【技术实现步骤摘要】
【技术保护点】
一种小鼠胰腺干／祖细胞的离体筛选扩增技术，其特征在于：通过胶原酶部分消化、两次转接，挑取细胞集落的方法筛选和扩增出具有强增殖能力及多向分化潜能的成体胰腺干／祖细胞的技术方法。步骤如下： （１）胶原酶部分消化：向剪碎的胰腺组织块中加入０．８ｍｇ／ｍｌ胶原酶Ⅳ消化液及０．１ｍｇ／ｍＬ的ＤＮＡ酶Ⅰ，体积以没过组织为准，３７℃孵育２０分钟对胰腺组织进行部分消化。 （２）胰腺干／祖细胞筛选：用含１０％胎牛血清的Ｄ／Ｆ１２培养基重悬细胞沉淀，将胰腺单细胞悬液接种于一个６ｃｍ培养皿中，３７℃５％ＣＯ↓［２］培养箱中培养４０ｍｉｎ，将未贴壁的细胞连同培养基一起转接到２个新６ｃｍ培养皿中，培养过夜；２４ｈ后，将经过夜培养皿中仍未贴壁的细胞及其培养基一起第二次转接到另外２个新６ｃｍ培养皿中，再进行过夜培养，第一次转接过夜培养贴壁的细胞换成扩增培养基（添加有２ｍｍｏｌ／Ｌ谷氨酰氨、１００ＩＵ青霉素－１００μｇ链霉素、２％胎牛血清、２％Ｂ２７、２０ｎｇ／ｍＬ表皮生长因子、１０μｇ／ｍＬ胰岛素、５０μｍｏｌ／Ｌβ－巯基乙醇的ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养基）继续培养；２４ｈ后，弃去第二次转接再过夜培养皿中未贴壁细胞及...
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：滕春波，王法，张丽新，
申请(专利权)人：东北林业大学，滕春波，王法，
类型：发明
国别省市：93
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