给予体外部分成熟的树突细胞治疗肿瘤制造技术

本发明专利技术提供可用于肿瘤个体给药的包含部分成熟树突细胞的细胞群体。与树突细胞成熟试剂作用约1-约10小时或更久的部分成熟的树突细胞，可在肿瘤部位有效摄取和加工肿瘤抗原，并完全成熟，随后可迁移至治疗个体的淋巴结处。一旦到达淋巴结内，已完全成熟的抗原提呈树突细胞分泌适当的细胞因子(例如TNFα和IL-12)，与T细胞作用诱导后续的抗肿瘤免疫应答。（*该技术在2023年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
给予体外部分成熟的树突细胞治疗肿瘤本申请是申请号为200380108975.6，申请日为2003年12月5日的同名申请的分案申请。相关申请本申请要求于2002年12月6日申请的美国临时申请60/431,267的优先权，此处引入其全部内容作为参考。专利技术背景树突细胞(DCs)被认为是肿瘤主动免疫疗法的首选载体。动物试验表明，基于DC的免疫疗法具有保护小鼠免于生成肿瘤和消除已形成肿瘤的潜力。这种成功至少部分地重现于小规模的人体临床试验中。从小规模的安全性或理论验证试验，向阐明活性或有效性的大规模试验的过渡，由于DC制备的艰巨和繁重而停滞不前(见下文)。因此，尽管这种产品具有很大的治疗潜在性，很少有公司对开发基于DC的肿瘤疫苗感兴趣。肿瘤内(IT)注射DCs是一种特殊形式的基于DC的免疫疗法。注射后，DCs从凋亡或垂死的肿瘤细胞中摄取抗原，并迁移到淋巴结将抗原提呈给T细胞。实际上在动物模型中发现这种治疗的有效性与肿瘤的凋亡程度相关(Candido等人，CancerRes.61：228-236，2001)，其表明这种方法与注射DCs前采用化学疗法或放射疗法治疗肿瘤完全相容。此外，已有好几个小组证明，这种联合治疗对已经形成的肿瘤特别有效(Nikitina等人，Int.J.Cancer94：825-833，2001；Tanaka等人，Int.J.Cancer101：265-269，2002；Tong等人，CancerRes.61：7530-7535，2001)。由于肿瘤细胞是抗原的来源，在肿瘤内注射前需要选择和制备肿瘤抗原，就像目前它们在大多数体外基于DC治疗的方法中应用的那样。肿瘤抗原的选择常常受公司对专有地位的要求所驱动，而迄今为止已鉴别的少数肿瘤抗原是否能提供显著的临床疗效还有待证明。此外，使用这种肿瘤抗原通常产生单价疫苗，如果肿瘤细胞下调免疫抗原的表达水平，单价疫苗可能会失去其效力。当然，在符合优良制造规范(GMP)要求的条件下制造肿瘤抗原的要求在传统的基于DC免疫方法上增加了额外的费用。DCs的肿瘤内注射使树突细胞处于免疫抑制的肿瘤环境中。已知肿瘤产生细胞因子，其灭活DCs或能够使T细胞反应偏向效应较小的Th2-型反应。几个研究小组使用遗传修饰的DCs，以期克服这些抑制性影响，具体是通过产生细胞因子白介素12(IL-12；Nishioka等人，CancerRes.59：4035-4041，1999；Melero等，GeneTherapy6：1779-1784，1999)或表达CD40配基(Kikuchi等人，Blood96：91-99，2000)。这些小组描述的结果令人鼓舞，进一步表明了肿瘤内注射DCs作为一种治疗方法的可行性。Triozzi等人(Cancer89：2647-2654，2000)描述了转移性黑色素瘤或乳腺癌患者的DCsIT注射。他们在4名黑色素瘤患者和2名乳癌患者中获得了肿瘤消退的结果。消退病灶活组织检查显示浸润的T细胞，表明DC实际已经激活了针对肿瘤细胞的免疫反应。所有这些数据表明人体肿瘤内注射DCs是可行的，可以提供显著的临床疗效。然而，已观察到MHCII类抗原和B7-2共刺激分子对注射的DCs有明显的下调。这些关键性分子的下调将会降低DCs的免疫刺激潜力，但如本专利技术所提供的，这可以通过给药前DCs的部分成熟而避免。DCs以未成熟形式存在于外周组织中，准备摄取和加工抗原。正是这些未成熟细胞，在GM-CSF和IL-4存在时，被单核细胞所产生的DCs最接近地模拟。多种刺激可启动DCs的成熟，成熟过程中细胞失去其有效摄取抗原的能力，而获得其T细胞刺激功能。这一过程是复杂的，至少在体外要持续48小时才能完成。成熟的另一个结果是细胞迁移性质方面发生变化。例如，成熟诱导若干趋化因子受体，包括CCR7，CCR7引导细胞至流向淋巴结的T细胞区域，在该区域内成熟的DCs激活T细胞，抵抗I类和II类MHC分子提呈至DC表面的抗原。诱导耐受性与DCs交叉提呈的(自身)抗原有关(Kurts等人，J.Exp.Med.186：239-245，1997)，现在主要的假说假定未成熟DC不断把抗原提呈给免疫系统，以维持耐受性(Kurts等人，J.Exp.Med.184：923-930，1996)，认为需要体内成熟DCs以产生有效的免疫刺激。现已明确DC成熟可能产生免疫刺激或免疫抑制性DCs(Chakraborty等人，Clin.Immunol.94：88-98，1999)。现今尚未阐明导致两种结果中任何一种的成熟刺激物的确切性质，但普遍接受免疫刺激DCs产生IL-12并表达CD40配基(Albert等人，NatureImmunol.2：988-989，2001；Lanzavecchia，Haematologica84Suppl.EHA4：23-25，1999)。因此，部分成熟的DC应可用于IT注射，特别是当已知使未成熟树突状细胞成熟的刺激物可导致CD40配基表达和IL-12的产生时。专利技术概述本专利技术提供一种方法，用于产生抗肿瘤免疫应答，包括给予含有已经体外部分成熟的树突细胞的细胞群体，以使个体在给药后，部分成熟的树突细胞保留摄取肿瘤抗原的能力并能诱导免疫应答。尽管肿瘤内整体的免疫抑制环境，本方法允许在肿瘤和肿瘤基床(bed)内对肿瘤抗原的有效摄取和加工。由于对树突细胞免疫刺激性的负面影响，这种免疫抑制环境会妨碍树突细胞的功能。而且，不能给予肿瘤成熟的树突细胞，因为该细胞不能有效地加工抗原。部分成熟的树突细胞可直接给药至已存在的肿瘤内。而且，可给药至肿瘤基床、肿瘤内部和周围的组织区域，可在治疗即外科手术除去或切除肿瘤之前或之后进行，在化疗、放疗或其组合治疗之前、同时或之后进行，等等。部分成熟的树突细胞还可以给药至直接流向肿瘤或肿瘤周围区域的淋巴结或淋巴区域。此外，部分成熟的树突细胞可给药至直接为肿瘤或肿瘤基床或肿瘤侵袭器官或具有肿瘤的器官输送血液或淋巴液的循环血管或淋巴区域内。更进一步，部分成熟的树突细胞通常可给药至循环或淋巴系统，以便细胞能被运送到肿瘤区域。本专利技术可用的树突细胞或其前体，可从例如皮肤、脾脏、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血等中获得。此外，树突细胞可从待治疗个体或与待治疗个体HLA相匹配的健康个体获得。在与成熟剂接触并配制成用于个体给药的组合物之前，树突细胞或其前体可以冷冻保存。用于本专利技术方法的树突细胞是在体外部分成熟的。用于诱导树突细胞成熟的适当试剂包括，例如但不限于，卡介苗(BCG)、干扰素γ(IFNγ)、脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)；咪唑并喹啉化合物，例如咪唑并喹啉-4-胺化合物，如4-氨基-2-乙氧基甲基-α，α-二甲基-1H-咪唑并[4，5-c]-1-乙醇(命名为R848)或1-(2-甲基丙基)-1H-咪唑并[4，5-c]喹啉-4-胺，及其衍生物(WO00/47719，此处全部引用作为参考)，合成的双链多核糖核苷酸，例如聚[I]：聚[C(12)U]，等等；Toll-样受体(TLR)激动剂，例如TLR-3，TLR-4，TLR-7和/或TLR-9；含有已知诱导DC成熟的非甲基化CpG基序的核酸序列等，或其组合。用于本专利技术的BCG可包括完整BCG，BCG细胞壁成分，BC本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
2002.12.06 US 60/431,2671.一种组合物，其包含于体外在树突细胞成熟剂的存在下部分成熟的树突细胞，和药学上可接受的用于体内给药的载体，其中所述的部分成熟的树突细胞保持摄取和加工抗原的能力，且与成熟的树突细胞相比，其中所述的部分成熟的树突细胞产生TNFα、IL-6、IL-10、和/或IL-12，并且显示共刺激分子CD80、CD86和/或CD54的上调,其中的树突细胞成熟剂是卡介苗(BCG)、BCG和干扰素γ(IFNγ)、脂多糖(LPS)、肿瘤坏死因子α(TNFα)、咪唑并喹啉化合物、合成的双链多聚核糖核苷酸、Toll-样受体(TLR)激动剂，含有已知诱导DC成熟的未甲基化CpG基序的核酸序列，或其任意组合。2.权利要求1的组合物，其中的树突细胞获自皮肤、脾、骨髓、胸腺、淋巴结、脐带血或外周血。3.权利要求2的组合物，其中所述的树突细胞获自待治疗的个体。4.权利要求2的组合物，其中的树突细胞获自与待治疗的个体HLA相匹配的健康个体。5.权利要求1的组合物，其中所述BCG包含完整的BCG或BCG来源的脂阿拉伯甘露聚糖。6.权...

【专利技术属性】
技术研发人员：M·L·博希，
申请(专利权)人：西北生物治疗药物公司，
类型：发明
国别省市：