新型的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维制造技术

需要进一步的抗体的生产方法。本文中提供将芯层用阳离子性聚合物被覆的聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维、和使用该纤维的抗体、生理活性物质等的制造方法，所述芯层包含产生抗体的细胞(例如，产生抗体的CHO细胞)或产生生理活性物质的细胞(例如，来自胰腺β细胞的MIN6细胞)与交联海藻酸凝胶。细胞)与交联海藻酸凝胶。细胞)与交联海藻酸凝胶。

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】新型的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维


[0001]本专利技术涉及用于生产抗体、生理活性物质等的聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维、该纤维的制造方法、和使用该纤维的抗体、生理活性物质等的制造方法。此外，本专利技术还涉及用于生产抗体、生理活性物质等的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维、该纤维的制造方法、和使用该纤维的抗体、生理活性物质等的制造方法。

技术介绍

[0002]迄今为止，已知通过使用动物细胞的培养来生产抗体、生理活性物质(例如，干扰素、促红细胞生成素、IL
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2(白介素
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2)、CSF(集落刺激因子)、TNF(肿瘤坏死因子)等)等的各种方法。
[0003]生产抗体时，作为产生抗体的细胞，CHO细胞(来自中国仓鼠卵巢)、Sp2/0细胞、NS0细胞等被用作宿主细胞，特别时CHO细胞是能够悬浮培养的细胞，而且细胞的增殖速度快，通过CHO细胞的大量培养，容易大量生产目标蛋白，因此在抗体的制造中被广泛应用。
[0004]近年来，在抗体药品的开发
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制造中，要求向抗体药品的稳定生产、低成本化努力，为了实现这些，生产率更高效的生产系统(例如，连续生产方法、利用小规模生产设备用于产生必要量的抗体的新型培养技术等)的开发受到关注。
[0005]产生抗体的细胞的培养是在转瓶等中使产生抗体的细胞株产生细胞，然后一边控制培养基组成
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温度
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搅拌条件
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气体交换
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pH等培养条件，一边进行扩大培养，最终在数千至1万L规模的大规模生产培养罐中进行培养。
[0006]在以高密度连续培养产生抗体的细胞时，(1)细胞与培养液的分离方法、(2)有效的氧供给方法等有时成为问题。虽然对(1)和(2)谋求了各种改善，但为了有效地生产抗体，需要解决其它各种问题。
[0007]已知具有芯
·
壳结构的海藻酸凝胶纤维，其中芯层包含各种细胞，壳层由海藻酸凝胶组成(专利文献1：国际公开第2011/046105号小册子、专利文献2：日本特开2016
‑
77229号公报)。
[0008]已知具有芯
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壳结构的海藻酸凝胶纤维，其中芯层包含产生抗体的细胞，壳层由海藻酸凝胶组成(专利文献3：国际公开第2020/032221号小册子)。
[0009]已知海藻酸凝胶中空纤维，其中中空部包含各种细胞，外壳层为海藻酸凝胶(专利文献4：国际公开第2015/178427号小册子、专利文献5：专利第6601931号公报、专利文献6：日本特开2014
‑
236698号公报)。
[0010]已知将包含细胞(具体地，人皮肤成纤维细胞、HEK293T细胞)的海藻酸水凝胶纤维用包含纳米颗粒的粘接剂粘接而成的束，所述纳米颗粒是表面用阳离子性水溶性聚合物被覆的纳米颗粒(专利文献7：国际公开第2019/078251号小册子、专利文献8：国际公开第2019/123886号小册子)。
[0011]已知有使用壳聚糖将神经干细胞或含神经干细胞的海藻酸水凝胶纤维集束化而成的移植用神经束(专利文献9：日本特开2014
‑
136128号公报)。
[0012]已知将包含粘附性细胞(具体地，C2C12细胞)、微载体和凝胶状多糖类(具体地，海藻酸凝胶)的混合物用聚氨基酸被覆的细胞结构体(可举出例如片材状(板状)、纤维状(纤维状)、球状等)(专利文献10：日本特开2019
‑
075993号公报)。
[0013]已知将包含细胞(293/GFP细胞)的海藻酸钙微纤维用聚
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L
‑
赖氨酸被覆，并用柠檬酸钠溶液溶解而得的管状凝胶(非专利文献1：PA
‑
Lab Chip，2008，8，p1255
‑
1257)。
[0014]已知在海藻酸的任意1个以上的羧基上介由酰胺键和2价连接基团而导入了环状烷基或叠氮基的化学修饰海藻酸衍生物(专利文献11：国际公开第2019/240219号小册子、专利文献12：国际公开第2021/125255号小册子)。
[0015]已知具有芯
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壳结构的海藻酸凝胶纤维，其中芯层包含产生抗体的细胞，壳层包含由化学修饰海藻酸衍生物形成的交联海藻酸凝胶(专利文献13：国际公开第2021/125279号小册子)。
[0016]专利文献1～13和非专利文献1中既没有公开也没有暗示本专利技术的抗体、生理活性物质等的生产用的聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维或多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维、各凝胶纤维的制造方法、和使用各凝胶纤维的抗体等的制造方法。
[0017]现有技术文献
[0018]专利文献
[0019]专利文献1：国际公开第2011/046105号小册子
[0020]专利文献2：日本特开2016
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77229号公报
[0021]专利文献3：国际公开第2020/032221号小册子
[0022]专利文献4：国际公开第2015/178427号小册子
[0023]专利文献5：日本专利第6601931号公报
[0024]专利文献6：日本特开2014
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236698号公报
[0025]专利文献7：国际公开第2019/078251号小册子
[0026]专利文献8：国际公开第2019/123886号小册子
[0027]专利文献9：日本特开2014
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136128号公报
[0028]专利文献10：日本特开2019
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075993号公报
[0029]专利文献11：国际公开第2019/240219号小册子
[0030]专利文献12：国际公开第2021/125255号小册子
[0031]专利文献13：国际公开第2021/125279号小册子
[0032]非专利文献
[0033]非专利文献1：PA
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Lab Chip，2008，8，p1255
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1257

技术实现思路

[0034]专利技术要解决的课题
[0035]要求含有能够产生抗体、生理活性物质等的细胞的海藻酸凝胶纤维，特别是纤维不分解、可长期(例如，7天以上、14天以上、28天以上等)进行细胞培养的更为实用的海藻酸凝胶纤维。
[0036]用于解决课题的手段
[0037]本专利技术人等反复深入研究，结果发现将交联海藻酸凝胶用阳离子性聚合物被覆而
形成的抗体、生理活性物质等的生产用的新型聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维和其制造方法，所述交联海藻酸凝胶包含能够产生抗体、生理活性物质等的细胞，且通过使用后述的方式[1]中记载的式(I)和式(II)所示的化学修饰海藻酸衍生物进行交联反应而得到。另外，还发现使用该聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维进行产生抗本文档来自技高网...

【技术保护点】

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】1.多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其包含：含有包埋于交联海藻酸凝胶中的产生抗体的细胞或产生生理活性物质的细胞的芯层、被覆前述芯层的阳离子性聚合物层、和被覆前述阳离子性聚合物层的阴离子性聚合物层；所述交联海藻酸凝胶通过使用式(I)和式(II)所示的化学修饰海藻酸衍生物进行交联反应而获得，式(I)所示的化学修饰海藻酸衍生物是下述式(I)所示的化学修饰海藻酸衍生物，[化69]式(I)中，(ALG)表示海藻酸；
‑
NHCO
‑
表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；Akn
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L1‑
是选自下述表中记载的部分结构式中的基团，其中Akn表示环状烷基，
‑
L1‑
为与环状烷基(Akn)键合的2价的连接基团；[表78
‑
1]
[表78
‑
2]各式中，虚线右侧不包括在内；式(II)所示的化学修饰海藻酸衍生物是下述式(II)所示的化学修饰海藻酸衍生物，[化70]式(II)中，(ALG)表示海藻酸；
‑
NHCO
‑
表示介由海藻酸的任意羧基得到的酰胺键；
‑
L2‑
表示选自下述表中记载的部分结构式中的连接基团，[表79]
各式中，两端的虚线外侧不包括在内。2.根据权利要求1所述的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其中，芯层中所含的产生抗体的细胞是产生抗体的基因重组动物细胞，并且其宿主细胞选自CHO细胞、CHO细胞亚株、COS细胞、Sp2/0细胞、NS0细胞、SP2细胞、PERC6细胞、YB2/0细胞、YE2/0细胞、1R983F细胞、Namalwa细胞、Wil
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2细胞、Jurkat细胞、Vero细胞、Molt
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4细胞、HEK293细胞、BHK细胞、HT
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1080细胞、KGH6细胞、P3X63Ag8.653细胞、C127细胞、JC细胞、LA7细胞、ZR
‑
45
‑
30细胞、hTERT细胞、NM2C5细胞和UACC
‑
812细胞。3.根据权利要求1所述的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其中，芯层中所含的产生生理活性物质的细胞是选自胰岛素分泌细胞、胰岛、胰岛细胞、多巴胺分泌细胞、脑垂体细胞、生长激素分泌细胞、甲状旁腺细胞、神经生长因子分泌细胞、凝血因子分泌细胞、肝细胞、甲状旁腺细胞、促红细胞生成素分泌细胞、去甲肾上腺素分泌细胞和生理活性物质表达载体(基因重组细胞)中的细胞。4.根据权利要求1
‑
3中任一项所述的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其中，在芯层中追加含有的成分是选自海藻酸溶液、海藻酸凝胶、培养基、培养液、胶原溶液、甲基纤维素和蔗糖溶液中的成分。5.根据权利要求1
‑
4中任一项所述的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其中，阳离子性聚合物层是选自聚氨基酸、碱性多糖类和碱性聚合物中的阳离子性聚合物。6.根据权利要求1
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5中任一项所述的多层聚合物涂层交联海藻酸凝胶纤维，其中，阳离子性聚合物层是选自聚
‑
L
‑
...

【专利技术属性】
技术研发人员：古迫正司，津田直人，佐藤勉，鸣海智裕，佐藤慎吾，
申请(专利权)人：持田制药株式会社，
类型：发明
国别省市：