ＬＩＮＧＯ－１和ＴｒｋＢ拮抗剂的用途制造技术

本发明专利技术涉及使用ＬＩＮＧＯ－１拮抗剂和ＴｒｋＢ激动剂促进神经元存活和再生的方法。此外，本发明专利技术涉及使用ＬＩＮＧＯ－１拮抗剂治疗压力诱导的视神经病变的方法。本发明专利技术还通常涉及使用ＬＩＮＧＯ－１拮抗剂增加ＴｒｋＢ活性并抑制ＪＮＫ通路信号转导的方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及神经学、神经生物学、分子生物学和药理学。更特别地，本专利技术涉及使用LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂促进神经元存活和再生的方法。此外，本专利技术涉及使用LINGO-1拮抗剂治疗压力诱导的视神经病变的方法。本专利技术还通常涉及使用LINGO-1拮抗剂增加TrkB活性并抑制JNK通路信号转导的方法。 
技术介绍
视神经病变是包括各种临床表现和病因的一组眼部疾病。青光眼是示例性的视神经病变，其包括在视神经上的病理变化，视神经乳头盘(optic disk)可见以及相应的视野减小，如果不治疗会导致失明。青光眼与眼内压增加有关，但也涉及其他因素。 目前对青光眼的治疗旨在减少眼内压。医学治疗包括减少眼内液的产生或增加眼内液的流出的局部眼用滴剂或口服药物。然而对于青光眼的这些药物治疗有时伴随显著的副作用，例如头痛、视觉模糊、变应性反应、由心肺并发症导致的死亡以及与其他药物的可能的相互作用。也使用手术治疗，但是它们也具有许多缺点以及并不大的成功率。 因此，有对另外的用于压力引起的视神经病变(包括青光眼和由视网膜神经节细胞(RGC)的变性表征的其他病况)的治疗方法的需求。 专利技术简述 本专利技术是以神经元中LINGO-1与TrkB相互作用并抑制TrkB的发现为基础的。眼内高压后，TrkB配体脑源性神经营养因子(BDNF)被上调。BDNF促进TrkB磷酸化和细胞存活信号转导通路的活化。然而在眼内高压后，LINGO-1也被上调。本文所描述的实验使用LINGO-1拮抗剂以显示LINGO-1抑制TrkB的磷酸化和活化，由此抑制细胞存活信号转导通路。本文描述的实验还显示LINGO-1促进与细胞死亡有关的JNK信号转导通路的活性。因此LINGO-1的拮抗剂和TrkB的激动剂促进细胞存活。 以这些发现为基础，本专利技术通常涉及通过施用LINGO-1拮抗剂抑制LINGO-1-TrkB相互作用的方法。本专利技术还涉及通过施用LINGO-1拮抗剂促进TrkB磷酸化和TrkB信号转导的方法以及抑制JNK磷酸化和JNK信号转导的方法。而且，本专利技术涉及通过施用LINGO-1拮抗剂促进视网膜神经节细胞存活或者治疗压力诱导的视神经病变的方法。此外，本专利技术涉及通过施用LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂促进神经元细胞存活的方法。在某些实施方式中，本专利技术涉及通过施用LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂治疗与神经元细胞死亡相关的病况的方法。 在某些实施方式中，本专利技术包括抑制细胞中LINGO-1和TrkB相互作用的方法，其包括将共表达LINGO-1和TrkB的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。在其他的实施方式中，本专利技术包括促进细胞中TrkB磷酸化或TrkB通路信号转导的方法，其包括将共表达 LINGO-1和TrkB的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。在某些其他的实施方式中，本专利技术包括促进TrkB磷酸化的方法，其包括将CNS神经元与LINGO-1拮抗剂接触。 在某些实施方式中，本专利技术包括促进细胞中JNK磷酸化的方法，其包括将表达-->LINGO-1和JNK的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。在其他实施方式中，本专利技术提供抑制JNK磷酸化的方法，其包括将CNS神经元与LINGO-1拮抗剂接触。 在某些实施方式中，本专利技术包括促进处于死亡危险的神经元存活的方法，其包括将神经元与有效量的INGO-1拮抗剂和TrkB激动剂接触。 在其他的实施方式中，本专利技术包括促进显示压力诱导的视神经病变的体征或症状的哺乳动物中视网膜神经节细胞存活的方法，其包括向需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的LINGO-1拮抗剂和载体。本专利技术还包括治疗与神经元细胞死亡相关的疾病或病症的方法，其包括向需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂。在一些实施方式中，哺乳动物已经被确诊为青光眼。 在上文的方法的不同实施方式中，TrkB激动剂可以是增加TrkB促进神经元存活的能力的任何分子。在某些实施方式中，TrkB激动剂选自由TrkB激动剂化合物、TrkB激动剂多肽、TrkB激动剂抗体或其片段、TrkB激动剂多核苷酸、TrkB适体或者两种或更多种TrkB激动剂的组合所组成的组。 在某些实施方式中，TrkB激动剂是TrkB激动剂化合物。本专利技术的某些TrkB激动剂化合物包括但不限于L-783,281腺苷和CGS21680。此外，TrkB激动剂化合物可以是模拟神经营养蛋白的决定 性区域的小分子。例如，小分子可决定性地为BDNFβ-转角环(β-turn loop)的模拟物。可根据本专利技术使用的小分子模拟物的特定的实例公开于美国公开申请第2007/0060526A1号，其通过引用全文引入本文。 在某些实施方式中，TrkB激动剂是TrkB激动剂多肽。本专利技术的某些TrkB激动剂多肽包括但不限于BDNF、NT-3和NT-4/5。在某些实施方式中，TrkB激动剂多肽包含SEQ ID NO：4。在一些实施方式中，TrkB激动剂是包含非TrkB-激动剂异源多肽或聚合物的融合多肽或轭合物。在一些实施方式中，非TrkB-激动剂多肽或聚合物选自由聚乙二醇、1-酰基-甘油衍生物和抗体Ig肽、血清白蛋白肽、靶向肽、报告肽和促进纯化的肽所组成的组。在一些实施方式中，抗体Ig肽是铰链和Fc肽。 在可选择的实施方式中，TrkB激动剂是与TrkB多肽结合的抗体或其片段。本专利技术的方法中使用的TrkB激动剂抗体包括但不限于6E2、7F5、11E1、16E11、17D11、19E12、29D7。 在其他的实施方式中，TrkB激动剂是TrkB激动剂多核苷酸，例如编码肽或蛋白的多核苷酸，或适体。 在另外的实施方式中，TrkB激动剂是TrkB适体。TrkB适体是结合TrkB并促进TrkB增加神经元存活的能力的小的多核苷酸。 在上文方法的不同实施方式中，LINGO-1拮抗剂可以是干扰LINGO-1负调节神经元存活和/或与TrkB结合和/或抑制或减少TrkB磷酸化的能力的任何分子。在某些实施方式中，LINGO-1拮抗剂选自由LINGO-1拮抗剂多肽、LINGO-1抗体或其片段、LINGO-1拮抗剂多核苷酸(例如RNA干扰)、LINGO-1适体或者两种或更多种LINGO-1拮抗剂的组合所组成的组。 在某些实施方式中，LINGO-1拮抗剂多肽是可溶的LINGO-1多肽。本专利技术的某些可溶的LINGO-1多肽包括但不限于包含或缺少下列结构域中的一个或多个的可溶的LINGO-1多肽：(i)LINGO-1富含亮氨酸的重复序列(LRR)结构域，(ii)LRR结构域C-端的LINGO-1碱性区，和(iii)LINGO-1免疫球蛋白(Ig)结构域。在一些实施方式中，可溶的LINGO-1多-->肽缺少LINGO-1Ig结构域、LINGO-1LRR结构域、跨膜结构域和胞质结构域中的一个或多个。本专利技术的另外的LINGO-1可溶多肽包括缺乏跨膜结构域和胞质结构域的多肽。在一些实施方式中，可溶的LINGO-1多肽包含LINGO-1LRR结构域但缺乏LINGO-1Ig结构域、LINGO-1碱性区、跨膜结构域和胞质结构域。在一些实施方式中，可溶的LINGO-1多肽包含SEQ ID NO：2的34-532或SEQ ID NO：2的36-532氨基酸残基。 在一些本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种抑制细胞中ＬＩＮＧＯ－１和ＴｒｋＢ相互作用的方法，包括将共表达ＬＩＮＧＯ－１和ＴｒｋＢ的细胞与ＬＩＮＧＯ－１拮抗剂接触。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】US 2007-10-11 60/979,3381.一种抑制细胞中LINGO-1和TrkB相互作用的方法，包括将共表达LINGO-1和TrkB的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。2.一种促进细胞中TrkB磷酸化的方法，包括将共表达LINGO-1和TrkB的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。3.一种促进TrkB磷酸化的方法，包括将CNS神经元与LINGO-1拮抗剂接触。4.一种抑制细胞中JNK磷酸化的方法，包括将共表达LINGO-1和JNK的细胞与LINGO-1拮抗剂接触。5.一种抑制JNK磷酸化的方法，包括将CNS神经元与LINGO-1拮抗剂接触。6.一种促进处于死亡危险的神经元存活的方法，包括将所述神经元与有效量的LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂接触。7.一种促进显示压力诱导的视神经病变的体征或症状的哺乳动物中视网膜神经节细胞存活的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施用治疗有效量的LINGO-1拮抗剂和载体。8.一种促进显示压力诱导的视神经病变的体征或症状的哺乳动物中视网膜神经节细胞存活的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施用治疗有效量的LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂的组合。9.一种治疗与神经元细胞死亡相关的疾病或病症的方法，包括向需要这种治疗的哺乳动物施用有效量的LINGO-1拮抗剂和TrkB激动剂。10.如权利要求1-5中任一项所述的方法，还包括将所述细胞与TrkB激动剂接触。11.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述LINGO-1拮抗剂包含可溶的LINGO-1多肽。12.如权利要求11所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含选自由下列组成的组的LINGO-1区：(i)LINGO Ig结构域或者其片段、变体或衍生物，(ii)LINGO LRR结构域或者其片段、变体或衍生物，(iii)LINGO胞质结构域或者其片段、变体或衍生物，(iv)LINGO跨膜结构域或者其片段、变体或衍生物，(v)LRR结构域C-端的LINGO碱性区或者其片段、变体或衍生物，和(vi)(i)至(v)的所述LINGO-1结构域或者其片段、变体或衍生物中的至少两种的组合。13.如权利要求11所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽缺少选自由下列所组成的组的LINGO-1区：(i)LINGO Ig结构域，(ii)LINGO LRR结构域，(iii)LINGO胞质结构域，(iv)LINGO跨膜结构域，(v)LRR结构域C-端的LINGO碱性区，和(vi)(i)至(v)的所述LINGO-1结构域中的至少两种的组合。14.如权利要求13所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽缺少LINGO-1跨膜结构域和LINGO-1胞质结构域。15.如权利要求11至14中任一项所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含(i)LINGO-1LRR结构域或者其片段、变体或衍生物，(ii)LRR结构域C-端的LINGO碱性区或者其片段、变体或衍生物，和(iii)LINGO-1免疫球蛋白(Ig)结构域或者其片段、变体或衍生物。16.如权利要求13或权利要求14所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含所述LINGO-1LRR结构域的至少一部分，但缺少LINGO-1 Ig结构域、LINGO-1碱性区、LINGO-1跨膜结构域和LINGO-1胞质结构域。17.如权利要求11至15中任一项所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含选自由下列组成的组的多肽片段：(i)SEQ ID NO：2的氨基酸1至33；(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至35；(iii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至64；(iv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至64；(v)SEQ ID NO：2的氨基酸66至89；(vi)SEQ ID NO：2的氨基酸90至113；(vii)SEQ ID NO：2的氨基酸114至137；(viii)SEQ ID NO：2的氨基酸138至161；(ix)SEQ ID NO：2的氨基酸162至185；(x)SEQ ID NO：2的氨基酸186至209；(xi)SEQ ID NO：2的氨基酸210至233；(xii)SEQ ID NO：2的氨基酸234至257；(xiii)SEQ ID NO：2的氨基酸258至281；(xiv)SEQ ID NO：2的氨基酸282至305；(xv)SEQ ID NO：2的氨基酸306至329；(xvi)SEQ ID NO：2的氨基酸330至353；(xvii)SEQ ID NO：2的氨基酸363至416；(xviii)SEQ ID NO：2的氨基酸417至424；(xix)SEQ ID NO：2的氨基酸419至493；(xx)SEQ ID NO：2的氨基酸494至551；(xxi)SEQ ID NO：2的氨基酸1至64；(xxii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至89；(xxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至113；(xxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸1至137；(xxv)SEQ ID NO：2的氨基酸1至161；(xxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸1至185；(xxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至209；(xxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至233；(xxix)SEQ ID NO：2的氨基酸1至257；(xxxx)SEQ ID NO：2的氨基酸1至281；(xxxxi)SEQ ID NO：2的氨基酸1至305；(xxxxii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至329；(xxxxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至353；(xxxxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸1至416；(xxxxv)SEQ ID NO：2的氨基酸1至424；(xxxxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸1至493；(xxxxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至551；(xxxxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸1至531；(iL)SEQ ID NO：2的氨基酸1至532；(Li)SEQ ID NO：2的氨基酸34至89；(Lii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至113；(Liii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至137；(Liv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至161；(Lv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至185；(Lvi)SEQ ID NO：2的氨基酸34至209；(Lvii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至233；(Lviii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至257；(Lix)SEQ ID NO：2的氨基酸34至281；(Lx)SEQ ID NO：2的氨基酸34至305；(Lxi)SEQ ID NO：2的氨基酸34至329；(Lxii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至353；(Lxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至416；(Lxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至424；(Lxv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至493；(Lxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸34至551；(Lxxi)SEQ ID NO：2的氨基酸34至530；(Lxxii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至531；(Lxxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至532；(Lxxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至533；(Lxxv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至534；(Lxxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸34至535；(Lxxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至536；(Lxxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至537；(Lxxix)SEQ ID NO：2的氨基酸34至538；(Lxxx)SEQ ID NO：2的氨基酸34至539；(Lxxxi)SEQ ID NO：2的氨基酸30至532；(Lxxxii)SEQ ID NO：2的氨基酸31至532；(Lxxxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸32至532；(Lxxxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸33至532；(Lxxxv)SEQ ID NO：2的氨基酸34至532；(Lxxxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸35至532；(Lxxxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至532；(Lxxxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸30至531；(Lxxxix)SEQ ID NO：2的氨基酸31至531；(Lxxxx)SEQ ID NO：2的氨基酸32至531；(Lxxxxi)SEQ ID NO：2的氨基酸33至531；(Lxxxxii)SEQ ID NO：2的氨基酸34至531；(Lxxxxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸35至531；(Lxxxxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至531；(Lxxxxv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至89；(Lxxxxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸36至113；(Lxxxxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至137；(Lxxxxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至161；(Lxxxxvc)SEQ ID NO：2的氨基酸36至185；(c)SEQ ID NO：2的氨基酸36至209；(ci)SEQ ID NO：2的氨基酸36至233；(cii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至257；(ciii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至281；(civ)SEQ ID NO：2的氨基酸36至305；(cv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至329；(cvi)SEQ ID NO：2的氨基酸36至353；(cvii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至416；(cviii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至424；(cix)SEQ ID NO：2的氨基酸36至493；(cx)SEQ ID NO：2的氨基酸36至551；(cxi)SEQ ID NO：2的氨基酸36至530；(cxii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至531；(cxiii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至532；(cxiv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至533；(cxv)SEQ ID NO：2的氨基酸36至534；(cxvi)SEQ ID NO：2的氨基酸36至535；(cxvii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至536；(cxviii)SEQ ID NO：2的氨基酸36至537；(cxix)SEQ ID NO：2的氨基酸36至538；(cxx)SEQ ID NO：2的氨基酸36至539；(cxxi)任何所述多肽片段的变体或衍生物，以及(cxxii)任何所述多肽片段或者其变体或衍生物中的至少两种的组合。18.如权利要求17所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸34-532或SEQ ID NO：2的氨基酸36-532。19.如权利要求11-18中任一项所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含LINGO-1 Ig结构域或者其片段、变体或衍生物。20.如权利要求19所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽包含SEQ ID NO：2的氨基酸417-493。21.如权利要求11至20中任一项所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽还包含非LINGO-1部分。22.如权利要求21所述的方法，其中所述非LINGO-1部分是融合至所述可溶的LINGO-1多肽的异源多肽。23.如权利要求22所述的方法，其中异源多肽选自由免疫球蛋白片段、血清白蛋白、靶向蛋白、报告蛋白和促进纯化的蛋白组成的组。24.如权利要求23所述的方法，其中所述异源多肽是免疫球蛋白片段。25.如权利要求24所述的方法，其中所述免疫球蛋白片段含有铰链和Fc区。26.如权利要求21-25中任一项所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽被轭合至聚合物。27.如权利要求26所述的方法，其中所述聚合物选自由聚亚烷基二醇、糖聚合物和多肽所组成的组。28.如权利要求27所述的方法，其中所述聚合物是聚亚烷基二醇。29.如权利要求28所述的方法，其中所述聚亚烷基二醇是聚乙二醇(PEG)。30.如权利要求26所述的方法，其中所述可溶的LINGO-1多肽被轭合至1、2、3或4个聚合物。31.如权利要求30所述的方法，其中所述聚合物的总分子量从5,000Da至100,000Da。32.如权利要求1-10中任一项所述的方法，其中所述LINGO-1拮抗剂包含LINGO-1抗体或其片段。33.如权利要求32所述的方法，其中所述LINGO-1抗体或其片段与主要由选自由下列所组成的组的多肽片段组成的表位特异性结合：(i)SEQ ID NO：2的氨基酸66至89；(ii)SEQ ID NO：2的氨基酸66至113；(ii...

【专利技术属性】
技术研发人员：米莎，
申请(专利权)人：比奥根艾迪克MA公司，
类型：发明
国别省市：US