一种胞内融合表达型前T载体及其制备与应用制造技术

本发明专利技术提供了一种胞内融合表达型前Ｔ载体，由如下方法制备得到：（１）构建编码ＢｓｐＴＩ－ＧＳＧＳＧ－ＨＨＨＨＨＨ－ＸｃｍＩ－Ａｍｐ↑［ｒ］－ＸｃｍＩ－ＨｉｎｄＩＩＩ的ＤＮＡ１片段；（２）定点突变ｐＥＴ３９质粒中ＬａｃＩ基因内部的三个ＸｃｍＩ位点，在编码氨基酸序列不变的情况下，改变ＤＮＡ序列，使ＸｃｍＩ识别位点丧失，得到定点突变消除ＸｃｍＩ位点的ｐＥＴ３９－１；（３）利用ＢｓｐＴＩ和ＨｉｎｄＩＩＩ将ＤＮＡ１定向重组于ｐＥＴ３９－２中；（４）去除ｐＥＴ３９－２中ＤｓｂＡ信号肽基因，得到所述胞内融合表达型前Ｔ载体。本发明专利技术除了使用ＸｃｍＩ制备线形Ｔ载体外，不需要用其它限制性内切酶，可一步法构建融合表达基因工程菌，为大量制备活性肽工程菌库提供了可行的技术方法。

【技术实现步骤摘要】

【技术保护点】
一种胞内融合表达型前Ｔ载体，由如下方法制备得到：（１）构建编码ＢｓｐＴＩ－ＧＳＧＳＧ－ＨＨＨＨＨＨ－ＸｃｍＩ－Ａｍｐ↑［ｒ］－ＸｃｍＩ－ＨｉｎｄⅢ的ＤＮＡ片段－－ＤＮＡ１；（２）定点突变ｐＥＴ３９质粒中ＬａｃＩ基因内部的三个ＸｃｍＩ位点，在编码氨基酸序列不变的情况下，改变ＤＮＡ序列，使ＸｃｍＩ识别位点丧失，得到定点突变消除ＸｃｍＩ位点的ｐＥＴ３９－１；（３）利用ＢｓｐＴⅠ和ＨｉｎｄⅢ将ＤＮＡ１定向重组于ｐＥＴ３９－１中，得到ｐＥＴ３９－２，（４）去除ｐＥＴ３９－２中的ＤｓｂＡ信号肽基因，得到所述胞内融合表达型前Ｔ载体。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：林陈水，于真真，杨丹燕，许明，任慧颖，
申请(专利权)人：浙江工业大学，
类型：发明
国别省市：86[中国|杭州]