一种含G2A基因的重组质粒及构建方法技术

本发明专利技术涉及一种含G2A基因的重组质粒，包括载体片段pEGFP-N3和基因片段G2A，该重组质粒的构建方法为首先PCR扩增获得G2A基因；再将含有pEGFP-N3片段的载体与上步获得的含G2A基因的PCR产物酶切后连接；将连接产物转化受体菌；最后鉴定阳性克隆，获得pEGFP-N3-G2A连接产物。本发明专利技术成功克隆了G2A基因并构建了带有G2A基因的真核表达质粒pEGFP-N3-G2A，高效转染293T细胞并检测到G2A基因的表达，为研究G2A怎样介导动脉粥样硬化等炎症反应并探究其质子感知特性奠定了基础。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于真核表达载体构建领域，尤其涉及一种含G2A基因的重组质粒及构建方法。
技术介绍
孤儿G蛋白偶联受体(G2A, for G2 accumulation)是G蛋白偶联受体家族，OGRl亚家族(包括0GR1，G2A, TDAG8, GPR4)成员之一，因其能够诱导细胞停滞在G2/M期，并修复受损的DNA而得名。G2A在人类基因库RPCI-Il片段40119-35358碱基位点，编码382个氨基酸肽链，具有高度保守结构，七个疏水结构组成跨膜α螺旋(ΤΜ1-ΤΜ7)。Weng Z等1998 年鉴定得到在前B细胞和成纤维细胞G2/M检验点积累的G2A可以通过减弱BCR-ABL的转变能力来发挥抑制细胞增殖的作用，而敲除G2A基因的小鼠则表现出系统性红斑狼疮和动脉粥样硬化病变。现在普遍认为动脉粥样硬化与氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)的吞噬、泡沫细胞的形成和相关细胞信号转导作用下单核细胞、内皮细胞和平滑肌细胞的反应有密切关系。溶血磷脂酰胆碱(lysophosphatidylcholine, LPC)作为ox-LDL的主要脂质成分，已经有研究表明它可以与G2A高亲和力结合，介导细胞本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种含G2A基因的重组质粒，其特征在于，包括载体片段PEGFP-N3和基因片段G2A。2.如权利要求I所述的重组质粒，所述基因片段G2A是从人脐静脉内皮细胞提取总 RNA,反转录获得的cDNA中PCR扩增得到的。3.如权利要求I所述的重组质粒，所述载体片段PEGFP-N3来自质粒pEGFP_N3。4.如权利要求1-3所述的任一含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于包括如下步骤1)PCR扩增获得G2A基因；2)将含有pEGFP-N3片段的载体与步骤I)获得的含G2A基因的PCR产物酶切后连接；3)将步骤2)获得的连接产物转染293T细胞；4)检测外源基因在293T细胞中的表达。5.如权利要求4所述的含G2A基因的重组质粒的构建方法，其特征在于步骤I)包含通过PCR从人脐静脉内皮细胞提取总RNA，...

【专利技术属性】
技术研发人员：阿拉坦高勒，杨德志，黄旭东，冯文利，木其日，
申请(专利权)人：阿拉坦高勒，
类型：发明
国别省市：