形成脂质体的方法技术

制备一种试剂的组合物的方法，该方法包括以下步骤：（ｉ）形成空的脂质体；（ｉｉ）将来自步骤（ｉ）的脂质体与糖溶液和试剂进行混合；和（ｉｉｉ）干燥来自步骤（ｉｉ）的混合物。此类组合物通常包含低于１０％（ｗ／ｖ）的蔗糖。所述方法可以用于形成具有高包封率的小脂质体。它尤其适用于药物的生产。（*该技术在2019年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】本专利技术涉及形成脂质体的方法、由此获得的脂质体以及它们的用途，具体为在药物应用中的用途。众所周知，脂质体可以广泛用于包括药物和化妆品领域的各种领域，其中它们用作药物或适用于皮肤的其它制剂的载体。制备脂质体的各种方法已为人熟知。例如，它们可以通过脱水/再水化技术来制备，其中将类脂溶于有机溶剂如氯仿、二氯甲烷或醇如甲醇或乙醇。随后如使用旋转蒸发器干燥所述溶液，从而在蒸发器壁上形成类脂膜。将水或水溶液如缓冲液加至干膜而形成多层脂质体。采用各种方法从而形成生产小囊的第一步骤。随后的处理可以导致小囊或DRV的脱水/再水化(Kirby and Gregoriadis,Biotechnology(1984)2,979-984)。或者，随后通过声波破碎类脂悬浮体从而形成如单层脂质体(A.D.Bangham等，J.Mol.Biol.13,238(1965))。本领域广为报导的其它方法包括洗涤剂脱除(Y.Kagawa等，J.Biol.Chem.(1971246,5477)，反相蒸发(F.Szoka and D.Papahadjopoulos,Proc.Natl.Acad.Sci,USA(1978)75,4194)和醚注射(D.Deamer等，Biochim.Biophys.Acta,(1976)433,629)以及冻干法(参见如Ohsawa等，Chem.Pharm.Bull,(1984)32,2442-5 and Kirby andGregoriadis(1984)supra)和冻融法(D.D.Lasic“脂质体从物理性质到应用”，Elsevier,1993,p98)。不同的制备方法导致脂质体不同的尺寸和其它特性。脂质体可以用于包囊各种物质如生物活性物质如包括疫苗的药物以及非药物制剂如施用于皮肤的各种物质如人造鞣制剂和其它的美容助剂。包囊技术根据待包囊制剂的性质和生成脂质体的大小和特性变化。脂质体的大小对于它们的应用来说是重要的。在一些情况下，例如当包括微生物(如细菌)的待包囊的颗粒用于如疫苗时(如WO95/09619所述)，可能需要大的脂质体。然而在许多应用中优选小的脂质体。这是因为与大脂质体(尺寸大于200nm)相比，小脂质体通过网状内皮组织系统(RES)的除去较慢，并且脱除程度较小。RES的摄取量随小囊的尺寸增加而增大。另外大脂质体的肌内注射不能达到良好效果的局部淋巴结并且将疫苗和其它制剂传递至它们的位置(Gregoriadis G．作为药物载体的脂质体最新趋势和进展，Wiley Chichester 1988)。可以根据药物的用量、稳定性、生物分布模式和细胞摄取，通过改变脂质体的物理化学参数如相转变温度、大小、尺寸分布、表面电荷、用具有疏水基团的化合物进行的表面水合以及尺寸分布来优化各种药物的脂质体制剂。脂质体的大小是决定被RES清除部分的一个参数(Senior等，Biochem.,Biophys,Acta(1985)839,1-8；Nagayasu等，Biol.Pharm.Bull.(1995)18(7),1020-1023)。小脂质体可以通过使用高压均化器来制备(Talsma等.Drug Development and Industrial Pharmacy(1989)15(2)197-207,Vemuri S等、Drug Development and Industrial Pharmacy(1990)16(15)2243-2256)。但人们已经采用大量的脂质体来获得可接受的包封药物与类脂质量比。另一种方法(Gregoriadis等，Int.J.Pharm.65(1990)235-242)，在未包囊药物的存在下，通过多层脱水-再水化小囊(DRVs)的微流化来制备粒度小于200nm的小囊，同时保持最初包封的溶质量。在脂质体的制备后，通过加入糖可以使小囊获得稳定化效果(Crowe L.M.等.Alch Biochem.Biophys.242(1985)240-247,Hauser等Biochem.Biophys.Acta(1987)897,331-334)，例如将含药物的脂质体进行冻干用于贮存和以后使用时再水化。申请人已经发现了一种改进的制备脂质体和特别小的脂质体的方法，它可减少制备步骤，并以高包封率形成稳定的脂质体。根据本专利技术，提出一种生产试剂的脂质体制剂的方法，这种方法包括以下步骤(ⅰ)形成空的脂质体；(ⅱ)将步骤(ⅰ)的脂质体与糖溶液和所述试剂进行混合；和(ⅲ)干燥步骤(ⅱ)的混合物。对步骤(ⅲ)的干物质进行再水化，形成包囊所述试剂的脂质体。与制备中不包含糖的脂质体相比，这样获得的脂质体的尺寸的增加(与由步骤(ⅰ)获得的脂质体相比)要小许多。因此可以避免如上所述需要的另外的挤出、微流化或均化步骤。人们已经发现在合适浓度的糖的存在下，在干燥过程中由于形成非晶玻璃(Crowe等Arch.Biochem.Biophys.242(1985)240-247)以及糖与磷脂首基的相互作用(Crowe等Cryobiology 31(1994)355-366)，在一定范围内可以防止脂质体的熔融和聚集。在早期研究中，小囊(DRV’s)的脱水/再水化在没有使用糖作为稳定剂的情况下进行，这种方法是基于在控制再水化的条件下，诱导所制小的单层小囊的熔融/聚集(Kirby Gregoriadis,1984)。在这样的基础上，人们可以预测由于存在的适量的糖，小的单层小囊的总的稳定性作用将导致初始SUV’s重组为具有极低的包封率。出乎意料的是没有发现这种情况。尽管对于所有的脂质体而言，试剂的包封程度在一定程度上取决于系统中类脂与试剂之比，估计通过采用本专利技术方法所得的包囊在脂质体中的试剂量应是可观的。另外，当它们用作药物传递系统时，要求脂质体物理性质和化学性质稳定。在水分散体中脂质体易水解，贮存时物理性质发生变化(包括包囊药物的泄漏)，以及由于聚集或熔融引起的小囊尺寸的变化。估计通过本专利技术方法制得的脂质体具有良好的物理和化学稳定性。如上面所述的那样，因此这种方法可以获得小的高载荷的脂质体小囊，这种脂质体小囊尤其适用于形成药用组合物。因此这种方法可以用于制备许多类型的包囊物质。然而它尤其适用于制备药用的小脂质体。在这种情况下，用于这种方法的脂质体包含生物活性物质如药物。由于这个目的，在步骤(ⅰ)中所得的脂质体为适当小的单层小囊，其平均尺寸范围为如25-90nm，优选为50-90nm，通常为70-90nm。由本专利技术方法所得的最终脂质体仍然较小，其平均尺寸小于500nm，通常为100-200nm。用于步骤(ⅰ)的脂质体为空的脂质体，它由任意常规方法(如采用上面所述的典型方法)获得。生成的、其平均尺寸太大而不能用于所需目的的脂质体，可以通过采用本领域所熟知的声波破碎、均化、挤出或微流化技术来变小。用于生产脂质体的类脂在本领域中已为人熟知。它们包括如卵磷脂如磷脂酰胆碱(PC)、二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰胆碱(DSPC)或带电的类脂，尤其任选在胆固醇的存在下的阴离子类脂如磷脂酸或阳离子类脂如硬脂胺。另一优选的类脂为DSPC。类脂的选择在一定程度上取决于活性剂的性质和脂质体的潜在用途。用于步骤(ⅱ)的合适的糖溶液包括单糖本文档来自技高网...

【技术保护点】
制备一种试剂组合物的方法，所述方法包含以下步骤：（ｉ）形成空的脂质体；（ｉｉ）混合来自步骤（ｉ）的脂质体和糖溶液以及一种试剂；和（ｉｉｉ）干燥来自步骤（ｉｉ）的混合物。

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】GB 1998-6-18 9813100.61．制备一种试剂组合物的方法，所述方法包含以下步骤(ⅰ)形成空的脂质体；(ⅱ)混合来自步骤(ⅰ)的脂质体和糖溶液以及一种试剂；和(ⅲ)干燥来自步骤(ⅱ)的混合物。2．根据权利要求1的方法，其进一步包含再水化步骤(ⅲ)的混合物。3．根据权利要求1或权利要求2的方法，其中在步骤(ⅰ)中形成的脂质体为小的单层小囊。4．根据权利要求3的方法，其中所述小囊的平均尺寸为25-100nm。5．根据权利要求4的方法，其中所述小囊的平均尺寸为50-100nm。6．根据前述权利要求中任一项的方法，其中所述组合物含有少于10％(w/v)的糖。7．根据前述权利要求中任一项的方法，其中用于步骤(ⅱ)的糖溶液浓度为20-200mM。8．根据权利要求7的方法，其中所述糖溶液的浓度为30-150mM。9．根据前述权利要求中任一项的方法，其中用于步骤(ⅱ)的糖与类脂的质量比为1∶1-6∶1(w/w)。10．根据权利要求9的方法，其中用于步骤(ⅱ)的糖与类脂的...

【专利技术属性】
技术研发人员：G格雷戈里尔迪斯，B扎迪，PN贾亚赛克拉，
申请(专利权)人：英国国防部，
类型：发明
国别省市：GB[英国]