人表皮源性间充质干细胞样多能细胞及其制备方法技术

本发明专利技术公开一种细胞培养基和人表皮源性间充质干细胞样多能细胞及其制备方法。该培养基为在葡萄糖含量为０．５～５ｇ／ｌ的ＤＭＥＭ培养基中添加胎牛血清、ｈｂＦＧＦ、ｈＳＣＦ、非必须氨基酸、Ｌ－谷氨酰胺、庆大霉素，并使其终浓度为胎牛血清：体积分数为１０～２５％、１～４０ｎｇ?ｈｂＦＧＦ／ｍｌ、０．１～２０ｎｇ?ｈＳＣＦ／ｍｌ、０．１～２ｍｌ?１００Ｘ非必须氨基酸／１００ｍｌ、０．１～２ｍｌ含质量分数为３％ｌ－谷氨酰胺的ＰＢＳ溶液／１００ｍｌ和１０００～８０００Ｕ庆大霉素／１００ｍｌ。将人表皮细胞在上述细胞培养基中培养，用消化液消化，祛除未消化下来的人表皮细胞，收集消化下来的间充质干细胞样细胞，经体外培养传代后即为人表皮源性间充质干细胞样多能细胞株。该多能细胞株生物安全性良好，能分化为神经细胞样细胞和免疫细胞样细胞，具有在神经系统损伤修复、免疫系统疾病治疗和异种器官构建的应用潜能。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术属于生物细胞
，具体涉及一种能用于从人表皮细胞分离得到人表 皮源性间充质干细胞样多能细胞的细胞培养基和分离得到的人表皮源性间充质干细胞样 多能细胞及其制备方法。
技术介绍
干细胞可分为胚胎干细胞和成体干细胞。胚胎干细胞由于材料来源困难、伦理问 题和异种(异体)免疫排斥反应等原因，不容易被应用到临床。成体干细胞存在于成体各 种组织中。由于其材料来源广泛，可实施自体细胞移植，故在临床疾病治疗中有着广泛的应 用前景。目前国内外分离成功的成体干细胞有间充质干细胞、表皮干细胞、神经干细胞、脂 肪干细胞和胰岛干细胞等。但目前报道的这些成体干细胞要么生长速度缓慢，要么扩增代 数有限，都不能在较短时间内(三个月)获得临床疾病治疗所需要的巨额细胞数。这也是 目前妨碍成体干细胞应用到临床的瓶颈之一。
技术实现思路
本专利技术的第一个目的是提供一种能用于从人表皮细胞分离得到人表皮源性间充 质干细胞样多能细胞的细胞培养基，该细胞培养基还可以用于人表皮源性间充质干细胞样 多能细胞的传代培养。本专利技术的能用于从人表皮细胞分离得到人表皮源性间充质干细胞样多能细胞的 细胞培养基为在葡萄糖含量为0. 本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种细胞培养基，其特征在于：在葡萄糖含量为０．５～５ｇ／Ｌ的ＤＭＥＭ培养基中添加胎牛血清、ｈｂＦＧＦ、ｈＳＣＦ、非必须氨基酸、Ｌ－谷氨酰胺、庆大霉素，并使上述各种添加成分的终浓度如下：胎牛血清：体积分数为１０～２５％、１～４０ｎｇ　ｈｂＦＧＦ／ｍＬ、０．１～２０ｎｇ　ｈＳＣＦ／ｍＬ、０．１～２ｍＬ　１００Ｘ非必须氨基酸／１００ｍＬ、０．１～２ｍＬ含质量分数为３％Ｌ－谷氨酰胺的ＰＢＳ溶液／１００ｍＬ和１０００～８０００Ｕ庆大霉素／１００ｍＬ。

【技术特征摘要】
一种细胞培养基，其特征在于在葡萄糖含量为0.5～5g/L的DMEM培养基中添加胎牛血清、hbFGF、hSCF、非必须氨基酸、L 谷氨酰胺、庆大霉素，并使上述各种添加成分的终浓度如下胎牛血清体积分数为10～25％、1～40ng hbFGF/mL、0.1～20ng hSCF/mL、0.1～2mL 100X非必须氨基酸/100mL、0.1～2mL含质量分数为3％L 谷氨酰胺的PBS溶液/100mL和1000～8000U庆大霉素/100mL。2.—种人表皮源性间充质干细胞样多能细胞的制备方法，其特征在于，包括以下步骤a)将人表皮细胞在权利要求1所述的细胞培养基中培养；b)然后用消化液消化，祛除未消化下来的人表皮细胞，收集消化下来的间充质干细胞 样细胞，即为人表皮源性间充质干细胞样多能细胞。3.根据权利要求2所述的人表皮源性间充质干细胞样多能细胞的制备方法，其特征在 于，所述的步骤a)的人表皮细胞的获取方法为取包皮或其他皮肤组织，用II型组织酶消 化获得表皮，将表皮剪碎，再用胰蛋白酶进一步消化，获得人表皮细胞。4.根据权利要求2所述的人...

【专利技术属性】
技术研发人员：黄冰，葛坚，
申请(专利权)人：中山大学中山眼科中心，
类型：发明
国别省市：81[中国|广州]