一种NK细胞保护运输液制造技术

本发明专利技术涉及免疫细胞技术领域，具体涉及一种NK细胞保护运输液。所述NK细胞保护运输液，包括如下组分：HEPES缓冲液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸，具有适用于低温保存、细胞活性高、保存时间长、安全性高、运输成本低、操作简单的优点。操作简单的优点。操作简单的优点。

【技术实现步骤摘要】
一种NK细胞保护运输液


[0001]本专利技术涉及免疫细胞
，具体涉及一种NK细胞保护运输液。

技术介绍

[0002]自然杀伤细胞(natural killer cell，NK)作为机体固有免疫系统的细胞毒性淋巴细胞，在机体的免疫监视中扮演着非常重要的角色，在抗肿瘤及抗病毒的免疫应答中发挥重要作用。NK细胞识别靶细胞无MHC限制性，不需抗原激活，更不需抗体的协助，就可以直接识别，非特异性地杀伤靶细胞，例如杀伤被病毒感染的细胞和肿瘤细胞，且这种抗感染和抗肿瘤的杀伤作用是广谱的，属于天然免疫系统的重要细胞组成成分，具有免疫监视和免疫清除功能，是人体防御体系的第一道屏障。同时，还可以产生一系列的细胞因子，进而对机体的适应性免疫进行调节，是连接机体固有免疫和特异性免疫的桥梁。
[0003]近年来，随着对NK细胞活化及功能的深入研究，NK细胞免疫治疗肿瘤在临床上具有良好的应用前景，NK细胞过继免疫疗法也成为肿瘤治疗的新策略。
[0004]制备培养好的NK细胞在回输前一般有个运输的过程，如不回输给患者，一般则需冷冻保存。NK细胞制备扩增后如何保存运输是个问题，因为NK细胞从制备到使用需要一段时间，细胞处理完以后需马上输注(12小时内)，否则时间过长会影响细胞活性与品质。
[0005]NK细胞体外培养与临床使用时间节点有时不能有效衔接，如果延长培养时间会导致成本增加，同时培养时间超过最佳对数生长期后细胞的生长状态及活性会下降，从而影响细胞的活性与后续治疗质量，因此培养后的NK细胞如何保存成了必须考虑并解决的问题。
[0006]目前NK细胞运输方式通常有两种。一种是在冻结状态下，液氮冻存状态下进行运输，另一种是非冻结运输。两种方法都存在一些弊端。
[0007]液氮冻存状态下可维持细胞稳定性，冻存液中通常加入二甲基亚砜(dimathylsulfoxide，DMSO)。DMSO是一种细胞高毒性的化学试剂，会导致人体产生恶心，头痛，呕吐甚至休克的反应，在常规细胞培养中被严格控制在1％以下。但是，为了保护细胞，冻存液中的DMSO比例高达10％。
[0008]比如中国专利申请CN110100812A公开了一种免疫细胞的冻存回输液，此冻存回输液由0.9％的氯化钠生理盐水溶液和以下组分组成：5％
‑
10％的二甲基亚砜(DMSO)，1％
‑
3％的右旋糖酐，1％
‑
5％的葡萄糖，5％
‑
10％的人血清白蛋白(Human Serum Albumin，HSA)，50μg/mL
‑
250μg/mL的维生素C和50μg/mL
‑
150μg/mL的维生素E，0.5％的葡萄糖酸钠，0.03％
‑
0.04％的氯化钾和0.03％
‑
0.04％的氯化镁。
[0009]虽然在低温冻存条件下DMSO可以起到保护作用，但是复苏过程中，一旦细胞复温则会遭受不良环境，这也是细胞冻存和复苏过程中细胞死亡的一个主要原因。并且液氮状态下进行运输危险性高(液氮温度为
‑
196℃)，细胞经过冻存后复苏过程中会引起细胞活性下降、对后续治疗造成影响。
[0010]非冻结运输。常温培养基下运输，但是培养液晃动，会导致细胞发生机械损伤。为
保护细胞，需把培养瓶灌满培养液，才能安全运输，这样耗费培养基过多，体积较大，成本就会增加。对技术人员、操作环境及仪器的要求较高，使其应用受到限制。
[0011]为了降低运输成本，使操作简单化，同时保证细胞的活性和安全性，急需一种新的NK细胞运输方式——低温保存细胞。
[0012]低温保存细胞，通过降低或抑制细胞新陈代谢程度达到延长细胞在体外寿命的目的。理论上来说，低温下细胞代谢活动水平更低，保存时间比常温下长的多。同时可应用普通冰箱保存，生产运输成本和操作技术与常温保存基本相同，提高细胞的保存量、利用度，扩大细胞供应范围，具有很广的应用前景，但是目前低温保存、运输NK细胞的时间较短，限制了低温保存方式的广泛应用。
[0013]NK细胞在临床的应用是大势所趋，所以研发一种有效的NK细胞保护运输液是非常必要的。

技术实现思路

[0014]本专利技术的目的是克服现有技术的不足而提供一种适用于低温保存、细胞活性高、保存时间长、安全性高、运输成本低、操作简单的NK细胞保护运输液。本专利技术提供了一种NK细胞保护运输液，用于4℃保存细胞，而不需冷冻保存，从而可以很好地保护细胞的活性。
[0015]本专利技术是通过以下技术方案予以实现的：
[0016]一种NK细胞保护运输液，包括如下组分：HEPES缓冲液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸。
[0017]优选地，所述的NK细胞保护运输液，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液60
‑
96份、葡萄糖注射液1
‑
10份、海藻糖溶液1
‑
15份、人血白蛋白1
‑
10份、芒果提取物溶液1
‑
15份和甘氨酸溶液1
‑
15份。
[0018]优选地，述的NK细胞保护运输液，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液60
‑
96份、5wt％葡萄糖注射液1
‑
10份、50wt％海藻糖溶液1
‑
15份、20wt％人血白蛋白1
‑
10份、0.5wt％芒果提取物溶液1
‑
15份和1wt％甘氨酸溶液1
‑
15份。
[0019]优选地，所述的NK细胞保护运输液，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液65
‑
80份、5wt％葡萄糖注射液3
‑
8份、50wt％海藻糖溶液5
‑
10份、20wt％人血白蛋白2
‑
8份、0.5wt％芒果提取物溶液5
‑
10份和1wt％甘氨酸溶液5
‑
10份。
[0020]优选地，所述50wt％海藻糖溶液是经过0.22μm滤膜过滤除菌的。
[0021]本专利技术还涉及上述的NK细胞保护运输液的制备工艺，将HEPES缓冲液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸混合均匀后即得。
[0022]本专利技术还涉及上述的NK细胞保护运输液的使用方法，包括如下步骤：将NK细胞采用所述NK细胞保护运输液重悬，调整细胞密度，装入细胞保存运输袋中保存即可。
[0023]优选地，所述保存的温度为4
‑
10℃。
[0024]优选地，调整细胞密度为1
×
107～5
×
107个/mL。
[0025]本专利技术还涉及上述的NK细胞保护运输液在保护NK细胞中的应用。
[0026]NK细胞保护运输液不是冷冻细胞液，而是将本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
1.一种NK细胞保护运输液，其特征在于，包括如下组分：HEPES缓冲液、葡萄糖注射液、海藻糖溶液、人血白蛋白、芒果提取物和甘氨酸。2.根据权利要求1所述的NK细胞保护运输液，其特征在于，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液60
‑
96份、葡萄糖注射液1
‑
10份、海藻糖溶液1
‑
15份、人血白蛋白1
‑
10份、芒果提取物溶液1
‑
15份和甘氨酸溶液1
‑
15份。3.根据权利要求1所述的NK细胞保护运输液，其特征在于，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液60
‑
96份、5wt％葡萄糖注射液1
‑
10份、50wt％海藻糖溶液1
‑
15份、20wt％人血白蛋白1
‑
10份、0.5wt％芒果提取物溶液1
‑
15份和1wt％甘氨酸溶液1
‑
15份。4.根据权利要求1所述的NK细胞保护运输液，其特征在于，按照体积份数计，包括如下组分：HEPES缓冲液65
‑
80份、5wt％葡萄糖注射液3

【专利技术属性】
技术研发人员：胡向兵，姬云，
申请(专利权)人：苏州科贝生物技术有限公司，
类型：发明
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