含Ｋｒｉｎｇｌｅ　５基因的工程菌的发酵工艺以及纯化Ｋｒｉｎｇｌｅ　５蛋白的工艺制造技术

本发明专利技术涉及含Ｋｒｉｎｇｌｅ　５基因的工程菌的发酵工艺以及纯化Ｋｒｉｎｇｌｅ　５蛋白的工艺，确定了适宜于重组工程菌生长和Ｋｒｉｎｇｌｅ　５蛋白表达的最佳培养基，通过正交实验方法，对其重组菌的发酵条件进行了优化；并对发酵后的Ｋｒｉｎｇｌｅ５蛋白采用金属亲和层析、阳离子交换层析二步法进行纯化，在带有梯度洗脱并同时能显示紫外和电导参数装置的高、中、低层析仪上进行；活性检测用抑制鸡胚绒尿囊膜新生血管生长的试验。本发明专利技术明显提高了Ｋｒｉｎｇｌｅ　５蛋白的表达量，可以方便、快速地纯化Ｋｒｉｎｇｌｅ　５蛋白，其纯度和生物活性均可达到要用标准。本发明专利技术生产工艺简单，回收率高，并可线性放大到工业规模化生产。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物、医药研制技术，采用基因重组技术在大肠杆菌中表达血 管生成抑制剂Kringle 5，通过正交试验对工程菌的发酵工艺进行了优化，并采 用亲合层析、阳离子交换层析两步法纯化目的蛋白。
技术介绍
Folkman等于1972年首次提出肿瘤的生长依赖于血管的生成，虽然小的 瘤体可以通过渗透作用从周围组织中获得营养，但它的进一步生长则依赖于形 成新的血管以获得充分的营养。血管生成不仅为肿瘤生长提供了必须的营养， 同时也为其扩散转移提供了重要的途径，许多实验己经证明了肿瘤的生长和迁 移依赖于血管的生成。通过抑制血管生成来抑制肿瘤的生长现在已经成为一种 新的治疗肿瘤的思路和方法。1994年，0' Reilly等发现内源性血管生成抑制剂Angiostatin是由纤溶酶 原前四个饼环区组成。1997年，Cao等发现纤溶酶原N端的第五个饼环区 (plasminogen kringle 5)同样具有抑制血管内皮细胞增殖和肿瘤生长的能 力，而且抑制能力比Angiostatin更强。Kringle 1_3虽然具有抑制内皮细胞 增殖的活性，但对内皮细胞移行的抑制作用不大；Kringle 4虽然本文档来自技高网...

【技术保护点】
含Ｋｒｉｎｇｌｅ　５基因的工程菌的发酵工艺是，其特征在于：设计了１５种不同的发酵培养基，在摇瓶培养方式下，通过测定工程菌在１５种培养基中的比生长速率和目的蛋白ｋｒｉｎｇｌｅ５的表达量，确定了适宜于工程菌生长和目的蛋白表达的培养基；采用优化后的培养基，通过正交试验，确定了最佳的发酵工艺；按照摇瓶培养优化后的条件，在ｍｉｃｒｏ　ＤＣＵ－４００型２０Ｌ自控罐中进行分批培养，确定了最佳的溶氧范围大约为４０％。

【技术特征摘要】

【专利技术属性】
技术研发人员：边六交，党红艳，杨晓燕，陈超，
申请(专利权)人：陕西北美基因股份有限公司，
类型：发明
国别省市：87[中国|西安]