猪卵丘干细胞的分离方法技术

技术编号:6914014 阅读:362 留言:0更新日期:2012-04-11 18:40
本发明专利技术公开了一种猪卵丘干细胞的分离方法。其方法是抽取青年母猪卵丘卵母细胞复合物,卵母细胞体外成熟培养后,消化脱离卵丘细胞,收集消化的卵丘细胞进行培养,待有细胞集落出现并形成较大的细胞集落后,消化传代接种到饲养层上,在含有细胞因子的培养液中进行培养,分离培养的卵丘干细胞具有鸟巢状细胞生长形态,细胞圆形、核较大,细胞表达干细胞特有的标记Oct4、Nanog、SSEA1,体外分化能够形成来源于三个胚层的神经细胞、肌肉细胞和肝脏细胞,结果显示从猪卵丘细胞中分离培养了卵丘干细胞。

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及动物干细胞的分离方法,尤其涉及一种。 干细胞(Stem Cell)是一种尚未充分分化和成熟的细胞,在诱导环境条件下具有形成各种组织器官组成细胞的潜在功能,被医学界称之为“万能细胞”。干细胞的用途非常广泛,涉及到医学的多个领域。干细胞及其衍生组织器官的广泛临床应用,将产生一种全新的医疗技术,也就是再造人体正常的甚至年轻的组织器官,从而使人类能够用上自己的或他人的干细胞或由干细胞所衍生出的新的组织器官,来替换自身病变的或衰老的组织器官。干细胞的研究将为临床医学提供更为广阔的应用前景。随着基因工程、胚胎工程、细胞工程等各种生物技术的快速发展,按照一定的目的,在体外人工分离、培养干细胞已成为可能,利用干细胞构建各种细胞、组织、器官作为移植器官的来源,这将成为干细胞应用的主要方向。当前,干细胞和再生医学的研究已成为生命科学中最为引人注目的领域,其理论的日臻完善和技术的迅猛发展必将在疾病治疗和生物医药等领域产生划时代的成果,是对传统医疗手段和医疗观念的一场重大革命。干细胞作为起源细胞,具有多向分化潜能和自我复制能力的原始未分化细胞,是形成哺乳类各组织器官的祖宗细胞。干细胞在形态上通常本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种猪卵丘干细胞的分离方法,其特征在于,包括以下步骤:(1)猪卵丘细胞的采集从青年母猪卵巢表面抽取直径3-6mm卵泡,挑选卵丘细胞包裹2层以上致密且胞质均匀的卵丘卵母细胞复合物,用TCM-199卵母细胞成熟液洗涤3遍,然后将每70-80个卵丘卵母细胞复合物移入24孔培养板中进行培养,每孔400μlTCM-199卵母细胞成熟液,成熟液上面覆盖石蜡油,在39℃、5%CO2、100%湿度的培养箱中培养42±2h;成熟培养后的卵丘卵母细胞复合物用1mg/ml透明质酸酶消化脱去卵母细胞周围的卵丘细胞,收集卵丘细胞用于猪卵丘干细胞的分离培养;(2)猪卵丘干细胞的分离与培养取采集到的猪卵丘细胞,经PBS...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员:曹鸿国章孝荣蒲勇杨盼张运海刘亚陶勇方富贵李运生任春环张子军丁建平刘洪瑜
申请(专利权)人:安徽农业大学
类型:发明
国别省市:34

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