一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌及其应用，菌种名称为H20‑c，分类命名为：短乳杆菌Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11758，保藏日期为：2015年11月30日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。本发明专利技术对筛选得到的短乳杆菌进行了人工接种模拟酸粥发酵研究，测定了连续5d发酵过程中酸粥的菌浓、pH、乳酸、自由氨基酸的变化。初步证明短乳杆菌可以作为出发菌株引导酸粥发酵，可以作为酸粥工业化生产的候选菌株。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于微生物领域，涉及一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌及其应用。
技术介绍
传统的自然发酵谷物食品在亚洲非常普遍,发酵赋予其独特的感官风味与质地特性。传统发酵食品中，微生物菌群相对稳定而且安全，无需加热处理也可以保存很长一段时间。制作酸粥的原材料可以是糜米、小米、大米、玉米糁糁等，其中糜米是最常见的原材料。糜米酸粥是北方长城沿线风沙区清凉解暑的最佳食品，是陕西府谷、山西河曲、内蒙古包头等地极具特色的民间食俗。在山西河曲、偏关等地，酸粥是人们日常早晚餐的必备饮食，并在当地有一民俗是将制作酸粥的浆米缸嫁女儿的陪嫁品，足以体现当地人对此食品的喜爱。传统的糜米酸粥制作是利用延续使用天然酸粥老汤中天然存在的微生物发酵而成。其制作过程是将淘洗过的糜米(或称粳性黄米)放入罐中，加入适量的温水，水高过糜米5-10厘米，放在锅台或热炕静置一夜，待浆米发酵有酸味；每天将浆米捞出后，再将煮过米的米汤取一部分添加至浆米罐中，与之前酸浆混合，继续发酵，每天循环添加。如果有一段时间不食用，则把盛有酸浆的浆米缸放置在阴冷的地方，食用时可以继续使用。这样的制作工艺导致酸粥中形成了独特的微生物菌群，但是酸粥家庭式作坊生产在生活中经常会有不卫生的环境和较高的温度等因素带来的极易染菌的情况出现。在食品安全日益受到重视的今天，天然老汤发酵的糜米酸粥已经不能满足现代人们的需求，传统制作方法因微生物连续传代会造成活力不稳定，而且易发生杂菌污染或因老汤中共生菌群失衡，而使糜米发酵酸粥的风味等品质性能下降，从而限制了这种传统发酵食品的商品化生产。在谷物发酵尤其是酸性发酵过程中，乳酸菌和酵母是主要的微生物发酵菌种。乳酸菌在谷物发酵中起主导发酵作用主要是因为乳酸菌能够忍耐酸性环境，具有转运和代谢碳水化合物的能力。乳酸菌和酵母的在很多传统发酵食品中共同存在，
相互影响，菌种间的相互促进和相互制约控制着产品的风味特点、营养特性、医疗和保健作用，混合的菌群通过各自的代谢途径决定酸粥发酵过程中的口感、香气、营养和最终产品的功能特性。
技术实现思路
本专利技术的目的在提供一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌及其应用，本短乳杆菌可以作为出发菌株引导酸粥发酵，可以作为酸粥工业化生产的候选菌株。本专利技术实现目的的技术方案如下：一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌，菌种名称为H20-c，分类命名为：短乳杆菌Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11758，保藏日期为：2015年11月30日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。上述分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌作为食品保鲜剂的应用。上述分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌作为发酵剂的应用。上述分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌作为制备治疗肠道功能失调的药物的应用。上述分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌作为饲料添加剂的应用。上述分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌作为青储饲料发酵菌的应用。本专利技术的优点和积极效果是：本专利技术对筛选得到的短乳杆菌进行了人工接种模拟酸粥发酵研究，测定了连续5d发酵过程中酸粥的菌浓、pH、乳酸、自由氨基酸的变化。初步证明短乳杆菌可以作为出发菌株引导酸粥发酵，可以作为酸粥工业化生产的候选菌株。该菌株来源于发酵食品，作为益生菌，可以作为保鲜剂在食品储存起到生物保鲜的作用；作为发酵剂在食品及饮料发酵工业起到改善食品品质和营养、促进消化吸收和增强免疫力等重要生物功能；可以治疗肠道菌群紊乱造成的肠道功能失调；作为添加剂在饲料工业中可广泛应用于禽类、肉食动物、反刍动物、水产品的养殖过程；作为青储饲料发酵菌可以提高青储饲料的好氧稳定性。另外，乳酸菌还可以应用在基础保养品上和聚乙烯易分解的塑料产品上。附图说明图1为本专利技术分离菌株在MRS培养基上的菌落形态；图2为本专利技术分离菌株的革兰氏染色结果；图3为本专利技术分离细菌基因组与16S rRNA基因扩增电泳图；图4为本专利技术分离菌株的生长曲线；图5为本专利技术人工模拟发酵过程中菌量(图5-1)、pH(图5-2)、乳酸(图5-3)、自由氨基酸(图5-4)含量的变化曲线。具体实施方式下面通过具体的实施方案叙述本专利技术方法。除非特别说明，本专利技术中所用的技术手段均为本领域技术人员所公知的方法。另外，实施方案应理解为说明性的，而非限制本专利技术的范围，本专利技术的实质和范围仅由权利要求书所限定。对于本领域技术人员而言，在不背离本专利技术实质和范围的前提下，对这些实施方案中的物料成分和用量进行的各种改变或改动也属于本专利技术的保护范围。天然发酵的黄糜米酸粥微生物的生态系统非常复杂。主要由乳酸菌、醋酸菌和酵母主导发酵作用。前期试验收集了49份酸粥样品，通过传统微生物分离技术，分离鉴定得到乳酸菌78株，乙酸菌42株，酵母52株。乙酸菌的大量存在是糜米酸粥的独特之处。本专利技术使用MRS筛选分离培养基分离到糜米酸粥中的一株乳酸菌，经过革兰氏染色和16S rRNA基因分子鉴定得出该菌为一株短乳杆菌。本专利技术对该菌株的生长曲线进行了测定，并分析了由该菌株纯菌模拟发酵糜米酸粥的生化特性。分离菌株可以作为酸粥工业发酵生产的候选菌株。专利技术人从中国传统发酵食品糜米酸粥中，分离得到一株革兰氏阳性细菌，分别进行分子鉴定研究和人工模拟发酵研究。对其16S rRNA基因测序分析结果显示，与短乳杆菌Lactobacillus brevis菌株的16S rRNA基因的同源程度最高，达到100％高度同源，确定分离菌株为短乳杆菌。该菌株已在中国微生物菌种保藏中心进行保藏，保藏号为11758。具体分离、筛选以及性质研究的过程如下：一、材料与方法1、样品、仪器、试剂与培养基样品来源：发酵酸粥样品采集自山西省晋中市河曲县常年制作酸粥的家庭。仪器：使用酶标仪(Synergy H1,Biotech,美国)测定菌株的生长曲线、酸粥样品及培养物的酸碱度使用Sartorius pH计确定。酸粥样品经离心后取上清测定乳酸和自由氨基酸的含量。使用生物传感仪(SBA-40D，中国)测定乳酸含量。使用超高效液相色谱仪(H-Class，Waters，美国)测定自由氨基酸含量。试剂：OMIGA细菌基因组提取试剂盒，结晶紫、番红、琼脂糖、核酸染料购自宝生物工程(大连)有限公司。乳酸菌分离培养基(MRS培养基)：蛋白胨10g/L，牛肉膏10g/L，酵母膏5g/L，磷酸氢二钾2g/L，葡萄糖20g/L，乙酸钠5g/L，硫酸锰0.25g/L，柠檬酸氢二氨2g/L，吐温-801ml/L，硫酸镁0.58g/L，琼脂粉15g/L，121℃20min灭菌；30℃培养箱培养2-3天。2、方法2.1样品采集采集样品的容器和用具均已经过高压蒸汽灭菌，在发酵容器中充分搅拌酸粥后进行样品采集，采集的样品酸粥为加入酸浆后发酵24h的发酵液。在室温条件下，上述样品采集需在10min之内完成，并迅速放入有冰袋的保温箱中，并尽快转移至冰箱中冷藏，尽快进行乳酸菌菌株分离和鉴定。2.2菌株分离纯化和革兰氏染色将酸粥样品混匀，用生理盐水对样品进行系列稀释，取0.1mL样品加入0.9mL生理盐水，使用10倍梯度稀释法在MRS分离培养基上进行涂布。从分离平板上选取菌株进行划线纯化，并进行革兰氏本文档来自技高网...

【技术保护点】
一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌，其特征在于：菌种名称为H20‑c，分类命名为：短乳杆菌Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11758，保藏日期为：2015年11月30日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。

【技术特征摘要】
1.一株分离自传统发酵食品酸粥的短乳杆菌，其特征在于：菌种名称为H20-c，分类命名为：短乳杆菌Lactobacillus brevis，保藏单位：中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏号为CGMCC No.11758，保藏日期为：2015年11月30日，保藏地址为：北京市朝阳区北辰西路1号院3号。2.权利要求1所述的分离自传统发酵食品...

【专利技术属性】
技术研发人员：秦慧彬，杨洪江，乔治军，穆志新，王海岗，王君杰，曹晓宁，
申请(专利权)人：山西省农业科学院农作物品种资源研究所，
类型：发明
国别省市：山西;14