本发明专利技术提供一种包含产生具有变异糖基化方式的糖蛋白的细胞的组合物和方法。所述方法和组合物可以用来制备具有治疗价值的抗体和蛋白质。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
已经表明碳水化合物、糖类、或者糖分子组成中的变化会影响IgG对三类 Fc γ R(Fe γ RI、Fc γ RII和Fc γ RIII)的亲和性，其中Fc γ R将IgG-介导的免疫反应与效应子功能联系起来(Wright 和 Morrison，Trends Biotechnol 15(1) J6-32 ;Gessner 等，Ann Hematol 76(6) :231-48(1998) Jefferis 等，Immunol Rev 163 :59-76 (1998). Ravetch 和 Bolland, Annu Rev Immunol 19:275-9(^2001))。根据与蛋白质部分的结合形式的不同，通常将糖蛋白的糖链分为下列两大类即， 与天冬酰胺结合的糖链(N-糖苷连接的糖链)；以及与其它氨基酸(如丝氨酸或苏氨酸)结合的糖链(0-糖苷连接的糖链)。通常，它们具有下述结构式(I)所示的基本共同核结构权利要求1.一种糖蛋白，该糖蛋白被修饰为表现出变异糖基化方式，其中所述变异糖基化方式的特征在于，与对应的野生型糖蛋白相比，至少两种糖分子的水平发生变化。2.根据权利要求1所述的糖蛋白，其中所述变异糖基化方式通过葡萄糖、半乳糖、或这二者的水平变化来证实。3.根据权利要求1所述的糖蛋白，其中所述半乳糖的水平变化为降低。4.根据权利要求1所述的糖蛋白，其中所述葡萄糖的水平变化为增加。5.根据权利要求1所述的糖蛋白，其中所述变异糖基化方式通过葡萄糖水平的增加、 半乳糖水平的降低以及岩藻糖水平的降低来证实。6.根据权利要求1所述的糖蛋白，所述变异糖基化方式通过末端葡萄糖部分来证实。7.根据权利要求1所述的糖蛋白，所述变异糖基化方式包括具有式(I)或(II)所示结构的N-连接多糖8.—种由经修饰的宿主细胞产生的抗体，该抗体包含N-连接多糖，其中，与对应的由未修饰的宿主细胞产生的抗体相比，所述抗体对Fc γ受体Illa(FcYRlIIa)的结合亲和性增加，并且/或者对Fcy受体IIb(FcyRnb)的结合亲和性降低，从而提高了对表达 Fc γ RIIIa和/或Fc γ RIIb的效应细胞的ADCC(抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)活性。9.一种由经修饰的宿主细胞产生的抗体，该抗体包含N-连接多糖，其中，与由对应的未修饰的宿主细胞产生的对应的抗体相比，所述抗体的ADCC活性增加，并且其中，所述增加的ADCC活性针对表达高亲和性Fc γ受体Fc YRIIIa 158V/V的效应细胞、以及表达低亲和性 Fc γ 受体 Fc YRIIIal58F/F 或 Fc YRIIIa 158F/V 的效应细胞。10.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述N-连接多糖包含一个葡萄糖分子、四个甘露糖分子和两个N-乙酰基葡萄糖胺分子。11.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述N-连接多糖包含一个或多个岩藻糖分子。12.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述N-连接多糖具有式(I)或(II)所示的结构13.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述N-连接多糖与所述抗体的Fc区相连。14.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述抗体结合癌抗原。15.根据权利要求14所述的抗体，其中所述癌抗原选自由HER2、免疫球蛋白εFc受体 II、Alk-1、CD20、EGF 受体、VEGF 受体、FGF 受体、NGF 受体、PDGF 受体、EpCam, CD3、CD4、 CD1 la、CD19、CD22、CD30、CD33、CD38、CD40、CD51、CD55、CD80、CD95、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、 CTLA-4、黏蛋白1、黏蛋白16、内皮糖蛋白、间皮蛋白受体、Nogo受体、叶酸受体、CXCR4、胰岛素样生长因子受体、神经节苷脂⑶3、以及α和β整联蛋白所组成的组。16.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述抗体为抑制性抗体。17.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述抗体为IgG抗体。18.根据权利要求8或9所述的抗体，其中，与对应的由未修饰的CHO细胞克隆、 CHO-Kl (ATCC#CCL-61 和 CRL-9618)或 CH0-DG44anvitrogen#U609_012)产生的抗体相比，所述抗体对表达低亲和性FcR的Fc y RIIIal58F/F或Fc γ RIIIa 158F/V的效应细胞的 ADCC (抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)活性增加。19.根据权利要求8或9所述的抗体，其中，与对应的由未修饰的CHO细胞克隆、 CHO-Kl (ATCC#CCL-61 和CRL-9618)或CH0-DG44(Invitrogen#12609_012)产生的抗体相比， 所述抗体对表达高亲和性FcR的Fc y RIIIal58V/V的效应细胞的ADCC (抗体依赖性细胞介导的细胞毒性)活性增加。20.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述宿主细胞为中华仓鼠卵巢(CHO)细胞。21.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述宿主细胞选自由NSO、SP2/0、HEK293、 PER. C6和TO2/0细胞组成的组。22.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述宿主细胞为骨髓瘤细胞。23.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述效应细胞为人外周血液单核细胞 (PBMC)。24.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述抗体为抗-Her2抗体。25.根据权利要求8或9所述的抗体，其中所述效应细胞为NK细胞、单核细胞、巨噬细胞、或多形核中性粒细胞(PMN)。26.—种N-连接多糖，包含一个葡萄糖分子、四个甘露糖分子和两个N-乙酰基葡萄糖胺分子。27.根据权利要求沈所述的N-连接多糖，其中所述葡萄糖位于所述N-连接多糖的末端，并且该N-连接多糖可任选地包含一个或多个岩藻糖分子。28.根据权利要求沈所述的N-连接多糖，具有式(I)所示的结构29.根据权利要求沈所述的N-连接多糖，具有式(II)所示的结构30.一种经分离的糖蛋白，其包含权利要求沈至四中任意一项所述的N-多糖。31.根据权利要求30所述的糖蛋白，其中该糖蛋白为抗体。32.根据权利要求30所述的糖蛋白，其中该糖蛋白为酶。33.根据权利要求31所述的糖蛋白，其中所述N-连接多糖与所述抗体的Fc区相连。34.根据权利要求31所述的糖蛋白，其中所述抗体结合癌抗原。35.根据权利要求34所述的糖蛋白，其中所述癌抗原选自由HER2、免疫球蛋白εFc受体 II、Alk-1、CD20、EGF 受体、VEGF 受体、FGF 受体、NGF 受体、PDGF 受体、EpCam、CD3、CD4、 CD1la、CD19、CD22、CD30、CD33、CD38、CD40、CD51、CD55、CD80、CD95、CCR2、CCR3、CCR4、CCR5、 CTLA-4、黏蛋白1、黏蛋白16、内皮糖蛋白、间皮蛋白受体、Nogo受体、叶酸受体、CXCR4、胰岛素样生长因子受体、神经节苷脂⑶3、以及α和β整联蛋白所组成的组。36.根据权利要求31所述的糖蛋白，其中所述抗体由经修饰的宿主细胞产生，所述宿主细胞产生基本上同种群的N-连接多糖。37.根据权利要求31所述的糖蛋白，其中，与对应的由未修饰的CHO细胞克隆、本文档来自技高网...
【技术保护点】
１．一种糖蛋白，该糖蛋白被修饰为表现出变异糖基化方式，其中所述变异糖基化方式的特征在于，与对应的野生型糖蛋白相比，至少两种糖分子的水平发生变化。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：刘诚，
申请(专利权)人：尤里卡治疗公司，
类型：发明
国别省市：US
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