【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合及其表达载体，以及通过该拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合筛选病毒包膜蛋白的受体的方法，和筛选膜融合的促进剂或抑制剂的方法。
技术介绍
膜融合是生物系统中非常普遍的现象。肌肉发生，受精作用，以及囊泡的运输过程中都涉及到膜融合。具有包膜的病毒侵染宿主细胞，同样依赖于膜融合。膜融合是由2个膜所分开的2个独立区室发生合并形成一个区室的过程。人们可以使用多种不同的技术监测这个过程。 一种方法是使用一对拆分蛋白，当它们相互重新结合的时候，将会重新获得其整体蛋白的活性。 在这类方法中已经建立了很多种报告蛋白系统。像天然就具有的自我组装能力的拆分P-半乳糖苷酶(P-gal)，以及拆分GFP蛋白(spGFP)都已应用于膜融合的分析中。拆分的酶可以实现定量的监测，但是如果使用的底物不具有膜通透性则需要破坏细胞膜才能实现。spGFP可以实现连续地观察活体细胞中发生的情况，但是其定量效果不如酶。 所以在现有技术里就不存在一种技术，即可以实现定量地监测体细胞融合又可以实现连续地观察活体细胞融合的蛋白或其组合以及方法。同时也缺乏一种简便地筛选病毒包...
【技术保护点】
一种拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合，包括第一拆分荧光蛋白的融合蛋白和第二拆分荧光蛋白的融合蛋白，其中，第一拆分荧光蛋白的融合蛋白，为可自我重新结合的已被拆分的第一荧光蛋白的一部分和可自我重新结合的已被拆分的第二荧光蛋白的一部分的融合蛋白；第二拆分荧光蛋白的融合蛋白，为前述第一荧光蛋白的剩余部分和前述第二荧光蛋白的剩余部分的融合蛋白， 其特征在于，前述的第一拆分荧光蛋白的融合蛋白与前述第二拆分荧光蛋白的融合蛋白结合后，前述第一荧光蛋白和前述第二荧光蛋白中的至少一个，可以自我重新结合恢复拆分前的荧光功能，从而发出荧光。
【技术特征摘要】
一种拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合，包括第一拆分荧光蛋白的融合蛋白和第二拆分荧光蛋白的融合蛋白，其中，第一拆分荧光蛋白的融合蛋白，为可自我重新结合的已被拆分的第一荧光蛋白的一部分和可自我重新结合的已被拆分的第二荧光蛋白的一部分的融合蛋白；第二拆分荧光蛋白的融合蛋白，为前述第一荧光蛋白的剩余部分和前述第二荧光蛋白的剩余部分的融合蛋白，其特征在于，前述的第一拆分荧光蛋白的融合蛋白与前述第二拆分荧光蛋白的融合蛋白结合后，前述第一荧光蛋白和前述第二荧光蛋白中的至少一个，可以自我重新结合恢复拆分前的荧光功能，从而发出荧光。2. 根据权利要求1所述的一种拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合，其中，前述第一荧光蛋白和前述第二荧光蛋白中的至少一个，是海肾荧光素酶(Renilla luciferase，RL)，其拆分点在氨基酸序列的第229和第230之间。3. 根据权利要求1所述的一种拆分荧光蛋白的融合蛋白的组合，其中，前述第一荧光蛋白和前述第二荧光蛋白中的至少一个，是绿色荧光蛋白，其拆分点在氨基酸序列的第157和第158之间。4. 一种表达载体的组合，包括第一表达载体和第二表达载体，其特征在于，第一表达载体包括表达前述第一拆分荧光蛋白的融合蛋白的基因，第二表达载体包括表达前述第二拆分荧光蛋白的融合蛋白的基因。5. 根据权利要求4所述的一种表达载体的组合，其中，前述第一表达载体和前述第二表达载体中的任一个为包膜蛋白表达载体，再包括了表达病毒包膜蛋白的基因，该包膜蛋白表达载体可以同时表达包膜蛋白以及第一拆分荧光蛋白的融合蛋白或第二拆分荧光蛋白的融合蛋白...
【专利技术属性】
技术研发人员：松田善卫，近藤直幸，岩本爱吉，
申请(专利权)人：国立大学法人东京大学，中国科学院生物物理研究所，
类型：发明
国别省市：JP[日本]
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