一种抗Ｆａｓ配体抗体，其为抑制Ｆａｓ抗原表达细胞的Ｆａｓ配体诱导的凋亡的中和抗体，抑制率５０％或更高。（*该技术在2016年保护过期，可自由使用*）
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种抗Fas配体抗体和一种利用抗Fas配体抗体的测定方法。更具体而言，本专利技术涉及一种应用抗Fas配体抗体测定人体液中的Fas配体的方法以及适合用于这种测定的抗体。本专利技术也涉及一种对Fas配体诱导的凋亡有高度抑制作用的抗Fas配体抗体。本专利技术还涉及产生这种抗体的杂交瘤或细胞系。
技术介绍
人Fas配体是一种多肽，Nagata等人报道它是一种能诱导表达Fas抗原的细胞发生凋亡的生物分子(Takahashi.T.等，《国际免疫学》(International Immunology)，卷6，1567-1574，1994)。人Fas配体是一种属于TNF家族的II型膜蛋白，分子量约40KD。据估计人体内Fas配体就象TNF的情形一样，是以三聚体的形式存在(Tanaka，M.等，《欧洲分子生物学组织杂志》，(EMBO Journal)卷14，1129-1135，1995)。人Fas配体的胞外区与大鼠Fas配体的胞外区(Suda，T.等《细胞》(Cell)，卷75，1169-1178，1993)和小鼠Fas配体的胞外区(Takakashi，T.等《细胞》(Cell)卷76，969-976，1994)高度同源。人的Fas配体不仅识别人的Fas抗原，而且还识别小鼠的Fas抗原并诱导凋亡。反过来，大鼠的Fas配体和小鼠的Fas配体识别人的Fas抗原并诱导凋亡。凋亡因与机体自身稳定密切相关而引起了人们的注意。上文提及的不同物种间Fas配体具有同源性提示了由Fas配体和Fas抗原介导的凋亡在机体自身稳定中发挥重要作用。最近，Fas配体和Fas抗原异常与一种自身免疫病之间存在的有趣的关系已被报道。这篇报道指出MRL-lpr/lpr(一种自身免疫病的模型小鼠)的Fas抗原基因有突变，而表达这种突变Fas抗原基因的细胞不能诱导凋亡(Watanabe-Fukunnaga.R等.《自然》(Nature)卷356，314-317，1993；Adachi，M.等《国家科学院院刊》(Proc.Natl.Acad.Sci.USA)，卷90，1993)。同时，也有报道指出C3H-gld/gld(另一种自身免疫病模型小鼠)的Fas配体基因有突变，并且gld小鼠的Fas配体没有诱导凋亡的活性。gld小鼠的Fas配体基因的突变是一种点突变，这种点突变的结果是Fas配体胞外区C末端的第7个氨基酸被另一个氨基酸所代替(Tomohiro，Takahashi，等，《细胞》(Cell)，卷76，969-976，1994)。上述的gld小鼠的Fas配体不能与Fas抗原相结合(Fred Ramsdell等，《欧洲免疫学杂志》(Eur.J.Immunol.)，卷24，928-933，1994)。上述发现产生了这个假说一些自身免疫病是由Fas抗原或Fas配体的异常诱导的，也就是说是由留在体内的自身反应性T细胞诱导的，这些细胞如果正常的话应以发生凋亡的方式从体内清除的。最近，人们认为风湿病中滑膜的异常增生也是由细胞不能正常地凋亡而引起的。Kobayashi，M.等进一步推断AIDS病毒感染后T细胞数目的减少是由Fas配体介导的，因为T细胞膜上Fas抗原的表达是由AIDS病毒感染诱导的(Nikkei，《科学》(Science)，卷6，34-41，1993)。因为Fas配体-Fas抗原介导的凋亡与疾病之间的关系逐渐被搞清楚，所以人们越来越期望能用Fas配体或Fas抗原治疗与凋亡异常相关的疾病，如上面提到的自身免疫病、风湿病以及AIDS。Nagata等还报道他们成功地获得一种抗Fas配体的抗体，并且这种抗体能够抑制凋亡(Masato Tanaka等，《欧洲分子生物学组织杂志》(EMBO Journal)，卷14，1129-1135，1995；国际专利申请公开号WO95/13293)。
技术实现思路
如上所述，Nagata等已经作了一系列深入研究工作以分离Fas配体和制备抗这种Fas配体的抗体。然而，到目前为止尚无关于准确测定人体液中Fas配体的报道，并且可溶性Fas配体在人体液中是否存在也不能确定。通常认为有生理活性的细胞因子象Fas配体是局部少量产生以在局部介导反应。这样的细胞因子通常半衰期短，并且介导完一个反应后，被迅速地从组织或血液中清除。因此，象Fas配体这样的细胞因子在外周血中不易测出。最初报道Fas配体是一种跨膜蛋白(膜结合蛋白)，并且在一项体外实验中于某些特殊的条件下Fas配体可从细胞上释放下来。(Masato Tanaka等，《欧洲分子生物学组织杂志》(EMBO Journal)，卷14，1129-1135，1995)。这样的现象在体内生理条件下能否发生还不知道，人体液中是否有Fas配体存在也不知道。即使Fas配体在人体液中存在，估计它的浓度也非常低，并且在这样低的浓度下测定Fas配体会非常困难。此外，体液中可能存在着各种各样干扰免疫测定的物质；因此，这就要求建立一个高敏感性和高特异性的Fas配体测定系统和一种适合用于这种测定的抗体。鉴于Fas配体与各种已指明疾病之间的关系，相信用测量体液中Fas配体的浓度作为一种诊断这样的疾病的方法会有临床价值。然而，到目前为止尚无关于人体液中Fas配体浓度波动的报道。鉴于有的疾病使用一种象Fas配体这样的诱导凋亡的物质可能有效，将来会对患有这样疾病的病人给予Fas配体或影响Fas配体活性或表达的物质，所以能够测出人体液中Fas配体的浓度就非常必要，这样就可以监测血中浓度和判断治疗效果。因此人们期待着有一种高敏感性、高特异性的Fas配体测定方法。至于中和性抗体，人们期待会有一种有更高中和活性、作用机制更清楚的中和抗体；并且由于要用于治疗，出于有效性和安全性的原因，人们期待会有一种能在低剂量下抑制凋亡的抗体。不幸的是，对人的治疗使用非人源的单克隆抗体如小鼠的单克隆抗体有一些缺陷，尤其是在重复性治疗方案中，这将在下面解释。举个例子，小鼠的单克隆抗体循环半衰期相对短些，而且当用于人时缺少其它的一些重要的免疫球蛋白功能特性。也许更重要的是，非人源性单克隆抗体包含相当程度的当给病人注射时具有免疫原性的氨基酸序列。大量的研究表明，在注射了外源性抗体之后，病人针对这种抗体而产生的免疫反应相当强，在最初的治疗以后基本可以抵消抗体的治疗作用。而且，因为用于治疗各种疾病的不同种小鼠和其它有抗原性(对人而言)的单克隆抗体数量不断增加，以任何不同的非人源性单克隆抗体治疗一次或数次后，接下来的即使是无关联的治疗也会由于交叉反应而无效甚或有害。虽然所谓的“嵌合抗体”(如小鼠可变区与人的恒定区连接)的制备取得了一定程度的成功，但仍然存在明显的免疫原性的问题。一般来说，使用典型的人单克隆抗体制备技术制备与Fas配体相互作用的人免疫球蛋白，就象制备与许多抗原相互作用的人免疫球蛋白一样是极其困难的。同样地，使用重组DNA技术制备所谓的“人源化”或“重构”抗体其效果难以保证，这部分归因于不能预测产生的免疫球蛋白的亲和力(例如，请参见Jones等，《自然》(Nature)，321，522-525(1986)；Shearman等，《免疫学杂志》(J.Immunol.)147卷，4366-4373(1991)；Keetleborough蛋白质工程4本文档来自技高网...
【技术保护点】
【技术特征摘要】
【专利技术属性】
技术研发人员：白川嘉门，松末朋和，长田重一，M·S·寇，M·巴斯克斯，
申请(专利权)人：持田制药株式会社，财团法人大阪生物科学研究所，
类型：发明
国别省市：
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