提高离心前红细胞的聚焦作用和/或凝集作用的方法技术

哺乳动物抗凝全血样品与试剂的结合物混合，该试剂可减小哺乳动物红细胞彼此间具有的天然排斥力。然后，经处理的血样在含有淡黄色膜扩展插子的管中离心，在管中该插子可物理性的扩展血样的淡黄色膜组成的轴向长度。通过减小红细胞彼此间排斥的倾向，得到红细胞和淡黄色膜间的一个清晰的界限。加入血样中的凝集试剂的作用也会提高。上述方法和试剂首次使精确分析抗凝牛全血的离心样品，并得到血细胞比容，及白细胞差示计数成为可能。另外，具有流动性倾向的人血样品，也可通过加入适当降低红细胞排斥试剂及凝集试剂，进行精确分析。（*该技术在2017年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及一种减小红细胞间相互排斥的自然趋势的方法。尤其是，本专利技术涉及一种使抗凝全血的离心样品中红细胞层和淡黄色膜(buffy coat)粒细胞层之间的界面清晰的方法。U.S.专利4,027,660；4,082,085；4,137,755；和5,086,784涉及一种设备和工艺，该设备和工艺可物理性地拉伸在透明管中，如毛细管中离心血样的血液组分层。然后，血细胞参数的测定由U.S.专利4,156,570和4,558,947中公开的仪器完成。正如U.S.专利4,779,976中描述的，此技术已经被应用在兽医上。上述技术通常称之为定量淡黄色膜分析(“q.b.c.a.”)技术。此技术的研究者遇到了被称之为“流动”现象的问题，该现象与上述的q.b.c.a.技术有关。此流动问题部分是由于红细胞组分上升至淡黄色膜的粒细胞层的结果；部分是由于粒细胞沉降至离心的红细胞层上部的结果，二者都是由于红细胞和粒细胞密度的部分重叠。一些解决方法被设计来减小流动。一种解决方法涉及了利用添加剂，如草酸钾，来减少红细胞的水分，即增加了红细胞的密度。此解决方法在U.S.专利4,159,896和4,181,609中说明。但此解决方法不能完全地消除流动问题。另一种解决流动问题的尝试在U.S.专利4,695,553中探讨。此解决方法是，血样首先在管中以一个方向离心，然后将管反放入离心机，使血样在管中以相反方向离心。此方法的原理是，在第一次离心步骤中，最轻的红细胞会将在压积的红细胞层的上部；然后当再次反方向离心后，最轻的红细胞可与上面覆盖的重的红细胞接合，因此可以不上升至粒细胞界面。这种解决方法很麻烦，需要大量的技术人员完成。第三个解决流动问题的方法涉及，向血样中加入抗体，或其它对红细胞表面抗原具有特异性的结合剂。一种适当的抗体是种特异性抗血型糖蛋白抗体。此抗体可使相邻红细胞彼此结合，由此导致红细胞附聚。U.S.4,594,165和U.S.4,940,668描述了与上述q.b.c.a.技术有关的红细胞附聚引发抗体的应用。为了使抗体发挥其预期的作用，各个红细胞在离心步骤前必须能够彼此相对靠近，使抗体可以将相邻红细胞彼此结合起来。在通过q.b.c.a.技术对抗凝全血样品进行分析时，尤其是采用红细胞特异性抗体时，一个复杂化因素是红细胞之间彼此排斥的自然趋势。排斥现象是由于“Z-电位”产生的，该电位是由于红细胞表面负电荷的存在，而电荷的存在是因为红细胞膜上的唾液酸根导致的。血中的红细胞还有一种聚集的趋势并形成为“红细胞钱串”或“币堆”。红细胞钱串化趋势是影响透明管中全血样品的红细胞沉降速度测定的因素，也影响比重。U.S.4,135,819中探讨了红细胞钱串化现象。全血样品中的红细胞成钱串化趋势的相反作用是上述的Z-电位排斥现象。1975年9月2日批准的U.S.专利3,902,964，D.J Greenspan描述了一种方法和装置，可利用化学手段从血组成中分离出血浆或血清。此专利提出将正电性聚合物，如聚凝胺和血细胞凝集素植物提取物-植物血凝素，加入到血样中以提高血液中成分的凝集作用及这些成分由血清和血浆中的沉积。Greenspan专利技术的目的是将上述血样组分不通过离心即能够产生快速重力性地分离。Greenspan专利技术提出，一个正电性聚合物与一个植物血凝素结合，实际上可将血样中的组分从血浆或血清中分离出来而不用离心血样。此参考文件并没有讨论任何关于解决抗凝全血离心样品中，红细胞层和粒细胞层之间的清晰轮廓界面问题的解决方法。则根据上述Greenspan专利的说教不能认定其对离心抗凝人全血中流动现象的反作用有重要的改进作用。需要一定程度地中和或减小动物和人的红细胞Z-电位，来提高红细胞聚集作用，红细胞钱串化和凝集作用，以改善上述人和动物的q.b.c.a技术。本专利技术涉及一种提高人和动物的，尤其是奶牛的，红细胞钱串化或其它聚集作用趋势的方法。本专利技术的实施显著地减小了红细胞Z-电位导致的排斥力强度。由受试者血样中存在的结合剂所产生的红细胞聚集作用；钱串化作用；或凝集作用，可被一定程度地提高，能有效地使离心的抗凝全血样品中红细胞和粒细胞层间的界面清晰。本专利技术涉及向血样中添加复合试剂，其中该试剂将中和或减小红细胞Z-电位的排斥作用。应用的试剂包括高分子量阳离子大分子物质的结合物，即分子量约大于50,000道尔顿的物质。溶液中适当试剂结合物将形成混合物分子团，该分子团可成为红细胞聚集和钱串化的引发剂。特别是，试剂结合物包括将以下物质结合聚凝胺；鱼精蛋白硫酸盐；阳离子抗生素，如万古霉素；聚乙二醇(PEG)；羟基二乙基淀粉(HES)；聚乙烯吡咯烷酮(PVP)；和高分子量葡聚糖。本专利技术中所用的术语“分子团”涉及亚显微颗粒，该种颗粒在溶液，尤其在哺乳动物的抗凝全血中，具有热力学稳定性。分子团由二个或更多的大分子形成，至少其中之一在分子团上形成正电性外层，该正电性层中和或减小由红细胞Z-电位产生的排斥力强度。优选在含水溶液中形成高分子分子团，例如与抗凝全血样品混合的生理盐水。某些超高分子量带正电荷物质，如PVP，也可单独或与其它上述试剂结合使用。为了满足在抗凝全血的离心样品中制备清晰红细胞-粒细胞界面的需要，本专利技术还试图向血样中加入红细胞特异性结合剂，如抗血型糖蛋白抗体或植物凝血素，并与上述大分子剂结合。因此，本专利技术的一个目的是提供一种处理抗凝全血样品的方法，以提高血样中红细胞成钱串化或其它聚集作用的趋势。本专利技术进一步的目的是提供一种方法，其中由红细胞Z-电位导致的红细胞排斥作用可被抑制。本专利技术又一个目的是提供一种方法，其中血样与含有一种或多种可一定程度地提高红细胞聚集作用的高分子量阳离子物质进行混合，它们将在血样离心时通过红细胞密度依重力沉降出层次。本专利技术另一个目的是提供一种方法，其中血样还可与能使红细胞凝集的结合剂混合，它们在血样离心时通过红细胞密度依重力沉降出层次。本专利技术的这些和其它的目的及进步，将通过下列结合有附图的本专利技术优选实施例具体说明，使所属领域技术人员更易理解。附图简述附图说明图1.是一个透明样品管的透视图，该透明样品管含有离心血样和细胞层拉伸插入物；图2.是一个红细胞彼此排斥状态的图解说明，该彼此排斥状态是由于其表面负电荷导致的；图3.是一个由葡聚糖和聚凝胺结合形成的分子团的图示，其中该分子团具有表面正电荷；图4.是一个状态图示，该状态是当分子团加入到血样中，通过减小或中和Z-电位的影响，使相邻红细胞更加紧密聚集情形。图5.是一个状态的图示，在该状态中，分子团加入到血样中起减小或中和红细胞彼此排斥强度的作用，以使血样中红细胞特异性结合剂将各个红细胞凝集。完成专利技术的最优选方式将附图作为参考，附图1表示在本专利技术试验方法中优选的血液取样和测试的装置类型。该装置包括抗凝全血样品可在其中抽取和离心的透明管2。透明管2含有通常为圆柱形的血细胞层拉伸插子6，该插子具有特定的比重，并能在管2的离心抗凝全血样品红细胞层8中漂浮。管2的底部用盖4封闭，以保证管2样品的离心。当血样在管2中离心时，其各组成按照特定的比重沉降分层。最重层是红细胞层8；然后依次为淡黄色膜10；和血浆层12。淡黄色膜10有三个主要组成层，即，粒细胞层14，淋巴细胞/单核细胞层16，和血小本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种在离心抗凝全血样品的红细胞层和粒细胞层间形成良好确定的和清晰的界面的方法，该方法包括的步骤如下：ａ）将一定量的分子团与血样混合以提供一种血液－分子团混合物，该分子团由至少两种不同的高分子量颗粒组成，并具有表面正电荷；及ｂ）在透明 管中离心血液－分子团混合物。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：SC沃德罗，RA莱文，
申请(专利权)人：SC沃德罗，RA莱文，
类型：发明
国别省市：US[美国]