本发明专利技术涉及治疗性抗体诸如ＣＤ２０抗体的中和型抗体的检测法。所述测定法可用于测定免疫疗法中抗体的效力。
【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】
本专利技术涉及用于检测针对抗体或拮抗剂的中和型抗体的测定法，以及所述测定法的用途。
技术介绍
淋巴细胞是骨髓造血过程中产生的多种白细胞的一种。存在两种重要的淋巴细胞群B淋巴细胞(B细胞)和T淋巴细胞(T细胞)。这里对淋巴细胞中的B细胞尤其有兴趣。B细胞在骨髓中成熟，离开骨髓时在其细胞表面表达与抗原结合的抗体。当天然B细胞首次与其膜结合抗体特异的抗原相遇时，细胞开始迅速分裂，其子代分化成记忆B细胞和称为“浆细胞”的效应细胞。记忆B细胞寿命很长，并继续表达与其原始亲代细胞具有相同特异性的膜结合抗体。浆细胞不产生膜结合抗体，而代之产生可分泌型的抗体，可分泌的抗体是体液免疫的重要效应分子。CD20抗原(也称为人B淋巴细胞限制性分化抗原Bp35)是前B细胞和成熟B淋巴细胞上的疏水性跨膜蛋白，分子量大约35kD(Valentine等生物学化学杂志264(19)11282-11287(1989)；和Einfeld等，欧洲分子生物学组织杂志7(3)711-717(1988))。该抗原也在大于90％的B细胞非霍奇金淋巴瘤(NHL)上表达(Anderson等，血液63(6)1424-1433(1984))，但在造血干细胞，原B细胞，正常浆细胞或其它正常组织中未发现(Tedder等，免疫学杂志135(2)973-979，1985)。CD20在细胞周期启动和分化的活化过程早期阶段起调节作用(Tedder等，同上)，并可能发挥钙离子通道的功能。(Tedder等，细胞生物学杂志14D195(1990))由于CD20在B细胞淋巴瘤中表达，这一抗原可作为用于“靶向”这类淋巴瘤的候选者。实质上，这种靶向可如下归纳给予患者B细胞表面抗原CD20的特异性抗体。这些抗CD20抗体与正常和恶性B细胞(表面的)CD20抗原特异结合；与表面抗原CD20结合的抗体可引起肿瘤性B细胞的破坏和耗竭。此外，具有破坏肿瘤潜力的化学制剂或放射活性标记能与抗CD20抗体偶联，从而将所述制剂特异性“运送”至肿瘤性B细胞。不管用什么方法，一个主要目的是破坏肿瘤；可根据所使用的具体抗CD20抗体确定具体方法，因此，靶向CD20抗原的现有方法很多。CD19是B细胞系细胞表面表达的另一种抗原。象CD20一样，发现CD19在从干细胞阶段到快要最终分化为浆细胞之前的整个分化过程中均位于细胞上(Nadler，L.淋巴细胞分型II23-37和Appendix，Renling等，编(1986)Spring Verlag出版)。然而与CD20不同，与CD19结合的抗体引起CD19抗原的内在化。在多种抗体中使用HD237-CD19抗体(也称为B4抗体)可鉴定CD19抗原(Kiesel等，白血病研究II，121119(1987))。CD19抗原存在于4-8％的外周血单个核细胞及大于90％的分离自外周血，脾脏，淋巴结或扁桃体的B细胞。在外周血T细胞，单核细胞或粒细胞中未检出CD19。实际上，所有的非T细胞急性淋巴母细胞白血病(ALL)，B细胞慢性淋巴细胞白血病(CLL)和B细胞淋巴瘤均表达可被B4抗体检测的CD19(Nadler等，免疫学杂志131244(1983)；和Nadler等，血液学进展，Vol.XIIpp.187-206.Brown，E.编(1981)Grune&Stratton公司出版)。由B细胞系的细胞所表达的能识别分化阶段特异性抗原的其它抗体已得到鉴定。其中有抗CD21抗原的B2抗体；抗CD22抗原的B3抗体；抗CD10抗原的J5抗体(也称为CALLA)。见1997年1月21日授权的美国专利5,595,721号(Kaminski等)。美罗华(RITUXAN)抗体是一种遗传工程化鼠/人嵌合单克隆抗CD20抗体。美罗华在1998年4月7日授权的美国专利5,736,137号(Anderson等)中称为“C2B8”的抗体。RITUXAN被指示用于治疗复发或难治的低级或滤泡性CD20阳性B细胞非霍奇金淋巴瘤。在体外对作用机制的研究显示RITUXAN与人补体结合，并通过补体依赖性细胞毒作用(CDC)裂解淋巴样B细胞系(Reff等，血液83(2)435-445(1994))。此外，在抗体依赖的细胞性细胞毒作用(ADCC)试验中有显著活性。最近，RITUXAN在氚标胸腺嘧啶掺入实验中显示抗增殖效应并直接诱导凋亡，而其它抗CD19和抗CD20的抗体则不能(Maloney等，血液88(10)637a(1996))。在实验中观察到RITUXAN与化疗和毒素有协同作用。尤其是RITUXAN使耐药性人B细胞淋巴瘤细胞系对阿霉素，CDDP，VP-16，白喉毒素和蓖麻毒蛋白的细胞毒效应敏感(Demidem等，癌症化疗及放射性药物(Cancer Chemotherapy &Radiopharmaceuticals)12(3)177-186(1997))。体内临床前研究显示RITUXIMAB耗竭来源于弥猴(cynomolgus)外周血，淋巴结和骨髓的B细胞，推测是通过补体和细胞介导的过程(Reff等，血液83(2)435-445(1994))。涉及CD20抗体的专利以及专利出版物包括美国专利5,776,456，5,736,137，6,399,061，和5,843,439，以及美国专利申请US 2002/0197255A1和US 2003/0021781A1(Anderson et al.)；美国专利6,455,043B1和WO00/09160(Grillo-Lopez，A.)；WO00/27428(Grillo-Lopez and White)；WO00/27433(Grillo-Lopez and Leonard)；WO00/44788(Braslawsky et al.)；WO01/10462(Rastetter，W.)；WO01/10461(Rastetter and White)；WO01/10460(White and Grillo-Lopez)；美国专利申请US2002/0006404和WO02/04021(Hanna and Hariharan)；美国专利申请US2002/0012665 A1和WO01/74388(Hanna，N.)；美国专利申请US2002/0009444A1，和WO01/80884(Grillo-Lopez，A.)；WO01/97858(White，C.)；美国专利申请US2002/0128488A1和WO02/34790(Reff，M.)；WO02/060955(Braslawsky etal.)；WO2/096948(Braslawsky et al.)；WO02/079255(Reff and Davies)；美国专利6,171,586B1，和WO98/56418(Lam et al.)；WO98/58964(Raju，S.)；WO99/22764(Raju，S.)；WO99/51642，美国专利6,194,551B1，美国专利6,242,195B1，美国专利6,528,624B1 and美国专利6,538,124(Idusogie et al.)；WO00/42072(Presta，L.)；WO00/本文档来自技高网...
【技术保护点】
评估结合ＣＤ２０的抗体的效力的方法，包括测定来自用ＣＤ２０抗体治疗的患者的生物样品阻断ＣＤ２０抗体的生物活性的能力。
【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】...
【专利技术属性】
技术研发人员：莫林贝雷西尼，宋安，
申请(专利权)人：健泰科生物技术公司，
类型：发明
国别省市：US[美国]
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