用于获得整体活化的单核细胞的方法技术

本发明专利技术涉及用于产生免疫刺激性自体树突细胞的方法。本发明专利技术还涉及这种细胞用于治疗患有高增殖性疾病如癌症的患者的用途。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于产生整体活化的单核细胞(globallyactivatedmonocyte)的方法及其用途。
技术介绍
树突细胞(DC)被认为是用于起始和控制人类中细胞免疫应答的有效抗原呈递细胞。因为根据DC与T细胞的响应特异性克隆相互作用时其所表达的潜在性能的情况，DC可以是免疫刺激性的或免疫抑制性的，所以DC被认为是T细胞介导的免疫反应中非常重要的关键成员。作为宽的但是广泛接受的概括，未成熟DC比其更成熟对应物更具“耐受原性”，而成熟DC被认为比其未成熟前体更具“免疫原性”。由单核细胞离体产生并且具有特定抗原的DC在任一免疫方向上有效作用的能力依赖于其返回患者后的生存力和活力。逻辑上推断，反作用的免疫刺激性和免疫抑制性DC之间的平衡是DC依赖性治疗性免疫应答的方向和效力的主要决定因素。分别在PCT/EP2014/050010和PCT/EP2014/050012中描述了通过称为反式免疫(transimmunization)的方法产生包括树突细胞的免疫刺激性或免疫抑制性抗原呈递细胞。其中所描述的方法基于破译体外光化学疗法(extracorporealphotopheresis，ECP)的某些机制方面而建立。体外光化学疗法(ECP)已被成功地用于治疗患者亚群中的皮肤T细胞淋巴瘤(cutaneousT-celllymphoma，CTCL)。在ECP中，患有CTCL的患者接受可光活化(photoactivatable)化合物8-甲氧基补骨脂素(8-MOP)。然后对患者进行白细胞单采以获得血沉棕黄层并使这些血沉棕黄层(buffycoat)通过连续的闭合回路(circuit)紫外线暴露装置以辐照所述白细胞单采的血沉棕黄层，从而致死地损伤暴露的淋巴细胞。以这种方式，8-MOP被诱导与DNA的碱基对共价交联。ECP的理念是破坏CTCL的增殖中的转移性T细胞，然后静脉内重新向患者引入濒死细胞。已知这种方法还导致通过的血液单核细胞转化成DC而不需要通过添加外源细胞因子进行刺激。此外，假设这些ECP诱导的DC内化、加工并展示来自肿瘤细胞的抗原，其被8-MOP和UV辐照的组合破坏。已经假设向患者重新引入这些负载的树突细胞至少部分地导致了ECP在治疗CTLC时的成功。然而，还发现，ECP或ECP样过程导致截短的即免疫抑制性或耐受原性DC，其很可能强烈地有助于ECP在治疗移植物抗宿主疾病(通常在骨髓干细胞同种异体移植物之后)中的临床功效。对于ECP在单核细胞分化为免疫刺激性或免疫抑制性DC的精确机理方面依然不清楚(对于ECP过程的综述，参见Girardi等(2002)，TransfusionandApheresisScience，26，181-190)。因此，ECP和ECP样过程被设想为导致免疫刺激性DC和免疫抑制性DC的复杂混合物。当然，尤其从临床观点来看，重要的是理解如何改进ECP和ECP样过程以克服这些限制，以及如何有目的地以及选择性地相对于免疫抑制性DC可优先获得免疫刺激性DC(反之亦然)。另外，在原理上，经典ECP过程是一种体内方法，因为获得的树突细胞混合物被重新输注入患者中。然而，希望具有允许在人或动物体外相对于免疫抑制性DC优先产生免疫刺激性DC(反之亦然)的可用方法。PCT/EP2014/050010和PCT/EP2014/050012中所述的反式免疫方法允许优先产生包括树突细胞的免疫刺激性或免疫抑制性抗原呈递细胞。通过物理力例如机械应力和潜在的与血浆组分(如血小板)的相互作用活化单核细胞。这些活化的单核细胞可以发育成抗原呈递细胞，例如树突细胞，其可以通过与例如凋亡疾病抗原脱落细胞共孵育来支持。活化过程可以通过例如HLA-DR+/CD83+的共表达来监测。然而，通过应用例如8-甲氧基补骨脂素(8-methoxypsoralen，8-MOP)和UV-A，这些活化的单核细胞的分化也可以被导向免疫抑制性抗原呈递细胞，例如树突细胞。可以例如通过GILZ的表达提高来监测向免疫抑制性抗原呈递细胞例如树突细胞的分化。如PCT/EP2014/050010和PCT/EP2014/050012中所述的免疫刺激性或免疫抑制性抗原呈递细胞(如树突细胞)提供了某些益处。它们可以以相对大的量生产，受到其他因素的干扰最小并且是患者特异性的。与常见的方法不同，这种免疫刺激性树突细胞的产生不需要复杂且相当昂贵的细胞因子混合物。在那些标准方法中，细胞因子以比在生理条件下在体内所遇到的浓度高得多(通常按数量级)的浓度使用。专利技术目的和内容专利技术人已经认识到PCT/EP2014/050010和PCT/EP2014/050012中描述的反式免疫方法允许获得整体活化的单核细胞(globallyactivatedmonocyte，GAM)，并且这些GAM不仅可以用于获得免疫刺激性或免疫抑制性抗原呈递细胞，例如树突细胞，而且考虑到它们的吞噬性质，也可用于直接肿瘤杀伤(例如用例如治疗活性抗体所治疗的肿瘤)、用于创伤愈合和/或用于再生医学中的目的。本专利技术的一个目的是提供用于产生整体活化的单核细胞的方法。本专利技术的另一个目的是使用这种整体活化的单核细胞用于抗肿瘤治疗、创伤愈合和再生医学。如通过下文随后的描述将变得明显的，这些和其他目的由独立权利要求的主题得以解决。本专利技术的一些优选实施方案形成了从属权利要求的主题。而本专利技术的另一些实施方案可由随后的描述获得。本专利技术在一定程度上基于PCT/EP2014/050010和PCT/EP2014/050012中所述的反式免疫方法允许获得整体活化的单核细胞(GAM)的认识。此外，这样的GAM可以具有吞噬活性，因此可以用于治疗癌症、创伤愈合和/或再生医学。它们还可以用于分化成免疫刺激性或免疫抑制性抗原呈递细胞，例如树突细胞。这些方面在图24中示意性地总结。假设GAM可以用于例如通过其吞噬活性杀伤肿瘤细胞，因为已经示出治疗性抗体介导的治疗可以包括巨噬细胞对抗体标记的肿瘤细胞的吞噬作用(参见例如Tseng等，PNAS，110(27)，11103-11108(2013)或Gül等，TheJournalofClinicalInvestigation，124(2)，812-823(2014))。类似地，吞噬性巨噬细胞已参与创伤愈合过程(参见例如Willenborg等Blood，120(3)，613-625，2012)。此外，创伤的发生和创伤愈合过程的启动与本文所述的用于获得GAM的方法具有一些相似性(也参见图25)。因此，在本文所述的方法中，单核细胞通过例如机械应力而活化。此外，单核细胞衍生细胞的概念及其用途已经在例如Hume等，JLeukocBiol.；92：433(2012)中进行了讨论。用于小型化和可扩展装置的下文展现的数据允许：(i)模拟经典ECP程序的一些方面，(ii)阐明诱导体外量(extracorporealamount)的血液中单核细胞向免疫刺激性自体树突细胞分化的细胞、分子机理和生物物理条件。该数据表明血小板的活化以及在剪切力条件下单核细胞与这种活化血小板的结合对于获得免疫刺激性自体树突细胞是有益的。如下文所述实验表明的，这些免疫刺激性自体树突细胞可由指示免疫刺激性本文档来自技高网...

【技术保护点】
用于治疗癌症的整体活化的单核细胞，其中与抗肿瘤治疗性抗体组合治疗所述癌症，并且其中所述整体活化的单核细胞可通过至少包括以下步骤的方法获得：a)使体外量的包含单核细胞之哺乳动物对象的血液样品经受物理力，以使得所述单核细胞被整体活化，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于至少HLA‑DR、PLAUR和ICAM‑1的表达提高。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2014.08.01 GB 1413665.9;2014.07.03 US 62/020,5471.用于治疗癌症的整体活化的单核细胞，其中与抗肿瘤治疗性抗体组合治疗所述癌症，并且其中所述整体活化的单核细胞可通过至少包括以下步骤的方法获得：a)使体外量的包含单核细胞之哺乳动物对象的血液样品经受物理力，以使得所述单核细胞被整体活化，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于至少HLA-DR、PLAUR和ICAM-1的表达提高。2.用于获得整体活化的单核细胞的方法，所述方法至少包括以下步骤：a)使体外量的包含单核细胞之哺乳动物对象的血液样品经受物理力，以使得所述单核细胞被整体活化，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于至少HLA-DR、PLAUR和ICAM-1的表达提高。3.根据权利要求2所述的方法，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于前向散射/侧向散射复杂度。4.根据权利要求2或3所述的方法，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于另外至少ABCA1、CCL2、CCL7、CD68、CRK、FAS、IL10、RAB7B、RALA、SCARF1和/或THBS1的表达提高。5.根据权利要求2、3或4中任一项所述的方法，其中所述整体活化的单核细胞的特征在于另外至少CXCL1、CXCL2、CXCL5、CXCL16、ITGA5、ITGAV、MMP9、MSR1、OLR1、PLAU、PLAUR、SIRPa、TIMP1和/或TNF的表达提高。6.根据权利要求2、3、4或5中任一项所述的方法，其中所述整体活化的单核细胞可通过表6的至少3、4、5、6、7、8、9、10、15、20或25种标志物的表达提高来鉴定。7.根据权利要求2、3、4、5或6中任一项所述的方法，其中所述整体活化的单核细胞不表现出GILZ的表达提高。8.根据权利要求2、3、4、5、6或7中任一项所述的方法，其中通过使所述体外量的所述哺乳动物对象血液样品通过装置的流动室而使所述体外量的所述哺乳动物对象血液样品经受物理力，所述装置允许固定地或可调地调节所述体外量的...

【专利技术属性】
技术研发人员：京特·鲍尔，贾斯廷·达克沃思，罗伯特·蒂格拉尔，里查德·埃德尔森，米歇尔·吉拉尔迪，卡斯滕斯·亨佐，奥德里安·海迪，
申请(专利权)人：特兰西穆内有限公司，耶鲁大学，
类型：发明
国别省市：德国;DE