一种检测人结直肠癌KRAS基因突变的方法和试剂盒技术

本发明专利技术涉及一种检测基因突变的方法和试剂盒，具体涉及一种检测KRAS基因12、13密码子突变的方法和试剂盒。该试剂盒包括：PCR缓冲液、dNTP、DNA聚合酶、特异性引物对、荧光染料、水，特异性探针、野生型对照，其特征在于，DNA聚合酶为HotStarTaqDNA聚合酶，荧光染料为SYTO9荧光染料，1）按照常规方法采集待分析的基因组DNA；2）对上述基因组DNA进行PCR扩增，得到PCR扩增产物；反应完成后，将PCR产物再进行变复性；3）对上述PCR扩增产物进行熔解曲线分析，和野生型的基因组DNA的PCR扩增产物所产生的熔解曲线相比，突变型的基因组DNA的PCR扩增产物所产生的熔解曲线先下降。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．　一种检测人结直肠癌ＫＲＡＳ基因突变的方法，其特征在于，包括以下步骤：１）按照常规方法采集待分析的基因组ＤＮＡ；２）对上述基因组ＤＮＡ进行ＰＣＲ扩增，得到ＰＣＲ扩增产物；反应完成后，将ＰＣＲ产物再进行变复性；３）对上述ＰＣＲ扩增产物进行熔解曲线分析，和野生型的基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物所产生的熔解曲线相比，突变型的基因组ＤＮＡ的ＰＣＲ扩增产物所产生的熔解曲线先下降；步骤２）中，ＰＣＲ扩增使用的特异性引物对选自：引物对Ａ、引物对Ｂ或引物对Ｃ；其中，引物对Ａ包括：正向引物ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：１和反向引物ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：２，引物对Ｂ包括：正向引物ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：３和反向引物ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：４，引物对Ｃ包括：正向引物ＳＥＱ　ＩＤ　Ｎｏ：５和反向引物ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：６；每２０μｌ的ＰＣＲ扩增体系包括：基因组ＤＮＡ溶液、２μｌ　ＰＣＲ缓冲液（１０×）、０．６－１．０μｌ氯化镁溶液、１．６μｌ　ｄＮＴＰ、０．１－０．３μｌ　ＨｏｔＳｔａｒＴａｑ　ＤＮＡ聚合酶、１００－２００ｎＭ正向引物和１００－２００ｎＭ反向引物、２－５μｌ　ＳＹＴＯ　９荧光染料，其余为水；ＰＣＲ扩增的过程为：９５℃　１５分钟，９５℃　１０－１５秒，６０℃　１０－１５秒，７２℃　１０－１５秒，进行２０－２５个循环，８１℃　１０－１５秒，６０℃　１０－１５秒，７２℃　１０－１５秒，进行１５个循环；７２℃　２分钟；反应完成后，将ＰＣＲ产物再进行变复性，９０℃３０秒，５０℃１分钟。...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：张泓，姬云，侯青，
申请(专利权)人：苏州科贝生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：32