一种用酶比色反应测定β－羟丁酸的方法及其配用的试剂盒和其用途技术

本发明专利技术提供了一种用酶比色反应测定β－羟丁酸的方法及其配用的试剂盒和其用途。在Ｔｒｉｓ－ＨＣＬ缓冲液体系下血清β－羟丁酸与辅酶Ｉ在β－羟丁酸脱氢酶的催化下脱氢生成乙酰乙酸和还原型辅酶Ｉ，生成的还原型辅酶Ｉ和碘硝基四氮唑紫在黄递酶的催化下反应生成最高吸光率在５０５ｎｍ处的红色物质甲月替（ｆｏｒｍａｚａｎｅ），据此可在５０５ｎｍ波长处测定红色产物吸光度的变化来定量生物样本中β－羟丁酸的含量。本法可线性测定生物样本中β－羟丁酸浓度范围（０～４．５ｍｍｏｌ／Ｌ），该测定用于判断人体酮症酸中毒诊断，本发明专利技术所用试剂应用液体双试剂，测定β－羟丁酸所需样本量少，此外，测定时反应时间短，操作简单，适用于大量检测。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于医学检验测定
，具体涉及一种用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法及其配用的试剂盒和其用途。
技术介绍
目前血清|3 -羟丁酸的测定目前检测的方法是酶动力学法，在辅酶I (NAD+)存在的条件下，P-羟丁酸在P-羟丁酸脱氢酶的作用下生成乙酰乙酸、还原型辅酶I(NADH)及氢离子，反应生成的还原型辅酶I (NADH)在340nm吸光度的变化可以间接反映病人血清中的P-羟丁酸的浓度。其反应过程如下 e -羟丁酸脱氢酶e -羟丁酸+辅酶i--^乙酰乙酸+还原型辅酶i +氢离子 但是此方法易受外源性的干扰。
技术实现思路
本专利技术所要解决的技术问题是针对现有技术的现状，而提供一种在酶动力学法反 应测定P-羟丁酸的基础上偶联了一步酶反应，从而保证精确度高及其配速度快、操作简 单的用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法。 本专利技术的另一个目的是提供用以实现用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法配用 的试剂盒。 本专利技术的第三个目的是一种用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法配用的试剂盒 的用途，用来判断人体酮症酸中毒程度。 本专利技术解决上述技术问题所采用的技术方案为一种用酶比色反应测定本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种用酶比色反应测定β－羟丁酸的方法，其特征是：β－羟丁酸与辅酶Ｉ在β－羟丁酸脱氢酶的催化下脱氢生成乙酰乙酸和还原型辅酶Ｉ，生成的还原型辅酶Ｉ和碘硝基四氮唑紫在黄递酶的催化下反应生成最高吸光率在５０５ｎｍ处的红色物质甲月替（ｆｏｒｍａｚａｎｅ），并在５０５ｎｍ波长处测定红色物质甲月替（ｆｏｒｍａｚａｎｅ）吸光度的变化来定量生物样本中β－羟丁酸的含量，其反应方程式如下：β－羟丁酸＋辅酶Ｉ＊→乙酰乙酸＋还原型辅酶Ｉ＋氢离子还原型辅酶Ｉ＋碘硝基四氮唑紫＊→甲月替（ｆｏｒｍａｚａｎｅ）＋辅酶Ｉ。

【技术特征摘要】
一种用酶比色反应测定β-羟丁酸的方法，其特征是β-羟丁酸与辅酶I在β-羟丁酸脱氢酶的催化下脱氢生成乙酰乙酸和还原型辅酶I，生成的还原型辅酶I和碘硝基四氮唑紫在黄递酶的催化下反应生成最高吸光率在505nm处的红色物质甲月替(formazane)，并在505nm波长处测定红色物质甲月替(formazane)吸光度的变化来定量生物样本中β-羟丁酸的含量，其反应方程式如下F2009101556381C00011.tif2. 根据权利要求l所述的一种用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法，其特征是上述的反应过程具体为在0. 225ml的试剂I中加入6 ii L的0 4. 5mmol/L的P -羟丁酸，并置 于37t:水浴5分钟，并读取吸光度AO，加入0. 075ml的试剂11，37t:水浴5分钟后，读取吸 光度Al， AA = Al-AO。3. 根据权利要求2所述的一种用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法，其特征是所述 的试剂I包括100mmol/L的Tris-HCL缓冲液、pH值为8. 5的20mmol/L的草酸、2. 5mmo1/ L的辅酶I、1KU/L的黄递酶以及lmmol/L的碘硝基四氮唑紫，所述的试剂II包括1KU/L的 P-羟丁酸脱氢酶。4. 根据权利要求3所述的一种用酶比色反应测定P-羟丁酸的方法，其特征是P-羟 丁酸的含量计算按以下公式进行计算P -羟丁酸浓度(mmol/...

【专利技术属性】
技术研发人员：张闻，
申请(专利权)人：张闻，
类型：发明
国别省市：97[中国|宁波]