减少炎症介质释放的方法和可用于该方法的肽技术

本发明专利技术包括抑制细胞分泌过程的方法。更具体地，本发明专利技术涉及通过抑制 与炎症介质自炎性细胞的颗粒中释放有关的机制而抑制或降低炎症介质自炎 性细胞的释放。就此而言，本发明专利技术公开了细胞内信号机制，这阐明了用于对 涉及炎症介质自炎性细胞的囊泡中分泌的疾病进行药物干预的多个新的细胞 内靶。本发明专利技术所公开的MANS肽的肽片段及其变体可用于此类方法。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及肽或肽组合物和使用它们来减少(或抑制或降低)炎症过程中 炎症介质自炎性细胞的刺激型释放的方法。本专利技术还涉及这些肽或肽组合物 用于调变调节炎症介质自炎性细胞分泌的细胞内信号机制的用途。
技术介绍
炎症性白细胞合成多种炎症介质，这些炎症介质在细胞内是分离的并储 存在细胞质膜结合型的颗粒中。此类介质的实例包括，但不限于，中性粒细 胞的髓过氧化物酶(MPO)(例如参见Borregaard N， Cowland JB. Granules of the human neutrophilic polymorphonuclear leukocyte. 1997 ; 89:3503-3521)、嗜酸性粒细胞的嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)和主要碱性蛋白 (major basic protein, MBP)(例如参见Gleich G J. Mechanisms of eosinophil-associated inflammation. /j〃ergy C7/ /mmwwo/ 2000; 105:651-663)、单丰亥细胞 /巨噬细胞的溶菌酶(例如参见Hoff T, Spencker T, Emmendoerffer A.， Goppelt-Struebe M. Effects of glucocorticoids on the TPA画induced monocytic differentiation. /丄eA:oc 5z'o/ 1992; 52:173-182;禾卩Balboa M A, Saez Y， Balsinde J. Calcium-independent phospholipase A2 is required for lysozyme secretion in U937 promonocytes. J/mwwo/ 2003; 170:5276-5280)、和天然杀 伤(NK)细胞和细胞毒性淋巴细胞的粒酶(例如参见Bochan MR, Goebel WS, Brahmi Z. Stably transfected antisense granzyme B and perforin constructs inhibit human granule-mediated lytic ability. CW//mmwwo/ 1995;164:234-239; Gong JH Maki G, Klingemann HG. Characterization of a human cell line (NK-92) with phenotypical and functional characteristics of activated natural killer cells.7丄ewfem/a 1994; 8:652-658; Maki G, Klingemann HG， Martinson JA， Tam YK. Factors regulating the cytotoxic activity of the human natural killer cell line, NK-92. J ifewflto^er &ew Ce// i es 2001; 10:369-383;和Takayama H, Trenn G， Sitkovsky MV. A novel cytotoxic T lymphocyte activation assay. 7mmwo/ 1987; 104:183-190)。此类介质在损失部位释放并促进例如肺部和其 他部位的炎症和组织修复。已知白细胞通过胞吐机制释放这些颗粒(例如参 见Burgoyne RD， Morgan A. Secretory granule exocytosis.尸/z戸'o/ i ev 2003; 83:581-632 ;禾口 Logan MR, Odemuyiwa SO, Moqbel R. Understanding exocytosis in immune and inflammatory cells: the molecular basis of mediator secretion. J力/e/^y C/z' /mm柳o/ 2003; 111: 923-932)，但参与这一胞吐过程 的调节分子和具体途径尚未充分揭示。一些外源性刺激可促进白细胞脱颗粒，这涉及通过蛋白激酶C活化并随 后石粦酸化的事件的途径(例如参见Burgoyne RD， Morgan A. Secretory granule exocytosis.尸/z戸'o/ i ev 2003; 83:581-632; Logan MR, Odemuyiwa SO， Moqbel R. Understanding exocytosis in immune and inflammatory cells: the molecular basis of mediator secretion. /W/ergy C7z'w T/wtwo/ 2003; 111: 923-932; Smolen JE， Sandborg RR. Ca2+-induced secretion by electropermeabilized human neutrophils: the roles of Ca2+， nucleotides and protein kinase C. 5/oc/n,w 爿a 1990; 1052:133-142; Niessen HW， Verhoeven AJ. Role of protein phosphorylation in the degranulation of electropermeabilized human neutrophils, ,op/yAs. ^cta 1994; 1223:267-273;禾口 Naucler C， Grinstein S, Sundler R., Tapper H. Signaling to localized degranulation in neutrophils adherent to immune complexes. JXewA:oc 2002; 71:701-710)。MARCKS蛋白(其中MARCKS在这里指的是豆蔻酰化富丙氨酸激酶C 底物(Myristoylated Alanine-Rich C Kinase Substrate))是蛋白激酶C (PKC)的遍 在性磷酸化靶，并高度表达于白细胞(例如参见Aderem AA， Albert KA， Keum MM， Wang JK， Greengard P, Cohn ZA. Stimulus-dependent myristoylation of a major substrate for protein kinase C. iVafwre 1988; 332:362-364; Thelen M， Rosen A, Nairn AC, Aderem A. Regulation by phosphorylation of reversible asso本文档来自技高网...

【技术保护点】
抑制至少一种炎症介质自对象的组织和／或体液中的至少一种炎性细胞内的颗粒中释放的方法，所述方法包括：　给所述组织和／或体液施用治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含至少一种肽，所述肽具有选自如下一组的氨基酸序列：　（ａ）具有参照序 列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）的４至２３个连续氨基酸的氨基酸序列；　（ｂ）具有序列ＧＡＱＦＳＫＴＡＡＫＧＥＡＡＡＥＲＰＧＥＡＡＶＡ（ＳＥＱ　ＩＤ　ＮＯ：１）的氨基酸序列；和　（ｃ）与 （ａ）中所定义的序列基本上相同的氨基酸序列，　其中所述肽的Ｃ－端氨基酸任选地独立地被化学修饰，且所述肽的Ｎ－端氨基酸独立地通过使用羧酸进行酰化而被化学修饰或者不被化学修饰，所述羧酸选自如下一组：Ｃ２至Ｃ１３饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、 Ｃ１４饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、Ｃ１５至Ｃ２４饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、和三氟乙酸，条件是当所述肽的氨基酸序列以所述参照序列的序列ＧＡＱＦ为起始时，所述肽通过仅使用选自如下一组的羧酸进行酰化而被酰化修饰或者不被化学修饰：Ｃ２至Ｃ１３饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、Ｃ１４不饱和的脂肪族羧酸、Ｃ１５至Ｃ２４饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、和三氟乙酸，其中所述肽，任选地与药用可接受的载体相组合，并以降低炎症介质释放的治疗有效量，使得所述炎症介质自至少一种炎性细胞中的释放与在缺乏所述至少一种肽的情况下所述炎症介质自至少一种相同类型的炎性细胞中的释放相比被降低。...

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】2006.7.26 US 60/833,2391、抑制至少一种炎症介质自对象的组织和/或体液中的至少一种炎性细胞内的颗粒中释放的方法，所述方法包括给所述组织和/或体液施用治疗有效量的药物组合物，所述组合物包含至少一种肽，所述肽具有选自如下一组的氨基酸序列(a)具有参照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQ ID NO1)的4至23个连续氨基酸的氨基酸序列；(b)具有序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA(SEQ ID NO1)的氨基酸序列；和(c)与(a)中所定义的序列基本上相同的氨基酸序列，其中所述肽的C-端氨基酸任选地独立地被化学修饰，且所述肽的N-端氨基酸独立地通过使用羧酸进行酰化而被化学修饰或者不被化学修饰，所述羧酸选自如下一组C2至C13饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、C14饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、C15至C24饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、和三氟乙酸，条件是当所述肽的氨基酸序列以所述参照序列的序列GAQF为起始时，所述肽通过仅使用选自如下一组的羧酸进行酰化而被酰化修饰或者不被化学修饰C2至C13饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、C14不饱和的脂肪族羧酸、C15至C24饱和的或不饱和的脂肪族羧酸、和三氟乙酸，其中所述肽，任选地与药用可接受的载体相组合，并以降低炎症介质释放的治疗有效量，使得所述炎症介质自至少一种炎性细胞中的释放与在缺乏所述至少一种肽的情况下所述炎症介质自至少一种相同类型的炎性细胞中的释放相比被降低。2、 权利要求l的方法，其中所述肽的N-端a氨基酸被乙酰化。3、 权利要求2的方法，其中所述肽由至少10个连续氨基酸残基组成。4、 权利要求3的方法，其中所述肽由乙酰基肽106 (SEQ IDNO:106)组成。5、 权利要求l的方法，其中所述肽由至少4个连续氨基酸残基组成。6、 权利要求l的方法，其中所述肽由至少6个连续氨基酸残基组成。7、 权利要求l的方法，其中所述肽的N-端(x氨基酸被豆蔻酰化。8、 权利要求1的方法，其中使用氨将所述肽的C-端a氨基酸酰胺化。9、 权利要求1的方法，其中所述肽包含(a)的氨基酸序列，其中(a)的氨基酸序列的N-端氨基酸选自参照序列GAQFSKTAAKGEAAAERPGEAAVA (SEQ ID NO:l)的第2至21位氨基酸。10、 权利要求9的方法，其中所述肽的N-端a氨基酸被豆蔻酰化或乙酰化。11、 权利要求9的方法，其中使用氨将所述肽的C-端a氨基酸酰胺化。12、 权利要求1的方法，其中所述降低炎症介质的释放包括阻断或抑制 使炎症介质从所述对象的所述炎性细胞中释放的机制。13、 权利要求1-12中任一项的方法，其中所述肽还包括药用可接受的载 体以形成药物组合物。14、 权利要求12的方法，其中所述炎性细胞是白细胞。15、 权利要求12的方法，其中所述炎性细胞是粒细胞。16、 权利要求12的方法，其中所述炎性细胞选自中性粒细胞、嗜碱性 粒细胞、嗜酸性粒细胞及其组合。17、 权利要求12的方法，其中所述炎性细胞是单核细胞或巨噬细胞。18、 权利要求12的方法，其中所述炎症介质选自髓过氧化物酶 (MPO)、嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)、主要碱性蛋白(MBP)、溶菌酶、 粒酶、组胺、蛋白聚糖、蛋白酶、趋化因子、细胞因子、花生四烯酸代谢 物、防卫素、杀菌性通透性增强蛋白(BPI)、弹性蛋白酶、组织蛋白酶G、 组织蛋白酶B、组织蛋白酶D、 p-D-葡糖醛酸糖苷酶、a-甘露糖苷酶、磷脂 酶A2、 4-硫酸软骨素、蛋白酶3、乳铁蛋白、胶原酶、补体激活物、补体受 体、N-甲酰甲硫氨酰-亮氨酰-苯丙氨酸(FMLP)受体、层粘连蛋白受体、细 胞色素1>558、单核细胞-趋化因子、组胺酶、维生素B12结合蛋白、明胶酶、 纤溶酶原激活物、(3-D-葡糖醛酸糖苷酶、及其组合。19、 权利要求12的方法，其中所述炎症介质选自髓过氧化物酶 (MPO)、嗜酸性粒细胞过氧化物酶(EPO)、主要碱性蛋白(MBP)、溶菌酶、 粒酶及其组合。20、 权利要求1的方法，其中所述降低炎症介质释放的有效量的所述肽 包含脱颗粒抑制量的肽，其使得自至少一种炎性细胞释放的炎症介质的量与 缺乏所述肽的情况下自至少一种炎性细胞释放的量相比降低大约1%至大约 99%。21、 权利要求1的方法，其中所述降低炎症介质释放的有效量的所述肽包含脱颗粒抑制量的肽，其使得自至少一种炎性细胞释放的炎症介质的量与缺乏所述肽的情况下自至少一种炎性细胞释放的量相比降低大约5-50%至大 约99%。22、 权利要求l的方法，其中所述对象患有呼吸道疾病。23、 权利要求22的方法，其中所述呼吸道疾病选自哮喘、慢性支气管 炎、COPD和囊性纤维化。24、 权利要求1的方法，其中所述对象是哺乳动物。25、 权利要求24的方法，其中所述哺乳动物选自人、犬科、马科和猫科。26、 权利...

【专利技术属性】
技术研发人员：I·帕里克，
申请(专利权)人：拜欧马克医药有限公司，
类型：发明
国别省市：US