧酸盐，内盐-->在烧杯中，将7-ACCA(1)(0.9388g，4.0007m mol)和96.0ml水混合，pH是4.12。将3mol NH3(1.78ml)加到该烧杯中，pH是7.57。将D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(4.7594g，23.602m mol)加到该烧杯中，pH是5.68。把该混合物冷却到5℃，向该混合物中加入3mol NH3(1.90ml)使pH升到7.00。加入酶(6.1442g，940IU/g的核)。由HPLC分析，得到下面的反应速度数据： 时间 pH 温度 化合物 化合物 化合物 1 2 3 (分钟) (℃) 剩余的％ 剩余的％ 形成的％ 0 7.00 6 100 100 - 85 6.28 5 9.2 67.1 91.4 120 6.16 4 9.1 64.3 91.5 180 5.97 4.5 8.9 63.7 91.8 200 5.91 4.5 8.8 65.3 93.0-->在时间＝200分钟时，过滤该混合物(除去固定化酶)，就地得产率为93％的标题产物。 实施例17-(D-2-铵-2-苯基乙酰氨基)-3-氯-3- 头孢烯-4-羧酸盐，内盐A.酰化反应(1)将7-ACCA(1)(4.8338g，20m mol)和150ml水在烧杯中混合，pH是3.67。把3mol NH3(8.40ml)加入该烧杯中，pH是8.20。把D-苯基甘氨酸甲酯盐酸盐(2)(23.0g，114m mol)加到该烧杯中，pH是5.29。用白色硅藻土载体过滤器(hyflofilter)过滤该混合物，并用10.0ml水洗涤。该混合物的体积是310ml。将该混合物转移到较大的烧杯中，并用5ml水冲洗。把该混合物冷-->却到1℃，向该混合物中加入3mol NH3(16.6ml)，使pH升到7.28。加入酶(15.34g，500IU/g的核)。145分钟后过滤该反应混合物除去酶，就地得到(3)的产率是89.8％。B.分离将该反应混合物冷却到5℃，其pH是6.65。把蒽醌-1，5-二磺酸2Na(纯度72.3％，10m mol)加入，并搅拌该混合物5分钟，该混合物的温度是4℃，pH是6.72。加浓盐酸(2.3ml)使pH为2.4，并用头孢克罗/蒽醌-1，5-二磺酸盐接种该混合物，再搅拌该混合物2分钟，其pH是3.3。加入浓盐酸(3.9ml)，混合物的pH是1.5，再搅拌该混合物30分钟，混合物的温度是1℃，pH是1.4。过滤出该固体沉淀物并用75ml水洗涤，然后用50ml丙酮洗涤。滤液中含有苯基甘氨酸和化合物(1)和(2)。该沉淀物即(3)和蒽醌-1，5-二磺酸的2∶1盐含就地产生的(3)量为99.8％。 实施例2 以DMF溶剂化物形式的头孢克罗的分离把头孢克罗/蒽醌-1，5-二磺酸盐(11.06/18.5m mol)放入250ml烧杯中，并加123ml为85/15的DMF/水溶液，其pH是3.85。用头孢克罗/酸盐接种该混合物，并在本文档来自技高网...
【技术保护点】
1.一种从酰化反应混合物中分离头孢克罗或其盐的方法，该方法包括把蒽醌-1，5-二磺酸或其碱金属盐加到所述混合物中以形成2∶1头孢克罗/蒽醌-1，5-二磺酸盐的步骤。
【技术特征摘要】
1993.02.05 US 08/014,0151.一种从酰化反应混合物中分离头孢克罗或其盐的方法，该方法包括把蒽醌-1，5-二磺酸或其碱金属盐加到所述混合物中以形成2∶1头孢克罗/蒽醌-1，5-二磺酸盐的步骤。2.如权利要求1所述的方法，其中所述的酰化反应混合物包括下式的化合物：3.如权利要求2所述的方法，其中所述的酰化反应混合物包括苯基甘氨酸或其盐。4.如权利要求3所述的方法，其中所述的酰化反应混合物包括D-苯基甘氨...
【专利技术属性】
技术研发人员：J·P·加德纳，
申请(专利权)人：伊莱利利公司，
类型：发明
国别省市：美国;US
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