本发明专利技术公开了用于分离和纯化抗-IL-13抗体的方法，其中亲和色谱步骤的使用会产生对于药用而言足够纯的抗体组合物。本发明专利技术描述的方法包括pH病毒减少/灭活、超滤/渗滤、亲和色谱法（例如，蛋白A亲和色谱法）、离子交换色谱法和疏水色谱法。此外，本发明专利技术涉及包含一种或多种本发明专利技术的抗体的药物组合物。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】使用蛋白A亲和色谱法分离和纯化抗-IL-13抗体相关申请的交叉引用 本申请要求2009年10月20日提交的美国临时申请系列号61/253,411的权益，该申请通过引用整体并入本文。
技术介绍
人IL-13是从活化的T细胞克隆出的ー种17-kDa糖蛋白，并由1\谱系的活化T细胞、ThO和ThI⑶4+ T细胞、⑶8+ T细胞和几种非-T细胞群体(诸如肥大细胞)生成(Zurawski^Pde Vries, 1994 Tmmunol Today, 15, 19-26)。IL-13 会促进人 B 细胞中的免疫球蛋白同种型转换成 IgE (Punnonen, Aversa 等人 1993 Proc Natl Acad Sci USA90 3730-4)，并抑制人和小鼠中的炎症性细胞因子生产(de Waal Malefyt等人，1993，JImmunol, 151，6370- 81; Doherty 等人，1993，J Immunol, 151，7151-60)。IL-13 会 结合它的细胞表面受体IL-13Ra I和IL-13Ra 2。IL-13Ra I以低亲和力(KD IOnM)与IL-13相互作用，随后被IL-4R募集，以形成高亲和カ(KD O. 4 nM)信号传递异源ニ聚受体复合物(Aman 等人，1996，J Biol Chem, 271，29265-70; Hilton 等人，1996，ProcNatl Acad Sci USA, 93，497-501)。所述 IL-4R/IL-13Rα I 复合物在诸如 B 细胞、单核细胞/巨噬细胞、树突细胞、嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞、成纤维细胞、内皮细胞、气道上皮细胞和气道平滑肌细胞等许多细胞类型上表达(Graber等人，1998，Eur J Immunol,28, 4286-98; Murata 等人，1998，Int Immunol, 10, 1103-10; Akaiwa 等人，2001，Cytokine, 13，75-84)。IL-13R a 1/IL-4R受体复合物的连接会导致多种信号转导途径的活化，包括信号传导子及转录激活子(ST ΑΤ6)和胰岛素受体底物-2 (IRS-2)途径(Wang等人，1995，Blood, 864218-27; Takeda 等人，1996，J Immunol, 157，3220-2)。单独的IL-13Ra2链对IL-13具有高亲和カ(KD 0.25-0.4 nM)，并起下述两种作用负调节 IL-13 结合的诱饵受体(Donaldson 等人，1998，J Immunol, 161，2317-24)，和在巨噬细胞和可能的其它细胞类型中通过AP-I途径诱导TGF- β合成和纤维化的信号传递受体(Fichtner-Feigl, Strober 等人 2006 Nat Med 12 99-106)。在哮喘的临床前动物模型中进行的几项研究指示，IL-13在哮喘中起重要作用。这些数据包括IL-13敲除的小鼠对哮喘的抗性，以及IL-13拮抗剂(可溶性的IL-13受体、抗-IL-13 mAb等)在不同的小鼠模型中对哮喘表型的抑制(Wills- Karp和Chiaramonte,2003,Curr Opin Pulm Med, 9 21-7; Wills-Karp, 2004, Tmmunol Rev, 202 175-90)。多项研究已经证实，重组IL-13向小鼠以及豚鼠的肺的药理学施用会诱导气道粘液分泌过多、嗜酸粒细胞增多和气道高反应性(“AHR” ； Grunig等人，1998，Science, 282，2261-3; Wills-Karp 等人，1998，Science, 282，2258-61; Kibe 等人，2003，Am JRespir Crit Care Med, 167, 50-6; Vargaftig 和 Singer, 2003, Am J Physiol LungCell Mol Physiol, 284, L260-9; Vargaftig 和 Singer, 2003, Am J Respir CellMol Biol, 28，410-9)。在组成性地或诱导性地表达IL-13的转基因小鼠系统中，再现了IL-13 的这些效应(Zhu 等人，1999，J Clin Invest, 103, 779-88; Zhu 等人，2001，Am J Respir Crit Care Med, 164, S67- 70; Lanone 等人，2002，J Clin Invest,110463-74)。IL-13的慢性转基因过表达也会诱导上皮下纤维化和肺气肿。具有IL-13(和IL-4)信号传递分子STAT6缺陷的小鼠不会形成变应原诱导的AHR和粘液过度生成(Kuperman等人，2002，Nat Med, 8，885-9)。使用可溶性的IL-13受体融合蛋白(sIL-13Ra2Fc)的研究已经证实了该细胞因子在实验性变应原卵白蛋白(OVA)诱导的气道疾病中的关键作用(Grunig 等人，1998，Science, 282, 2261-3; Wills-Karp 等人，1998，Science, 282，2258-61; Taube 等人，2002，J Immunol, 169，6482-9)。还在鼠哮喘的慢性模型中，证实了抗-IL-13治疗的效力。除了表现出粘液分泌过多和AHR的特征以外，该慢性哮喘模型表现出人疾病的几种标志，所述标志在更急性模型中不存在。这些标志包括位于上皮之间的间隙中的肺组织的嗜酸粒细胞增多以及通过胶原沉积的增加测得的平滑肌纤维化。通过含有OVA的气雾剂的重复激发(每周I次，持续共4周)，在OVA-敏化的小鼠中诱导慢性哮喘模型。为最后2周的OVA激发(从第36天开始，在研究的第53天评估效カ读出)施用的抗-IL-13抗体显著抑制了 AHR、肺炎、杯形细胞增生、粘液分泌过多和气道纤维化(Yang 等人，2005, J Pharmacol Exp Ther, 313, 8-15)。IL-13 涉入人哮喘的发病机制中，因为在哮喘患者的肺中已经检测到高水平的IL-13 mRNA和蛋白，这与该疾病的严重性相关联(Huang等人，1995，J Immunol, 155，2688-94)。另外，已经鉴别 了人IL-3遗传多态性(它们导致升高的IL-13水平)，并与哮喘和特应性相关联(Heinzmann等人，2000，Hum Mol Genet, 9, 549-59; Hoerauf 等人，2002，Microbes Infect, 4,37-42; Vercelli, 2002, Curr Opin Allergy Clin Immunol, 2, 389-93; Heinzmann 等人，2003，J Allergy Clin Immunol, 112, 735-9; Chen 等人，2004，J Allergy ClinImmunol, 114，553-60; Vladich 等人，2005，J Clin Invest, 115，747-54)，并且已经在哮喘患者的肺中检测到升高的IL-13水平(Hua本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：RK希克曼，
申请(专利权)人：雅培制药有限公司，
类型：发明
国别省市：
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