一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法技术

一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法，涉及树突状细胞。胃癌细胞MGC-803总RNA的提取、鉴定；SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽的合成；外周血单个核细胞的分离；单核细胞的获取；未成熟树突状细胞的体外诱导；RNA转染未成熟树突状细胞；pJAK2(1001－1013)多肽负载RNA转染的树突状细胞；未成熟树突状细胞的成熟诱导，即可产生成熟树突状细胞。可改善树突状细胞抗原递呈功能和特异性免疫应答水平，采用SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽修饰胃癌细胞总RNA转染的树突状细胞。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种有效递呈胃癌抗原的树突状细胞的制备方法，其特征在于包括如下步骤：1）胃癌细胞MGC?803总RNA的提取、鉴定：采用试剂从胃癌细胞MGC?803中提取总RNA，紫外分光光度计测定RNA浓度、琼脂糖凝胶电泳鉴定RNA分子量大小；2）SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽的合成；3）外周血单个核细胞的分离；4）单核细胞的获取：采用人CD14+单核细胞分离试剂盒从步骤3）分离得到的PBMC中分选出单核细胞；5）未成熟树突状细胞的体外诱导：将步骤4）获取的单核细胞在RPMI?1640培养基中经细胞因子GM?CSF和IL?4诱导培养后即产生未成熟树突状细胞；6）RNA转染未成熟树突状细胞；7）pJAK2(1001－1013)多肽负载RNA转染的树突状细胞：pJAK2(1001–1013)多肽与经RNA电穿孔转染的iDC孵育4h进行负载；8）未成熟树突状细胞的成熟诱导：将步骤6）和7）经RNA转染和SOCS1拮抗剂pJAK2(1001－1013)多肽负载后的iDC采用LPS和TNF?α诱导后，即可产生成熟树突状细胞。FDA00003349736600011.jpg

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：陈玉强，王勇军，颜江华，王生育，
申请(专利权)人：中国人民解放军第一七四医院，
类型：发明
国别省市：