安定ELISA检测试剂盒制造技术

本实用新型专利技术涉及一种检测组织、饲料、尿液中安定残留量的酶联免疫试剂盒。该试剂盒组成包括：96孔酶标板、酶标二抗、安定抗体工作液、7个浓度的标准品溶液、底物显色液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液、盖板膜、自封袋、说明书和质检报告。采用间接竞争ELISA方法，在酶标板微孔条上预包被偶联抗原，样本中含有的安定药物将和微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗安定药物的抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光值与其所含安定药物的残留量成负相关，与标准曲线比较，再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中残留物安定药物的残留量。与仪器分析技术相比具有使用方便、高灵敏度等特点，可在组织、饲料、尿液中安定药物的残留量检测中发挥重要作用。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本技术涉及检测安定残留量的试剂盒，特别是检测组织、 饲料、尿液中安定药物残留量的酶联免疫检测(ELISA)试剂盒，ELISA(Enzyme Linked Immunosorbnent Assay)是酶联免疫吸附剂测定的简称，它是继免疫荧光和放射免疫技术之后发展起来的一种酶免技术。( 二)
技术介绍
安定(Diaz印am)是一种镇静药，在畜禽中应用日益广泛，可以增加动物体重并可保证畜禽在长途运输中不会产生应激反应。但动物大量摄取安定会导致药物残留于食品而被人体吸收，大剂量可产生中枢神经抑制。长期服用可产生依赖性或成瘾， 突然停药可产生停药反应，表现为抑郁、精神激动、失眠等。我国和欧盟等国都禁止在畜牧业中应用。因此，检测安定药物在动物性食品中的残留量非常重要。目前，常用于安定残留检测的方法主要有高效液相色谱分析法(HPLC)，该方法的前处理过程繁琐、检测费用较高，不宜用于大量样本筛查，推广使用受到限制。(三)
技术实现思路
本技术所要解决的问题是提供一种小巧轻便的安定药物残留量检测试剂盒，其操作简便，检测快速、准确、灵敏度高，成本低，稳定性好，需要的技术含量不高，可进行一次连续多个样品中安定药物残留量的测定，减少了检测样本所需要的时间。本技术的技术方案是一种安定检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块96孔的酶标板、一张盖板膜、14瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于酶标板是采用96孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被安定偶联抗原制成的检测板，14瓶试剂分别为7瓶标准品溶液、酶标二抗、安定抗体工作液、 底物显色液A液、底物显色液B液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液，下凹瓶位共15个。盒体是硬纸盒；96孔的聚苯乙烯酶标板，放于真空铝箔袋内；盖板膜是塑料硬膜； 标准品溶液用白色帽的棕色玻璃瓶，酶标二抗用红色帽的白色PE塑料瓶，抗体工作液用绿色帽的白色PE塑料瓶，底物显色液A液用白色帽的白色PE塑料瓶，底物显色液B液用红色帽的黑色PE塑料瓶，终止液用黄色帽的白色PE塑料瓶，浓缩洗涤液用透明帽的半透明PE 塑料瓶，浓缩复溶液用蓝色帽的半透明PE塑料瓶，下凹瓶位由塑料泡沫制成。酶标板是由外框支撑架及放置其上的可拆的12条酶标反应微孔条组成，每个可拆装酶标反应微孔条有8个反应孔，每个反应孔预包被安定药物偶联抗原；盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；标准品溶液7瓶，Iml/瓶；酶标二抗1瓶，12ml ；安定抗体工作液1 瓶，7ml ；底物显色液A液1瓶，7ml ；底物显色液B液1瓶，7ml ；终止液1瓶，7ml ；浓缩洗涤液1瓶，40ml ；浓缩复溶液1瓶，50ml。将14瓶试剂用不同大小、不同颜色的塑料瓶和玻璃瓶盛装并固定在下凹瓶位中与酶标板、盖板膜、自封袋、说明书、质控报告一同封装在硬纸盒内，便于携带和运输。每一个试剂盒中的试剂足够进行96次测定(包括标准分析孔)，既可进行一次连续多个样品的检测，也可以将板孔拆开多次检测。将剩下的放回铝箔袋中用自封袋密封，这样可以保证试剂盒检测结果的准确性。检测时，样本中的残留物安定将和酶标板微孔条上预包被的安定偶联抗原竞争抗安定抗体，加入酶标二抗后，用TMB底物显色，样本吸光度值与样本中所含3安定药物的残留量成负相关，与标准曲线比较再乘以其对应的稀释倍数，即可得出样品中安定药物的残留量，其操作简便易行。经实验表明本试剂盒具有很高的灵敏度动物组织样本的最低检测限为Iyg/ kg、饲料样本的最低检测限为1(^8/1^;尿液样本的最低检测限为148/1;组织样本的回收率为75% 士 10%;饲料样本的回收率为75% 士 10%;尿液样本的回收率为80% 士 10%; 相对于其他安定药物检测方法，本试剂盒所需仪器较少，只需要酶标仪、氮气吹干装置、涡旋仪、离心机、振荡机和微量加样器等，同类实验室一般均有配备，所需成本较低。本技术的有益效果是能快速、简便、灵敏、准确地用于安定药物残留量的检测。附图说明图1为本技术酶联板的侧面纵剖面图(长为8. 55cm)；图2为本技术酶联板的侧面横剖面图(长为12. 8cm)；图3为本技术酶联板的俯视图；图4为本技术盖板膜平面图；图fe为本技术试剂瓶纵剖面平面图；图恥为本技术试剂瓶纵剖面平面图；图5c为本技术试剂瓶纵剖面平面图；图5d为本技术试剂瓶纵剖面平面图；图6为本技术固定泡沫模具的俯视图；图7为本技术盒体与固定泡沫模具的侧视图。参见附图酶标反应微孔条(2)预包被安定偶联抗原(3)固定于酶标板的外框支撑架(1)上，酶标反应微孔条(2)可随要求拆卸；盖板膜(4)用于酶标板置水浴或恒温箱内反应时封盖酶标反应微孔条O)，盖板膜大小与酶标板横切面大小一致；透明帽的半透明塑料试剂瓶( 用于封装40ml浓缩洗涤液；蓝色帽的半透明塑料试剂瓶( 用于封装50ml 浓缩复溶液；白色帽(6)的白色塑料试剂瓶(7)用于封装7ml显色液A液，红色帽(6)的黑色塑料试剂瓶(7)用于封装7ml显色液B液，黄色帽(6)的白色塑料试剂瓶(7)用于封装 7ml终止液，红色帽的白色塑料试剂瓶(8)用于封装12ml酶标二抗，绿色帽的白色塑料试剂瓶(8)用于封装7ml安定抗体工作液，白色帽的棕色玻璃试剂瓶(9)用于封装Iml/瓶的标准品溶液；泡沫塑料模具(10)有15个瓶位，放置位置依次为40ml浓缩洗涤液瓶位(18)， 50ml浓缩复溶液(11)，7ml显色液A液瓶位(14)，7ml显色液B液瓶位(1 ，7ml终止液瓶位(12)，7ml安定抗体工作液瓶位(16)，12ml酶标二抗瓶位(15)，7种Iml/瓶各种浓度的标准品溶液瓶位(17)，盒体为(19)是硬纸盒。具体实施方式一、样本的前处理1.配液配液1 :0. IM氢氧化钠溶液称取2. Og氢氧化钠，加去离子水溶解定溶至500ml。配液2:复溶工作液用去离子水将2X浓缩复溶液按1 1体积比进行稀释(1份2X浓缩复溶液+1 份去离子水)用于提取样本的复溶，复溶工作液在4°C环境可保存一个月。配液3 洗涤工作液用去离子水将20X浓缩洗涤液按1 19体积比进行稀释(1份20X浓缩洗涤液 +19份去离子水)用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4°C环境可保存一个月。2. (a)动物组织(肌肉、肝脏等)样本处理步骤取适量样本用勻浆机4000r/min以上勻浆Imin ；称取2. 0 士0. 05g勻浆物至50ml 聚苯乙烯离心管中，加入8ml0. IM氢氧化钠溶液，用振荡器剧烈振荡5min ；3000g以上，15°C 离心IOmin ；移取Iml上清液加入IOml正己烷，用振荡器振荡5min，3000g以上，15°C离心 5min ；取5ml上层正己烷相在50°C氮气流下完全干燥；用Iml稀释后的复溶液溶解残留物； 取50 μ 1用于分析。(b)尿液样本处理步骤取Iml清亮尿样于50ml离心管中加入細1 0. IM氢氧化钠溶液，振荡2 5min ；取 Iml混合液到另一离心管中加入IOml正己烷，振荡5min，3000g以上速度，15°C离心5min ； 取5ml上层正己烷相在50°C氮气流下完全干燥；取Iml稀释后的复溶液溶解残留物；取 50本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种安定ＥＬＩＳＡ检测试剂盒，包括盒体和盒内的一块９６孔的酶标板、一张盖板膜、１４瓶试剂和放试剂的下凹瓶位、一个自封袋、一份说明书和一份质检报告，其特征在于：酶标板是采用９６孔试剂板作为固相载体，在试剂盒微孔条上预包被安定偶联抗原制成的检测板，１４瓶试剂分别为７瓶标准品溶液、酶标二抗、安定抗体工作液、底物显色液Ａ液、底物显色液Ｂ液、终止液、浓缩洗涤液、浓缩复溶液，下凹瓶位共１５个。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：何方洋，赵正苗，罗贵昆，冯月君，何丽霞，段盈盈，王建霞，
申请(专利权)人：北京勤邦生物技术有限公司，
类型：实用新型
国别省市：11