The invention provides a from Streptomyces fermentation liquid separation and purification method of ascomycin, this method will be used to get the cell plate filter Streptomyces fermentation liquid, organic solvent extraction was repeated at room temperature, and extract, the extract concentration after transfer to macroporous resin and silica gel column chromatography, the ASCUS kanamycin was concentrated by mixed solvent crystallization, crystallization after crude transfer to high pressure dynamic axial column chromatography column separation, the ascomycin and crystallization with mixed solvent. In the invention, the purity of the prepared ascomycin is above 98%, the yield is up to 80 ~ 90%; the invention can greatly shorten the extraction time and improve the efficiency, has the advantages of convenient operation, simple process and low cost, easy industrial production, provides a feasible process for the production of a separate mold pigment.
【技术实现步骤摘要】
一种从链霉菌发酵液中分离纯化子囊霉素的方法
本专利技术涉及生物制药
,尤其涉及一种从链霉菌发酵液中分离纯化子囊霉素的方法。
技术介绍
子囊霉素(Ascomycin,Immunomycin,FK-520)为二十三碳的大环内酯类化合物,是免疫抑制剂FK-506(他克莫司,tacrolimus)乙基类似物。自从其结构类似他克莫司的免疫抑制活性被发现后,迅速推动了子囊霉素以及衍生物的免疫抑制活性研究。研究发现约翰子囊霉素具有很强的免疫抑制作用,目前子囊霉素已被用作生产半合成API(如吡美莫司)的中间体。吡美莫司主要应用于特应性皮炎、变应性接触性皮炎、银屑病,红斑狼疮,扁平苔藓,白癜风,移植物抗宿主病等自身免疫疾病的治疗。国内对子囊霉素的研究尚处于起步阶段,公开号为CN101036649A的中国专利技术专利公开了子囊霉素作为免疫抑制剂在制备治疗自身免疫性糖尿病和皮肤病抑制排斥反应的药物中的用途。昆明理工大学穆云龙通过对子囊霉素菌种选育及发酵条件的初步研究,发酵培养96h,发酵效价最高可达131.7mg/L。但对于如何分离提取产物并未具体说明。1988年日本日本藤泽制药公司报道提取子囊霉素的方法。由于发酵液中会存在多种子囊霉素类似物且由于子囊霉素在水相中存在异构现象,而提取分离方法中多含水相,这就使得发酵液中提纯子囊霉素主要技术研究存在较大技术难度。目前对于子囊霉素的大部分研究工作集中在子囊霉素发酵、子囊霉素衍生物的开发、抗菌活性及临床应用等方面。现阶段子囊霉素分离提取的主要问题是子囊霉素的收率不高,分离成本高等问题。另外,由于子囊霉素在水相中存在异构现象,目前 ...
【技术保护点】
一种从链霉菌发酵液中分离纯化子囊霉素的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1)、向链霉菌发酵液中加入相当于链霉菌发酵液体积1~4%的助滤剂,搅拌30~45分钟,固液分离,收集菌丝体;步骤2)、用有机溶剂于室温下浸泡提取菌丝体2~5次,每次浸泡提取2~6h,得到浸提液,合并浸提液,并减压浓缩得到浓缩液;步骤3)、将步骤2)所得的浓缩液使用装填非极性大孔树脂的床层进行吸附,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液并浓缩;步骤4)、向步骤3)所得的浓缩液中加入有机溶剂萃取,提取上相萃取液,对上相萃取液减压浓缩得到油状浓缩物;步骤5)、将步骤4)所得的油状浓缩物用硅胶柱层析,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液并浓缩,得浓缩液;步骤6)、将步骤5)所得的浓缩液加入有机溶剂进行重结晶,得到子囊霉素粗品;步骤7)、将步骤6)所得的子囊霉素粗品使用动态轴向高压柱层析柱进行分离,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液,并浓缩洗脱液;步骤8)、将步骤7)中浓缩后的洗脱液加入有机溶剂萃取后,进行重结晶,并烘干,即得含有子囊霉素的结晶物。
【技术特征摘要】
1.一种从链霉菌发酵液中分离纯化子囊霉素的方法,其特征在于,包括以下步骤:步骤1)、向链霉菌发酵液中加入相当于链霉菌发酵液体积1~4%的助滤剂,搅拌30~45分钟,固液分离,收集菌丝体;步骤2)、用有机溶剂于室温下浸泡提取菌丝体2~5次,每次浸泡提取2~6h,得到浸提液,合并浸提液,并减压浓缩得到浓缩液;步骤3)、将步骤2)所得的浓缩液使用装填非极性大孔树脂的床层进行吸附,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液并浓缩;步骤4)、向步骤3)所得的浓缩液中加入有机溶剂萃取,提取上相萃取液,对上相萃取液减压浓缩得到油状浓缩物;步骤5)、将步骤4)所得的油状浓缩物用硅胶柱层析,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液并浓缩,得浓缩液;步骤6)、将步骤5)所得的浓缩液加入有机溶剂进行重结晶,得到子囊霉素粗品;步骤7)、将步骤6)所得的子囊霉素粗品使用动态轴向高压柱层析柱进行分离,加入洗脱剂进行梯度洗脱,收集洗脱液,并浓缩洗脱液;步骤8)、将步骤7)中浓缩后的洗脱液加入有机溶剂萃取后,进行重结晶,并烘干,即得含有子囊霉素的结晶物。2.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤1)中的助滤剂选自硅藻土、珍珠岩中的一种或者两种任意比例的混合物。3.根据权利要求1所述的方法,其特征在于,所述步骤2)中的有机溶剂选自乙酸乙酯、乙醇或者丙酮中的一种或者多种任意比例的混合物;所述减压浓缩得到浓缩液具体为:在0.06~0.1MPa的负压环境下,浓缩回收有机溶剂,...
【专利技术属性】
技术研发人员:赵永俊,付静,曹峥,杨亮,游云龙,蔡云洁,金丹甜,
申请(专利权)人:无锡福祈制药有限公司,
类型:发明
国别省市:江苏,32
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