哺乳动物多潜能干细胞外源基因高效转染及快速筛选制造技术
【技术实现步骤摘要】
哺乳动物多潜能干细胞外源基因高效转染及快速筛选所属
本专利技术涉及一种利用脂质体法将外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞以及快速筛选转基因多潜能干细胞克隆的方法。
技术介绍
目前，公知的利用脂质体法构建转基因细胞已经在科研、生产中广泛应用。但是，外源基因转染的受体细胞多为成体细胞而非多潜能干细胞。因而，利用公知的脂质体法操作规程转染哺乳动物多潜能干细胞会出现外源基因瞬时转染效率低，同时利用公知的转基因细胞筛选程序会造成转基因多潜能干细胞易发生分化、衰亡而导致外源基因转染失败。
技术实现思路
为了克服现有的脂质体法操作规程以及转基因细胞克隆筛选不适用于哺乳动物多潜能干细胞的不足，本专利技术提供一种利用脂质体法高效转染哺乳动物多潜能干细胞以及快速筛选转基因多潜能干细胞的方法。本专利技术解决其技术问题所采用的技术方案是：1外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞采用脂质体法，在外源基因转染哺乳动物多潜能干细胞6小时后，用分别含有5％、15％胎牛血清的干细胞培养液培养36小时，而后换为15％胎牛血清的干细胞培养液。流式细胞仪对比检测外源基因的瞬时转染效率。2转基因多潜能干细胞快速...
【技术保护点】
一种利用脂质体法将外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞以及快速筛选转基因多潜能干细胞克隆的方法。
【技术特征摘要】
1.一种利用脂质体法将外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞的方法，其特征在于，(1)外源基因高效转染哺乳动物多潜能干细胞的方法步骤如下：配制绵羊羊水来源多潜能干细胞培养液：培养液I：DMEM+1％L-谷氨酰胺+1％非必需氨基酸+1％丙酮酸钠+微量β-巯基乙醇+5ng或500u/mLLIF+5ng/mLbFGF；培养液II：培养液I+15％FBS；培养液III：培养液I+5％FBS，用0.22μL的滤器过滤，4℃保存；所述脂质体法转染的步骤为：转染24h前，待转染绵羊羊水来源多潜能干细胞胰酶消化重悬细胞，以5×104细胞/孔密度接种2×24孔板，使用培养液II，待细胞80％汇合度时，进行转染；转染前，AFSC用D-PBS洗三遍，换为Opti-MEM培养液于37℃5％CO2饱和湿度条件下培养30～40min；350ng/μL质粒DNA2μL+100μLOpti-MEM+...
【专利技术属性】
技术研发人员：王凤武，荣威恒，李晓奇，詹树柏，达赖，赵世华，孙杰，羿静，
申请(专利权)人：内蒙古自治区农牧业科学院，
类型：发明
国别省市：
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