一种以大孔阴离子树脂为填充料的果糖基转移酶的初纯化方法技术

本发明专利技术涉及一种以大孔阴离子树脂为填充料的果糖基转移酶的初纯化方法，将经预处理大孔阴离子树脂装层析柱，用磷酸缓冲液冲洗层析柱层析柱，平衡层析柱，将含有果糖基转移酶的粗酶液上样，用两倍体积的磷酸缓冲液洗脱，再用两倍体积的磷酸缓冲液配置的1mol/mL的NaCl溶液0-1mol/mL梯度洗脱，用UV280nm在线监测，收集有酶活的峰，将收集到有酶活的酶液浓缩即得果糖基转移酶。本发明专利技术通过先球磨再超高压均质的方法得到了酶活较高的酶液，再采用大孔阴离子树脂D290为填充料对果糖基转移酶进行初纯化，得到具有一定纯度的果糖基转移酶，对于利用果糖就转移酶生产低聚果糖具有十分重要的现实意义和工业价值。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于蛋白分离纯化
，尤其是。
技术介绍
随着人们对保健食品和低热量食品需求的增加，自20世纪80年代以来出现了一系列所谓的替代甜味剂，包括异麦芽低聚糖、大豆低聚糖、帕拉金糖和低聚果糖在内的低聚糖是其中很重要的一类，其重要性在于它们具有难消化、低热量、降血脂、增殖双歧杆菌、抗龋齿及美容等独特的生理功能。低聚果糖(Fructooligosaccharides，简称F0S)，又称寡果糖或蔗果三糖族低聚糖，分子式为G-F-Fn，n = 1 3(G为葡萄糖，F为果糖)。低聚果糖是蔗糖分子的果糖残基上通β -2-1糖苷键连接1 3个果糖基而形成的果糖寡聚体蔗果三糖(1-kestose，GF2)、 蔗果四糖(nystose，GF3)、蔗果五糖(lF-fructofuranosyl nystose，GF4)及其混合物。它一般是利用微生物或植物中具有果糖转移活性的酶作用于蔗糖而得的。目前低聚果糖的工业生产主要是通过发酵产生的果糖基转移酶 (fructosyltransferase)催化而得到的。由于发酵得到的果糖基转移酶经过破壁后的酶液含有较多的其它成分，影响果糖基转移酶的催化活性和本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种以大孔阴离子树脂为填充料的果糖基转移酶的初纯化方法，其特征在于：将经预处理大孔阴离子树脂装层析柱，用２０ｍｍｏｌ／ｍＬ的ｐＨ值为６．５磷酸缓冲液以２．０ｍＬ／ｍｉｎ的流速通过层析柱，平衡层析柱，将含有果糖基转移酶的粗酶液上样，用两倍体积的磷酸缓冲液洗脱，再用两倍体积的磷酸缓冲液配置的１ｍｏｌ／ｍＬ的ＮａＣｌ溶液梯度洗脱，用ＵＶ２８０ｎｍ在线监测，收集有酶活的峰，将收集到有酶活的酶液浓缩即得果糖基转移酶。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：李玉，荆玮，刘逸寒，刘晓光，王稳航，路福平，
申请(专利权)人：天津科技大学，
类型：发明
国别省市：12