本发明专利技术为中药领域，具体公开了一种分离山茱萸美拉德反应产物的方法及其应用，它采用超滤技术对山茱萸美拉德反应产物进行分离，包括以下步骤：①、药材的炮制，②超滤前的样品处理，③超滤，④超滤后样品处理。经超滤后的美拉德反应分级产物在进行DPPH自由基清除作用测定、铁氰化钾还原能力的测定、羟自由基清除能力测定后，被证明其具有抗氧化的作用。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术属于中药提取领域，具体涉及山茱萸美拉德反应分级产物的提取及超滤分 离方法及其抗氧化作用。
技术介绍
美拉德反应是指羰基化合物（还原糖类）与氨基化合物（蛋白质与氨基酸）经过 一系列复杂的反应最终生成棕色甚至是黑色的被称为类黑精或拟黑素（Melanoidins)的 大分子物质的非酶促反应。许多研究表明美拉德反应在中药炮制过程中也广泛存在着，例 如烫狗脊在炮制过程中产生了美拉德反应中间产物γ-吡喃酮和糠醛类化合物、何首乌在 炮制后产生的新成分5-羟基麦芽酚和5-羟甲基糠醛均为美拉德反应的标志性产物等，其 在炮制过程中均发生了美拉德反应，产生了美拉德反应产物。 中药山茱萸为山茱萸科植物山茱萸CornusofficinalisSieb.etZucc.的干燥 成熟果肉（药材常称为"山萸肉")，是我国最常用中药材之一，被2010年版药典收录。秋末 冬初果皮变红时采收果实，用文火烘或置沸水中略烫后，及时除去果核，干燥，即为生山萸 肉。临床一般以制山萸肉入药，其酸、湿，微温。归肝、肾经。功能补益肝肾，涩精固脱。用 于眩晕耳鸣，腰膝酸痛，阳痿遗精，遗尿尿频，崩漏带下，大汗虚脱。前期研究表明，山茱萸在 炮制过程中发生了美拉德反应，产生了美拉德反应产物。 超滤是按分子量大小范围进行物质分离、浓缩和提纯的一种膜分离技术。超滤将 不同分子量美拉德反应产物进行分级分离，根据需要取出某一分子量范围的级分进行利 用。超滤的膜孔径以分子量为单位，一般在1000-1000000道尔顿（Da，碳原子分子质量的 十二分之一）之间。超滤目前广泛应用于化工分离及食品加工，这为其在中药中的应用提 供了良好的基础。选用不同孔径的超滤膜，将美拉德反应产物分成不同级数，各级分子量段 截留产物粒度分布均匀且单一，具有较高的利用价值。目前为止尚未见山茱萸美拉德反应 产物的分离和活性的相关报道。本专利技术使用超滤技术将山茱萸美拉德反应产物进行分级分 离，得到山茱萸美拉德反应分级产物，并报道其抗氧化活性。
技术实现思路
本专利技术的目的在于提供一种分离山茱萸美拉德反应分级产物的方法。 本专利技术的另一个目的在于提供山茱萸美拉德反应分级产物的抗氧化作用。 本专利技术采取以下途径实现： -种分离山茱萸美拉德反应分级产物的方法，包括以下步骤： A.药材的炮制：取净山茱萸药材，加入药材质量比例的15-25%黄酒，拌勾，闷润， 待黄酒吸尽，常压蒸制，取出，干燥，作为山茱萸美拉德反应产物粗品；B.超滤前样品处理：取步骤A酒蒸后山茱萸美拉德反应产物粗品，加水煎煮提取 两次，每次40-80min，第一次加药材质量10-14倍量的水，第二次加药材质量8-12倍量的 水，合并水煎液，过滤得滤液，离心，上清液减压抽滤，得到山茱萸美拉德反应产物； C.超滤：取步骤B所得山茱萸美拉德反应产物，采用中空纤维膜分级过滤，过膜级 数为0. 22μm~lKDa，经过七级中空纤维膜的作用，将药液进行超滤分离，得到七级截留分 子量的样品，为山茱萸美拉德反应各分子量段截留产物； D.超滤后样品处理：对步骤C所得山茱萸美拉德反应各分子量段截留产物进行浓 缩，再经冷冻干燥制得山茱萸美拉德反应分级产物。 所述的分离山茱萸美拉德反应产物的方法，超滤过程中，采用中空纤维膜分级 过滤，连接在中空纤维膜设备上，设置其操作压力为〇. 1~1.OMPa，温度为室温，电压为 40-50V〇 所述的分离山茱萸美拉德反应产物的方法，采用中空纤维膜分级过滤，过膜 级数七级分别为0. 22μm，lOOKDa，50KDa，lOKDa，4KDa，2KDa，lKDa。分别得到分子量为 0. 22μπι~lKDa之间的山茱萸美拉德反应分级产物。 所述的山茱萸美拉德反应分级产物在制备具有抗氧化性能保健品或化妆品中的 应用。 有益效果：通过超滤技术可以根据需要分离山茱萸美拉德反应产物的某一分子量 范围的组分，便于后续加以利用，得到的山茱萸美拉德反应分级产物粒度分布均匀且单一， 性质稳定，可重现，具有较高的利用价值，可以将此分离山茱萸美拉德反应产物的技术应用 于工业生产中。通过实验证明山茱萸美拉德反应分级产物具有抗氧化功效。【附图说明】图1为山茱萸美拉德反应分级产物和芦丁标准品的铁氰化钾还原能力，其中 A. < 4KDa，B. 10-4KDa，C. 50-10KDa，D. 100-50KDa，E. 0· 22ym-100KDa，F. 0· 45-0. 22μπι， G.芦丁【具体实施方式】 实施例1 :A.药材炮制：取净山茱萸药材3kg，按比例加入20 % (约600mL)液体辅料黄酒 (产地：浙江绍兴女儿红酿酒有限公司，批号：20140917A)，拌匀，置密闭容器中闷润3h，待 黄酒吸尽，置于蒸锅中，密闭隔水常压蒸制，于24h时取出，置减压干燥箱中50°C干燥，作为 山茱萸美拉德反应产物粗品。 B.超滤前样品处理：取步骤A酒蒸后山茱萸美拉德反应产物粗品，置多功能提取 罐中水煎煮提取两次，第一次80min，第二次60min，第一次加药材质量14倍量的水，第二 次加药材质量12倍量的水，合并两次水煎液，用7层纱布过滤，得滤液；6000r·min1离心 12min，上清液减压抽滤，除去滤液中的固体颗粒及胶体物质，得到山茱萸美拉德反应产物。 C.超滤：取步骤B所得山茱萸美拉德反应产物，采用中空纤维膜分级过滤，过膜级 数分别为〇. 22μm，lOOKDa，50KDa，lOKDa，4KDa，2KDa，lKDa，设置中空纤维膜设备操作压力 为0.IMPa，温度为室温，电压为50V。当步骤B所得山茱萸美拉德反应产物经由水栗进入中 空纤维膜时，分子量小于膜孔径的物质随溶剂透过膜流出设备，分子量大于膜孔径的物质 被截留在膜表面。经过各级中空纤维膜的作用，将药液进行超滤分离，得到山茱萸美拉德反 应各分子量段截留产物。 D.超滤后样品处理：对步骤C所得山茱萸美拉德反应各分子量段截留产物进行浓 缩，再经冷冻干燥制得山茱萸美拉德反应分级产物。 实施例2 : A.药材炮制：取净山茱萸药材3kg，按比例加入20 % (约600mL)液体辅料黄酒 (产地：浙江绍兴女儿红酿酒有限公司，批号：20140917A)，拌匀，置密闭容器中闷润3h，待 黄酒吸尽，置于蒸锅中，密闭隔水常压蒸制，于24h时取出，置减压干燥箱中50°C干燥，作为 山茱萸美拉德反应产物粗品。 B.超滤前样品处理：取步骤A酒蒸后山茱萸美拉德反应产物粗品，置多功能提取 罐中水煎煮提取两次，第一次60min，第二次60min，第一次加药材质量12倍量的水，第二 次加药材质量10倍量的水，合并两次水煎液，用6层纱布过滤，得滤液；5000r·π?η-1离心 15min，上清液减压抽滤，除去滤液中的固体颗粒及胶体物质，得到山茱萸美拉德反应产物。C.超滤：取步骤B所得山茱萸美拉德反应产物，采用中空纤维膜分级过滤，过膜级 数分别为〇. 22μm，lOOKDa，50KDa，lOKDa，4KDa，2KDa，lKDa，设置中空纤维膜设备操作压力 为1.OMPa，温度为室温，电压为50V。当步骤B所得山茱萸美拉德反应产物经由水栗进入中 空纤维膜时，分子量小于膜孔径的物质随溶剂透过膜流出设备，分子量大于膜孔径本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种分离山茱萸美拉德反应分级产物的方法，其特征在于包括以下步骤：A.药材的炮制：取净山茱萸药材，加入药材质量比例的15‑25％黄酒，拌匀，闷润，待黄酒吸尽，常压蒸制，取出，干燥，作为山茱萸美拉德反应产物粗品；B.超滤前样品处理：取步骤A酒蒸后山茱萸美拉德反应产物粗品，加水煎煮提取两次，每次40‑80min，第一次加药材质量10‑14倍量的水，第二次加药材质量8‑12倍量的水，合并水煎液，过滤得滤液，离心，上清液减压抽滤，得到山茱萸美拉德反应产物；C.超滤：取步骤B所得山茱萸美拉德反应产物，采用中空纤维膜分级过滤，过膜级数为0.22μm～1KDa，经过七级中空纤维膜的作用，将药液进行超滤分离，得到七级截留分子量的样品，为山茱萸美拉德反应各分子量段截留产物；D.超滤后样品处理：对步骤C所得山茱萸美拉德反应各分子量段截留产物进行浓缩，再经冷冻干燥制得山茱萸美拉德反应分级产物。
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：杨光明，潘扬，李萌，张玉玲，燕珂，蔡宝昌，
申请(专利权)人：南京中医药大学，杨光明，潘扬，
类型：发明
国别省市：江苏;32
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