两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制制造技术

本发明专利技术公开的两个MSTN-shRNA慢病毒载体的构建和对MSTN基因的抑制，其中1)根据GeneBank中绵羊MSTN基因从启始密码(ATG)至终止密码(TGA)共1128bp编码区序列；2)人工设计合成并筛选到两条对绵羊MSTN基因有显著抑制作用的shRNA分子，且一条shRNA分子由上下游两条DNA互补单链组成；3)将合成的两条互补单链经退火形成双链的shRNA分子后，分别连接到pLL3.7慢病毒干扰载体上，构建了2个慢病毒RNA干扰质粒(MSTN-shRNA)；4)通过荧光定量PCR及Western?b1ot从mRNA及蛋白水平分析了MSTN的表达，在mRNA水平上抑制效率可达58％以上，而对MSTN蛋白的抑制可达80％以上；5)完成对MSTN-shRNA慢病毒的制备、浓缩及测定。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
１．两个ＭＳＴＮ－ｓｈＲＮＡ慢病毒载体的构建和对ＭＳＴＮ基因的抑制，其特征在于：１）根据ＧｅｎｅＢａｎｋ中绵羊ＭＳＴＮ基因从启始密码（ＡＴＧ）至终止密码（ＴＧＡ）共１１２８ｂｐ编码区序列；２）人工设计合成并筛选到两条对绵羊ＭＳＴＮ基因有显著抑制作用的ｓｈＲＮＡ分子，该分子是由核苷酸组成的特定序列，且一条ｓｈＲＮＡ分子由上下游两条ＤＮＡ互补单链组成，其中一的上游序列为５‘－ＡＴＣＴＣＴＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＡＴＡＧＣＡＴＣＴＴＴＧＣＡ－３’；下游序列为５‘－ＴＣＧＡＧＡＡＡＡＡＡＧＣＡＡＡＧＡＴＧＣＴＡＴＡＡＧＡＣＡＴＣＴＣＴＴＧＡＡＴＧＴＣＴＴＡＴＡＧＣＡＴＣＴＴＴＧＣ　Ａ－３‘，其中二的上游序...

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：刘明军，刘晨曦，李文蓉，张雪梅，唐森，
申请(专利权)人：新疆维吾尔自治区畜牧科学院中国澳大利亚绵羊育种研究中心，
类型：发明
国别省市：65