本发明专利技术提供了一种联合检测慢性粒细胞白血病试剂盒，所述的试剂盒包括：用于DNA文库构建的专用接头、用于检测基因突变、融合、缺失的特异性复合引物和用于文库扩增的复合引物。所述的专用接头为接头引物1分别和8条不同的i5端引物构成的8个二聚体；所述的基因突变、融合、缺失的类型为BCR/ABL融合、FGFR1重排、JAK2基因V617F突变、JAK2重排、NUP98重排、PDGFRA重排、PDGFRB重排；文库扩增复合引物具有不同的i7端，所述的引物的序列为SEQ ID NO:39
【技术实现步骤摘要】
一种联合检测慢性粒细胞白血病检测试剂盒
[0001]本专利技术属于分子生物检测领域，具体涉及一种联合检测慢性粒细胞白血病检测试剂盒。
技术介绍
[0002]慢性粒细胞白血病（chronic myeloid leukemia，CML）是基于多能干细胞水平上的恶性疾病，特点是具有获得性的异常的染色体，以骨髓及外周血中粒细胞的无限增殖为主要特征。慢性粒细胞白血病对血液和骨髓的影响主要表现在产生大量不成熟的白细胞，这些白细胞在骨髓内聚集，抑制骨髓的正常造血；并且能够通过血液在全身扩散，导致病人出现贫血、容易出血、感染及器官浸润等。
[0003]特异性的细胞遗传学变化在大约95%的慢性粒细胞白血病患者中都有发生，具体表现为9号和22号染色体发生易位，导致形成费城染色体（Ph染色体），并且产生BCR/ABL融合基因，其对应的融合蛋白具有可异常升高酪氨酸蛋白激酶活性的特点，此融合蛋白可催化并且磷酸化多种底物蛋白酪氨酸残基，继而激活多条信号传导途径，促进细胞増殖，减少细胞调亡。
[0004]慢性粒细胞白血病主要依靠血常规、骨髓穿刺活检来诊断的，血常规检测难以对疾病的早期进行判断，骨髓穿刺活检对病人造成的损伤较大且操作不便。
[0005]研究癌症的遗传谱能够鉴定导致恶性表型的基因。这些基因谱(包括基因表达和突变)提供了关于正常细胞和疾病细胞的生物学过程的有价值的信息。然而，癌症在它们的遗传“特征”中存在广泛的不同，这导致在诊断和治疗、以及开发有效疗法中存在困难。
[0006]传统的荧光PCR法检测存在每次只能检测一个位点，需要的样品量较多；检测成本较高；实验操作数量较多，检测程序耗时长等缺陷。
[0007]中国专利201710493398.0中公开了一种癌症相关基因突变高灵敏度检测方法和试剂盒。通过针对目的基因设计一组带标签引物组，并分别进行两步扩增，然后再进行二代测序的过程，完成癌症相关基因突变的检测。该方法能够有效排除假阳性的低频突变，检测结果灵敏度和特异性都较高。但其数据分析过程复杂，增加了检测时间。
[0008]提供一种能够简易且高效的慢性粒细胞白血病检测试剂盒十分必要。
技术实现思路
[0009]本专利技术提供了一种检测试剂盒，通过对送检样品的DNA和RNA共同提取，对RNA进行逆转录成cDNA后，与DNA一起进行高通量测序文库构建，并进行高通量测序，针对慢性粒细胞白血病常见的分子遗传学变异，一次性检测多种变异类型。
[0010]一方面，本专利技术提供了一组用于检测多种基因突变、融合、缺失等变异类型的特异性复合引物。
[0011]所述的特异性复合引物的序列如下表1。
[0012]表1 特异性复合引物表
检测位点引物名称引物序列SEQIDNO
BCR/ABL融合ABL1-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCCTTCTTGGATTTGCAGCCCACCAGCTSEQIDNO:10BCR/ABL融合ABL1-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGTTTTCCTTGGAGTTCCAACGAGCGGCSEQIDNO:11BCR/ABL融合ABL1-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTCAAAGTCAGATGCTACTGGCCGCTGSEQIDNO:12BCR/ABL融合ABL1-4GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGTTTGGGCTTCACACCATTCCCCATTGTSEQIDNO:13BCR/ABL融合ABL1-5GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCGTCGGCCACCGTTGAATGATGATGAACCSEQIDNO:14BCR/ABL融合ABL1-6GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGCTGCACCAGGTTAGGGTGTTTGATCTCTSEQIDNO:15FGFR1重排FGFR1-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCCGAGGCATGGAGTATCTGGCCTCCAAGSEQIDNO:16FGFR1重排FGFR1-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCATGGACAAGCCCAGTAACTGCACCAACSEQIDNO:17FGFR1重排FGFR1-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGAGATGAGGAAGGCCCCTGTGCAATAGATGASEQIDNO:18FGFR1重排FGFR1-4GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCCAGAGTTCATGGATGCACTGGAGTCAGCAGSEQIDNO:19FGFR1重排FGFR1-5GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCAGCCCTCTCCCAGGGGTTTGCCTAAGSEQIDNO:20
表1续
JAK2重排JAK2-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGGACTGCATCGAAGTACATACAGTCCAGTCTGSEQIDNO:21JAK2重排JAK2-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGTCCCACTGAGGTTGTACTCTTCATTCTCATTTSEQIDNO:22JAK2重排JAK2-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGAAACACCATTCGTTCTGAAGACTAGAAGGTTTGSEQIDNO:23JAK2重排JAK2-4GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGTTGACCGTAGTCTCCTACTTCTCTTCGTACGCCSEQIDNO:24JAK2重排JAK2-5GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCGAAAGCTTGCTCATCATACTTGCTGCTTCAAAGSEQIDNO:25PDGFRA重排PDGFRA-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCATCACAATCACCAACAGCACCAGGACTGSEQIDNO:26PDGFRA重排PDGFRA-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCAGGGCTGATTGATTCAATGACCCTCCAGCSEQIDNO:27PDGFRA重排PDGFRA-3GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCTTCAACCACCTTCCCAAACGCTCCAGSEQIDNO:28PDGFRB重排PDGFRB-1GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCGTTAGTCTCCAGCTGGCTCTCCTCTTSEQIDNO:29PDGFRB重排PDGFRB-2GTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATCCA本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
1.一组用于检测基因突变、融合、缺失变异类型的特异性复合引物，其特征在于，所述的基因突变、融合、缺失的类型为BCR/ABL融合、FGFR1重排、JAK2基因V617F突变、JAK2重排、NUP98重排、PDGFRA重排、PDGFRB重排；所述的特异性复合引物的核苷酸序列如SEQ ID NO:10-SEQ ID NO:37所示。2.根据权利要求1所述的用于检测基因突变、融合、缺失变异类型的特异性复合引物，其特征在于，所述的特异性复合引物还包括通用引物1，通用引物1的序列为SEQ ID NO:38。3.一种联合检测慢性粒细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中包含权利要求1所述的用于检测基因突变、融合、缺失变异类型的特异性复合引物。4.根据权利要求3所述的联合检测慢性粒细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：一种用于DNA文库构建的专用接头，所述的专用接头为接头引物1分别和8条不同的i5端引物构成的8个二聚体；所述的接头引物1的序列为SEQ ID NO:1；所述的8条不同的i5端引物的序列为SEQ ID NO:2-SEQ ID NO:9。5.根据权利要求4所述的联合检测慢性粒细胞白血病的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒中还包括：一组用于文库扩增的复合引物，所述的文库扩增复合引物具有不同的i7端，所述的引物的序列为SEQ ID NO:39-SEQ ...
【专利技术属性】
技术研发人员：孙石磊，姬云，
申请(专利权)人：苏州科贝生物技术有限公司，
类型：发明
国别省市：
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