使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的方法技术

本发明专利技术提供了用于使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的洗脱缓冲液和方法。所述方法可用于例如增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率。用于所述方法中的缓冲液包括至少一种选自组氨酸或蔗糖、二价阳离子、非离子型洗涤剂和磷酸盐缓冲盐水的赋形剂。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】【专利摘要】本专利技术提供了用于使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的洗脱缓冲液和方法。所述方法可用于例如增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率。用于所述方法中的缓冲液包括至少一种选自组氨酸或蔗糖、二价阳离子、非离子型洗涤剂和磷酸盐缓冲盐水的赋形剂。【专利说明】优先权申请的交叉引用本申请要求2011年4月29日提交的美国临时申请第61/480，561号的优先权，该美国临时申请全文以引用的方式并入本文。背景病毒制造包括使用例如诸如凝胶渗透色谱法的色谱方法纯化病毒的步骤。虽然色谱方法是纯化病毒的有效方式，但是这些方法可能会导致病毒在色谱柱上遭到大量损失。因此，使用此类方法的病毒制造成本可能是相当高的。概述本文提供了用于使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的洗脱缓冲液和方法。该方法可用于例如在病毒制造期间增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率。本文所描述的纯化病毒的方法包括使凝胶渗透色谱柱与包含病毒和液体载体的病毒制品接触，其中病毒保留在凝胶渗透色谱柱上，以及用包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水的洗脱缓冲液从凝胶渗透色谱柱上回收病毒。在这些方法中，所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。液体载体任选地为洗脱缓冲液。任选地，所述至少一种赋形剂包含甘露糖醇或山梨糖醇中的一者或多者。二价阳离子任选地为Mg2+。任选地，Mg2+以氯化镁形式存在。磷酸盐缓冲盐水可包括一种或多种磷酸盐与一种或多种氯盐的组合。任选地，所述一种或多种磷酸盐包括磷酸二钠和/或磷酸二氢钾。任选地，所述一种或多种氯盐包括氯化钠和/或氯化钾。 洗脱缓冲液可进一步包括非离子型洗涤剂，例如，聚山梨酯80。任选地，洗脱缓冲液包括甘露糖醇、组氨酸、山梨糖醇、聚山梨酯80和MgCl2，并且磷酸盐缓冲盐水包括磷酸二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾。任选地，洗脱缓冲液包括蔗糖、聚山梨酯80和MgCl2，并且磷酸盐缓冲盐水任选地包括磷酸二钠、磷酸二氢钾、氯化钠和氯化钾。包括在本文所描述的病毒制品中的病毒可以为，例如，溶瘤病毒和/或非包膜病毒。本文提供了病毒制品，其中病毒为呼肠孤病毒，例如哺乳动物呼肠孤病毒。哺乳动物呼肠孤病毒的实例为人呼肠孤病毒，例如血清3型病毒(例如，Dearing株呼肠孤病毒)。呼肠孤病毒任选地为重组的呼肠孤病毒、重排(reasserted)的呼肠孤病毒，或IDAC#190907-01o本文还描述了根据这些方法制备的纯化的病毒制剂。本文所描述的方法可进一步包括将病毒储存在洗脱缓冲液中。本文还提供了包括凝胶渗透色谱柱和洗脱缓冲液的装置。洗脱缓冲液包括至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水，并且所述至少一种赋形剂包括组氨酸或蔗糖。凝胶渗透色谱柱任选地用所述缓冲液平衡。任选地，所述装置进一步包括包含病毒和液体载体的病毒制品。本文进一步提供了纯化的病毒制剂，其包括从凝胶渗透色谱柱上洗脱的病毒及与凝胶渗透色谱介质接触的洗脱缓冲液。在一些实例中，洗脱缓冲液包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水，并且所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。本文还提供了凝胶渗透色谱洗脱缓冲液。在一些实例中，洗脱缓冲液可包括至少一种赋形剂、二价阳离子、非离子型洗涤剂和磷酸盐缓冲盐水。在一些实例中，至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖，并且洗脱缓冲液为凝胶渗透色谱洗脱缓冲液。任选地，洗脱缓冲液包括蔗糖、MgCl2、聚山梨酯80和磷酸盐缓冲盐水。任选地，洗脱缓冲液包括甘露糖醇、组氨酸、山梨糖醇、MgCl2、聚山梨酯80和磷酸盐缓冲盐水。本文进一步提供了增大病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率的方法。所述方法包括使凝胶渗透色谱柱与包含病毒和液体载体的病毒制品接触，其中病毒保留在凝胶渗透色谱柱上，以及用包含至少一种赋形剂、二价阳离子和磷酸盐缓冲盐水的洗脱缓冲液从凝胶渗透色谱柱上回收病毒，其中所述至少一种赋形剂包含组氨酸或蔗糖。在这些方法中，病毒回收率比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约20%。任选地，病毒回收率比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约25%(例如，比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约30%或比用磷酸盐缓冲盐水洗脱的病毒的回收率高至少约35%)。一个或多个方面的细节在下面的描述中示出。根据该描述和权利要求书，其他特征、目的和优点将是明显的。详述本文描述了用于使用凝胶渗透色谱法纯化病毒的洗脱缓冲液和方法。凝胶渗透色谱法(即， 凝胶过滤或尺寸排阻色谱法)是用于将混合物的组分根据它们的尺寸分离的扩散控制过程。本文所描述的凝胶渗透色谱洗脱缓冲液可用于，例如增大在病毒制造期间病毒从凝胶渗透色谱柱上的回收率。本文所描述的洗脱缓冲液包括一种或多种赋形剂、二价阳离子、非离子型洗涤剂和磷酸盐缓冲盐水。本文所提供的洗脱缓冲液包括至少一种赋形剂(例如，一种、两种、三种、四种或更多种赋形剂)。用于洗脱缓冲液中的赋形剂包括但不限于，糖和氨基酸。用于本文所描述的洗脱缓冲液中的合适糖的实例包括蔗糖。用于本文所描述的洗脱缓冲液中的合适氨基酸的实例包括组氨酸。任选地，本文所描述的洗脱缓冲液包括组氨酸或蔗糖中的至少一者。用于本文所描述的洗脱缓冲液中的合适糖包括，例如，单糖和二糖。在一些实例中，洗脱缓冲液包括蔗糖、甘露糖醇、山梨糖醇，或这些的组合。合适糖的进一步实例包括乳糖、右旋糖、果糖、葡萄糖和麦芽糖。任选地，洗脱缓冲液基本上不含海藻糖。基本上不含意指洗脱缓冲液可包括少于0.1%、少于0.01%、少于0.001%、少于0.0001%,或0%的海藻糖，以洗脱缓冲液的重量为基准。在一些实例中，洗脱缓冲液基本上不含除蔗糖以外的糖(即，洗脱缓冲液基本上不含非-蔗糖多元醇)。用于洗脱缓冲液中的糖可包括一种糖，或两种或更多种糖的组合。例如，洗脱缓冲液可包括蔗糖作为缓冲液中存在的糖。任选地，洗脱缓冲液可包括甘露糖醇或山梨糖醇中的一者或多者(例如，甘露糖醇与山梨糖醇的组合)作为缓冲液中存在的一种(多种)糖。洗脱缓冲液中存在的一种(多种)糖的总浓度可为10重量％或更少，以洗脱缓冲液重量为基准。例如，以洗脱缓冲液重量为基准，糖的总浓度可低于7.5重量％ (例如，低于7.4重量％、低于7.3重量％、低于7.2重量％、低于7.1重量％、低于7重量％、低于6重量％、低于5重量％、低于4重量％、低于3重量％、低于2重量％,或低于I重量％,以洗脱缓冲液的重量为基准)。例如，以洗脱缓冲液的重量为基准，蔗糖可以以范围从0.1重量％至5重量％、从I重量％至4.5重量％、从2重量％至4重量％的浓度(例如,3重量％),或所列举范围内的任何量存在于洗脱缓冲液中。任选地，以洗脱缓冲液的重量为基准，甘露糖醇和山梨糖醇可以以低于7.5% (例如，7%)的组合浓度包括在洗脱缓冲液中。例如，以洗脱缓冲液的重量为基准，甘露糖醇可以以范围从0.01%至7.4% (例如，从0.1%至7%、从1%至6%、从2%至5%，或从3%至4%)的浓度包括在其中，而山梨糖醇可以以范围从0.01%至7.4% (例如，从0.1%至7%、从1%至6%、从2%至5%，或从3%至4%)的浓度包括在其中，使得糖的组合浓度低于7.5%。氨基酸也可包括在本文所描述的洗脱缓冲液中。合适的氨基酸包括，例如，组氨酸、精氨酸、赖氨酸、蛋氨酸、谷氨酸，或这些的混合物。以洗脱缓冲液重量为基准，一种本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...

【专利技术属性】
技术研发人员：MC科菲，A黑格尔曼，R卡帕迪亚，S塞尔，
申请(专利权)人：昂科利蒂克斯生物科技公司，
类型：
国别省市：