控制脂质体大小的方法技术

本发明专利技术描述了一种制备所需大小脂质体颗粒的方法。该方法中，将成微泡脂质溶于某种溶脂溶剂，用第二种溶剂将其水合成含１０－５０重量％溶脂溶剂的水合混合物。通过选择溶脂溶剂中的目标溶脂溶剂量来获得所需的颗粒大小。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种制备脂质体组合物的方法，由此可控制所得脂质体的大小。本专利技术还涉及用所述方法制得的组合物。脂质体的制备方法是已知技术。多层微泡(即具有一层以上脂质双层的脂质体)的最简便的制备方法是通过减压旋转蒸发将成微泡脂质从有机溶剂中沉积到烧瓶壁上形成一层薄膜。加入水性缓冲液，进行脂质的水合，水合的温度高于脂质或混合脂质中晶体熔点最高组分的晶体熔点。在加入水性缓冲液的同时进行搅拌，例如搅动，超声处理，涡流搅拌，从而获得脂质体悬浮液。脂质体形成后，对脂质体的大小进行处理，以获得较小且/或大小分布较均匀的颗粒。制定大小的常用方法之一是通过一系列选定大小的过滤器挤出脂质体悬浮液。也可用超声处理悬浮液，使脂质体碎裂成较小的颗粒，由此制定脂质体的大小。大小单层微泡(LUV和SUV)是只有一层脂质双层的脂质体，可用许多方法来制备。SUV的粒径通常在20-50nm，可通过将脂质的乙醇稀溶液迅速注入水相来制备，这又称乙醇注射法。制备SUV的另一种方法是对多层微泡进行剧烈超声处理。较大的多层微泡的大小可能为几百纳米至数微米，通常用反相蒸发法制备，该方法中，由有机溶剂形成油包水脂质乳液，然后减压蒸发去除缓冲液和有机溶剂。专利技术概述本专利技术目的之一是提供一种制备所需粒径脂质体的方法。本专利技术的目的还在于提供一种制备所需大小脂质体的方法。本专利技术的目的还在于提供一种通过选择水合组合物的组成来控制脂质体大小的方法。内容之一，本专利技术包括一种获得所需大小脂质体颗粒的方法。该方法包括用第二溶剂水合溶于溶脂溶剂中的成微泡脂质，形成含10-50重量％溶脂溶剂的水合混合物。溶脂溶剂的量根据所需颗粒大小来选择，水合混合物中该量的溶脂溶剂与所述第二溶剂可溶混。实施例之一中，所述溶脂溶剂是醇，例如甲醇，乙醇和丁醇。实施例之一中，所述成微泡脂质是带电的成微泡脂质，例如阳离子脂质DODAC和阴离子脂质DSPE。另一实施例中，成微泡脂质是中性的。实施例之一中，水合还包括水合以亲水性聚合物链，例如聚乙二醇衍生的成微泡脂质。优选实施例之一中，本专利技术方法中的第二溶剂以水为佳。另一实施例中，水合包括用第二溶剂水合一种药物。水合还可以包括用溶脂溶剂水合药物。在一优选实施例中，所述药物是以一条以上酰基链衍生的放射致敏剂。优选的放射致敏剂是二棕榈酰5-碘-2-脱氧尿苷。一实施例中，所述药物是核酸。本专利技术的内容还包括按以上方法制得的脂质体组合物，其中还包含药物。本专利技术还包括获得最小粒径脂质体的方法将成微泡脂质溶于溶脂溶剂；加入第二溶剂使得溶脂溶剂含量为10-50重量％，所述溶脂溶剂量的选择应使所得脂质体小于用类似配方但溶脂溶剂含量在所述范围之外的所得。本专利技术还包括一种确定脂质体组合物组成从而获得选定大小脂质体的方法。该方法包括将成微泡脂质溶于溶脂溶剂；用一定量第二溶剂水合该脂质，形成脂质体悬浮液。测量悬浮液中脂质体的粒径，重复水合和测量步骤，得出脂质体粒径与溶脂溶剂量之间的关系曲线。根据这一关系曲线选择获得选定脂质体粒径所需的溶脂溶剂量。以下是对本专利技术的详细描述，结合附图，将对本专利技术的以上及其他目的和特征有更全面的理解。附图简述附图说明图1A-B是用鸡蛋卵磷脂，胆固醇，氯化N，N-二油酰基-N，N-二甲基铵(DODAC)和分子量2000Da聚乙二醇衍生的神经酰胺(C20PEG-神经酰胺)制备的脂质体悬浮液，并含包被寡核苷酸，各悬浮液的组成显示在相图1A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图1B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数关系。图2A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂，胆固醇，DODAC和mPEG衍生的中性脂质(mPEG-DS)制备的脂质体悬浮液，并含包被寡核苷酸，各悬浮液的组成显示在相图2A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图2B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图3A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂，胆固醇烯，DODAC和甲氧基-聚乙二醇衍生的阴离子脂质(二硬脂酰基磷脂酰-乙醇胺，DPSE)(mPEG-DPSE)制备的脂质体悬浮液，并含包被寡核苷酸，各悬浮液的组成显示在相图3A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图3B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图4A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂，胆固醇和mPEG-DPSE制备的脂质体悬浮液，各悬浮液的组成显示在相图4A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图4B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图5A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂和胆固醇制备的脂质体悬浮液，各悬浮液的组成显示在图5A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图5B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图6A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂，胆固醇和mPEG-DPSE制备的脂质体悬浮液，各悬浮液的组成显示在图6A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图6B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图7A-B是用部分氢化的大豆卵磷脂和胆固醇制备的脂质体悬浮液，各悬浮液的组成显示在图7A，各悬浮液内脂质体的平均粒径(nm)显示在图7B中，表现为脂质重量％和乙醇重量％两者的函数。图8是3′，5′-二棕榈酰基-5-碘-2′-脱氧尿苷的合成方案图。图9是脂质体大小(nm)与HSPC、mPEG-DPSE和dpIUdR所构成的脂质体脂质水合过程中乙醇重量百分比的关系图。图10是脂质体形成的相图，含有溶于乙醇的dpIUdR，水，并显示优选操作区。详细描述I.定义与缩写“成微泡脂质体”指各种可构成稳定的胶束或脂质体组合物的组分的脂质，一般具有1-2条疏水性酰基烃基链或甾体基团，其极性头部可含有诸如胺、酸、酯、醛或醇等化学反应性基团。“溶脂溶剂”指在各温度可溶解成微泡脂质的各种溶剂。“第二溶剂”指至少可按一定比例与溶脂溶剂完全或部分溶混的溶剂。“dpIUdR”即3′，5′-二棕榈酰基-5-碘-2′-脱氧尿苷。“DODAC”即氯化N，N-二油酰基-N，N-二甲基铵阳离子脂质。“mPEG-DPSE”即甲氧基-聚乙二醇衍生的二硬脂酰基磷脂酰-乙醇胺(DPSE)(mPEG-DPSE)。mPEG的分子量在500-20,000Da，以1,000-5,000为佳。“mPEG-DS”mPEG衍生的中性成微泡脂质。II.本专利技术方法本专利技术包括一种制备脂质体的方法，可控制脂质体的大小。另一方面，本专利技术提供一种获得所需大小脂质体颗粒的方法，和制备含颗粒粒径最小脂质体的悬浮液的方法。以下通过实施例1-8对此进行描述。实施例1描述了一种脂质体悬浮液的制备，其中，形成脂质体的脂质是鸡蛋卵磷脂(EPC)，胆固醇，DODAC和C20PEG-神经酰胺的50∶25∶15∶10摩尔比混合物。将这些脂质溶于乙醇。取各等份的所述脂质，用含20mg/ml 34碱基寡核苷酸的水溶液进行水合，形成6份不同乙醇浓度的脂质体悬浮液。这些悬浮液的组成表述在相图1A中，显示的是含约0.6重量％脂质或约6重量％脂质的组成。含0.6％脂质时，乙醇的重量％是9.5，19.3和39。含6％脂质时乙醇的重量％是5.9，15.8和35.5。实施例1中的表1概括了各脂质体悬浮液的组成。水合后立即用准弹性光散射法测定各悬浮液中的平均粒径。结果见表1(实施例1)，并在图1B中绘制成与本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种获得所需大小脂质体颗粒的方法，包括： 用第二溶剂水合溶于溶脂溶剂的成微泡脂质，形成含１０－５０重量％溶脂溶剂的水合混合物，所述的溶脂溶剂量根据所需颗粒大小来选择，水合混合物中的所述量溶脂溶剂与第二溶剂溶混。

【技术特征摘要】
US 1999-2-8 60/119,2291.一种获得所需大小脂质体颗粒的方法，包括用第二溶剂水合溶于溶脂溶剂的成微泡脂质，形成含10-50重量％溶脂溶剂的水合混合物，所述的溶脂溶剂量根据所需颗粒大小来选择，水合混合物中的所述量溶脂溶剂与第二溶剂溶混。2.根据权利要求1所述的方法，其中的溶脂溶剂是醇。3.根据权利要求2所述的方法，其中的溶脂溶剂是甲醇，乙醇或丁醇。4.根据权利要求1所述的方法，其中的成微泡脂质带有电荷。5.根据权利要求1所述的方法，其中的成微泡脂质是中性的。6.根据权利要求1所述的方法，其中还包括用亲水性聚合物链衍生的成微泡脂质混合。7.根据权利要求6所述的方法，其中的亲水性聚合物链是聚乙二醇。8.根据权利要求1所述的方法，其中的第二溶剂是水。9.根据权利要求1所述的方法，其中的水合包括用第二溶剂水合药物。10.根据权利要求9所述的方法，其中的药物是...

【专利技术属性】
技术研发人员：JL斯莱特，AA泽特，GZ朱，
申请(专利权)人：阿尔扎有限公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]