DC诱导活化剂及其应用制造技术

本发明专利技术涉及一种DC诱导活化剂，包括rhTNF-α、没食子酸或核桃青皮提取物。本发明专利技术进一步涉及由上述DC诱导活化剂在诱导DC成熟过程中的应用。与现有技术相比，本发明专利技术提供的DC诱导活化剂能够提高树突状细胞的细胞活性，提高树突状细胞细胞的增值率及成熟率，进而提高树突状细胞的抗原提呈性。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及组织工程领域，特别涉及一种DC诱导活化剂及其应用。
技术介绍
细胞免疫治疗是一种新兴的、具有显著疗效的全新的抗肿瘤治疗方法，弥补了传统的手术、放疗、化疗的弊端，已经被公认为二十一世纪肿瘤综合治疗模式中最活跃、最有发展前途的一种治疗手段,也是世界目前唯一有希望完全消灭肿瘤细胞的治疗手段。细胞免疫治疗疗法是采集人体自身免疫细胞，经过体外培养，使其数量成千倍增多，靶向性杀伤功能增强，然后再回输到人体来杀灭血液及组织中的病原体、癌细胞、突变的细胞，打破免疫耐受，激活和增强机体的免疫能力，兼顾治疗和保健的双重功效。目前在临床中使用最多的细胞免疫治疗疗法主要是DC治疗、CIK治疗和DC-CIK联合免疫治疗。DC是目前发现的功能最强大的抗原提呈细胞(antigenpresentingcell,APC)。近年来，以树突状细胞(dendriticcell,DC)为基础的肿瘤免疫治疗及DC疫苗已取得较大进展，体外制备的DC疫苗显示出明显诱发抗肿瘤免疫应答的能力，具有良好的临床应用前景。目前，从外周血单个核细胞(PBMC)经GM-CSF、IL-4体外诱导培养DC的方法已基本得到公认，但DC体外促成熟的方案尚没有统一的标准，国内主要采用TNF-a因子，但该方法活化的DC成熟度低下，不能分泌促炎因子IL-12，致使培养得到的DC功能缺陷，很大程度上限制了DC疫苗的临床应用工作的开展。因此，有必要对现有DC细胞培养方案进行进一步完善，以有效提高DC疫苗在诱导抗炎或抗肿瘤免疫应答中的作用。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是，针对现有技术培养出的树突状细胞体外诱导成熟率低，细胞增殖率低，且抗原提呈性能差等缺陷，提供一种能够提高树突状细胞成熟率及抗原提呈性能的DC诱导剂及其在诱导DC成熟过程中的应用。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：提供一种DC诱导活化剂，包括rhTNF-α和，没食子酸或核桃青皮提取物。在本专利技术提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为800～1200U/ml和，没食子酸的浓度为5～15μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为10～30μg/ml。在本专利技术提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为1000U/ml和、没食子酸的浓度为10μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为20μg/ml。在本专利技术提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为800U/ml和、没食子酸的浓度为5μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为10μg/ml。在本专利技术提供的DC诱导活化剂中，所述rhTNF-α的浓度为1200U/ml和、没食子酸的浓度为15μg/ml或所述核桃青皮提取物的浓度为30μg/ml。本专利技术进一步提供上述的DC诱导剂在诱导DC成熟过程中的应用。实施本专利技术提供的DC诱导活化剂及其应用，可以达到以下有益效果：与现有树突状细胞诱导活化剂相比，本专利技术提供的DC诱导活化剂，能够促进提高树突状细胞的细胞活性，提高树突状细胞的增值率及成熟率，进而提高树突状细胞的抗原提呈性。具体实施方式本专利技术提供的DC诱导活化剂，包括rhTNF-α(Recombinanthumantumornecrosisfactor-α，重组人肿瘤坏死因子α)和没食子酸；其中，没食子酸可由核桃青皮提取物来代替。进一步地，rhTNF-α能够刺激树突状细胞成熟，以提高树突状细胞抗原提呈能力；优选地，rhTNF-α的浓度为800～1200U/ml。而核桃青皮提取物的主要成份包括没食子酸、甲醇、石油醚、氯仿、正丁醇等，核桃青皮提取物和没食子酸对金黄色葡萄球菌等细菌均具有强抗菌作用，并且对真菌也有明显抑制作用；另外，还能够清除自由基，具有较强的抗氧化活性，以提高树突状细胞的细胞活性，促进其成熟和正常的生长增殖。优选地，没食子酸的浓度为10μg/ml，或核桃青皮提取物的浓度为10～30μg/ml。本专利技术提供的DC诱导活化剂，应用于DC成熟过程的方法，包括以下步骤：S1、获取树突状细胞前体单个核细胞；S2、采用第一诱导剂将树突状前体细胞当个核细胞诱导分化成未成熟树突状细胞；S3、采用第二诱导剂将未成熟树突状细胞诱导分化成成熟的树突状细胞；其中，第二诱导剂为本专利技术提供的DC诱导活化剂。具体地，步骤S1中，优选地，树突状细胞前体单个核细胞来源于新鲜外周血，相比经过冷库储存或者培养传代之后的树突状细胞，从新鲜血液中制备的树突状细胞前体单个核细胞离体时间较短，其细胞活性和状态的减弱或者形态改变程度都较少，更加利于保持其免疫性能。在本专利技术中，树突状细胞前体单个核细胞的具体获取过程为：抽取外周静脉血，稀释，添加淋巴细胞分离液离心10～20分钟后，分离获取外周血单个核细胞；用含有10％～15％的胎牛血清、50～150U/ml青霉素和50～150U/ml链霉素的完全培养基悬浮细胞浓度至(2～6)×106个/ml，孵育1～3小时，更换新的完全培养基，收集细胞悬液，即为树突状细胞前体单个核细胞悬液。步骤S2的具体过程为：取步骤S1获得的树突状细胞前体单个核细胞悬液，离心洗涤后计数，使细胞浓度达到(1～3)×106个/ml，用完全培养基培养，并与培养当天添加第一诱导剂，培养4～7天，每隔2～3天更换培养基。其中，第一诱导剂包括rhGM-CSF(Recombinanthumangranulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，重组人粒-巨细胞集落刺激因子)、GM-CSF(Granulocyte-macrophagecolony-stimulatingfactor，粒-巨细胞集落刺激因子)、IL-4(Interleukin4，白细胞介素4)、rhIL-4(Recombinanthumaninterleukin4，重组人白细胞介素4)和IL-13(Interleukin13，白细胞介素13)；其中，rhGM-CSF的终浓度为800～1200U/ml、GM-CSF的终浓度为5～15ng/mL、IL-4的终浓度为5～15ng/mL、rhIL-4的终浓度为800～1200U/ml和IL-13的终浓度为IL-13的浓度为5～15ng/mL。第一诱导剂所含成分能够诱导树突状细胞前体单个核细胞转化为未成熟的树突状细胞，增大细胞体积，并促进细胞的生长增殖和分化，促进细胞形成集落；同时，对已分化的未本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种DC诱导活化剂，其特征在于，包括rhTNF‑α和，没食子酸或核桃青皮提取物。

【技术特征摘要】
1.一种DC诱导活化剂，其特征在于，包括rhTNF-α和，没食子酸或核
桃青皮提取物。
2.根据权利要求1所述的DC诱导活化剂，其特征在于，所述rhTNF-
α的浓度为800～1200U/ml和，没食子酸的浓度为5～15μg/ml或所述核桃
青皮提取物的浓度为10～30μg/ml。
3.根据权利要求2所述的DC诱导活化剂，其特征在于，所述rhTNF-
α的浓度为1000U/ml和、没食子酸的浓度为10μg/ml或所述核桃青皮提取
物的浓度为20μg/...

【专利技术属性】
技术研发人员：曾宪卓，鲁菲，
申请(专利权)人：深圳爱生再生医学科技有限公司，
类型：发明
国别省市：广东;44