一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置制造方法及图纸

本发明专利技术提供一种基于酶联免疫检测的原理来实现抗核小体抗体IgG的免疫检测的方法及其试剂装置，是一种独立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗核小体抗体IgG的分析方法、试剂装置以及配套试剂。它可以将抗核小体抗体IgG酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临床应用提供了更好的依据。

【技术实现步骤摘要】

本专利技术申请涉及一种测定抗核小体抗体IgG的方法及试剂装置，属于生物检测技 术领域。
技术介绍
系统性红斑狼疮(SLE)是一种波及全身结缔组织，使多脏器受损害之慢性炎症性 自身免疫性疾病。该病是一种累及多个系统，以慢性非化脓性炎症为特征，临床表现复杂多 样化的结缔组织病，病因尚不完全明确，一般认为可能属于多因素性，即与遗传因素、病毒 感染、内分泌因素、药物因素、环境因素等有关。在SLE发生中核小体是主要的自身抗原并且这种核小体的免疫原性很强，驱动辅 助T细胞进行自身免疫应答，诱导产生抗核小体抗体(AnuA)。AnuA仅对天然的核小体以及 核小体亚结构(H2A-H2B) DNA起作用，而并不与其中的DNA或组蛋白起反应，而且AnuA的形 成又先于抗dsDNA抗体和抗组蛋白抗体。近年来，虽然国内对AnuA研究尚少，但其对SLE 的诊断价值在国际上已成为一个热门话题，AnuA对SLE的临床诊断敏感性高.特异性强是 SLE诊断标记性抗体之一。它可以出现在疾病的各个不同时期，出现的时间早并与疾病的活 动性密切相关对SLE早期诊断和疗效动态观察有重要意义。AnuA的阳性率远远高于其他抗 体，结果证实核小体是SLE的自身抗原是多种抗体的根源。也提示AnuA的检测对提高SLE 的诊断有一定临床意义与应用价值，对SLE疾病诊断治疗预后观察具有重要的意义。至今已经有许多不同的技术已被用于检测AnuA，包括LE细胞试验，免疫沉淀法、 免疫印迹法、间接免疫荧光法、酶联免疫吸附试验的方法，但这些方法都存在着不足之处；一、LE细胞试验由于LE细胞试验存在着敏感性差、特异性不强、不能定量、操作费时、技术因素影 响大等局限性，因而早在1987年kahn就已对是否还需要再检查LE细胞提出疑问。1994 年，美国临床病理学家协会(ASCP)的实用参数/测定结果委员会更明确提出LE细胞检查 是一项已过时的试验，它应被更具有确定性的免疫学方法所取代。二、免疫沉淀法主要用于抗原或者抗体的定性检测。其原理是指可溶性抗原与相应抗体在有电解 质存在的情况下，按适当比例所形成的可见沉淀物现象。本法只是单一的定性试验，不能定 量分析；且本底不易清除，对结果有很大影响。三、免疫印迹法免疫印迹是将蛋白质转移到膜上，然后利用抗体进行检测。对已知表达蛋白，可用 相应抗体作为一抗进行检测，对新基因的表达产物，可通过融合部分的抗体检测。其不足之 处在于(1)只能进行定性和半定量分析，无法得出被检物质具体的量。(2)操作步骤繁琐，试验用时较长。(3)检测的灵敏度还有待提高。5四、间接免疫荧光法该法的基本原理是用特异性的抗体与切片中的抗原结合后，继用间接荧光抗体， 与前面的抗原抗体复合物结合，形成抗原抗体荧光复合物。在荧光显微镜下，根据复合物的 发光情况来确定所检测的抗原。该方法评价由于结合在抗原抗体复合物上的荧光素抗体 增多，发出的荧光亮度强，因而其敏感性强。但是其不足也是明显的(1)在分析结果时无法根据分子量的大小区分非特异性识别。(2)操作相对复杂，需要价格较昂贵的荧光显微镜，在很多基层医院难以推广，也 不太适用于标本量较多的实验室。(3)荧光测定中的本底较高，荧光免疫技术用于定量测定有一定困难。(4)结果判定需要有经验的专业人员，分析结果的客观性不足。五、酶联免疫吸附法现在用得最广泛的酶联免疫吸附法(ELISA)来检测AnuA。与其他生物检测或免疫 检测比较，这种ELISA检测方法、技术、工具或产品仍有较多的不足而使其应用受限，这些 不足主要包括以下几个方面(1)使用12X8型、8X 12型或整板型96孔专用微孔板作为抗原抑或抗体包被用 品和反应容器，在使用时只能分成12批次、8批次或整板一次使用；(2)定量测定所用的试剂可多达11种，每一种检测试剂都要用试剂瓶来盛装，并 且每使用一种试剂时都需要更换吸液嘴来分别加注到微孔板的微孔中，不但试剂瓶种类 多，加注试剂的操作也极为繁琐，如果不使用全自动酶免分析仪的话，则全部操作都要用手 工来进行，而全自动酶免分析仪的价格十分昂贵，投入较大；(3)每一检测或每次检测无试剂信息的条形码，只能通过查看试剂盒外包装盒的 标识才能了解或知悉检测试剂的生产批号及有效期信息，而且所知悉的信息在检测过程中 不受控，具有很大的随意性；(4)检测试剂在检测过程中为开放方式，容易引起各种试剂之间的交叉污染而影 响检测结果；(5)在未采用全自动酶免分析仪进行检测时的检测过程为手工操作，试剂或样品 的加量不很精确，操作过程极为繁琐和复杂，容易发生操作差错，检测结果的不准确度和不 精密度高；(6)在检测项目成套试剂的数量配置及使用上均为项目数X96人份，如果需要检 测10个项目，则试剂的配置及使用数须为10X96人份，如果只有一份样品需要检测10个 不同的项目，也需要配置10X96人份的试剂。
技术实现思路
为了解决抗核小体抗体IgG分析检测现有方法中存在的不足之处，本专利技术申请提 供一种新的检测方法和试剂装置及配套试剂。该方法基于酶联免疫检测技术，寻求一种更 加简单、准确、有效的一套方法及试剂来进行定量检测以满足临床诊断的需要。本方法基于酶联免疫检测的原理来实现抗核小体抗体IgG的免疫检测，是一种独 立的、单人份的、一次性的用于酶联免疫检测抗核小体抗体IgG的分析方法、试剂装置以及 配套试剂，它可以将抗核小体抗体IgG酶联免疫检测所需要的多种试剂盛装在一个分析装置上，通过这种方法可以更方便地根据检测项目的使用需要进行相关的免疫学检测，为临 床应用提供了更好的依据。本专利技术申请提供一种测定抗核小体抗体IgG的方法，是通过酶联免疫检测的分析 试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的基体 和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶 液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最终通 过对测量的数值进行处理而获得检测结果。所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，是将待测样品中的待测抗核小体抗体IgG 与高度纯化的核小体抗原进行反应而形成第一免疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的 第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应形成的第二络合物与显色底物进行显色对 比分析，从而获得待测抗核小体抗体IgG的含量。所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其中，所述的第二抗体为辣根过氧化物酶 标记的抗人IgG抗体。本专利技术申请还提供一种测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，设有8个孔位的基体、 位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG的分析试剂装置以及相 应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其中，所述基体一端的手柄上粘贴有 检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应的检测项目代码、检测试 剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、酶联免疫反应类型、试剂 及分析装置的序列号的信息。所述的测定抗核小体抗体IgG的试剂装置中，所述孔位包括一个反应孔、一个样 品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，1)样品孔盛容待测溶液；2)稀释孔用于样品的稀释；3)反应孔为平底并具有很高的光源/光本文档来自技高网...

【技术保护点】
１．一种测定抗核小体抗体ＩｇＧ的方法，其特征在于：所述方法是通过酶联免疫检测的分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有８个孔位的基体和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试剂溶液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最终通过对测量的数值进行处理而获得检测结果。

【技术特征摘要】
1.一种测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述方法是通过酶联免疫检测的 分析试剂装置和配套试剂组成的试剂盒来实现的，这种分析试剂装置包括设有8个孔位的 基体和位于基体一端的手柄，它通过专用特定分析仪器对试剂装置各孔之间的各种特定试 剂溶液进行加注和吸弃，使样品与试剂发生反应，然后测量发生反应后溶液色泽的数值，最 终通过对测量的数值进行处理而获得检测结果。2.根据权利要求1所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述的方法是 将待测样品中的待测抗核小体抗体IgG与高度纯化的核小体抗原进行反应而形成第一免 疫络合物，该第一免疫络合物与酶标记的第二抗体进行反应形成第二免疫络合物，将反应 形成的第二络合物与显色底物进行显色对比分析，从而获得待测抗核小体抗体IgG的含 量。3.根据权利要求2所述的测定抗核小体抗体IgG的方法，其特征在于所述的第二抗 体为辣根过氧化物酶标记的抗人IgG抗体。4.一种用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述的试剂装置设有8 个孔位的基体、位于基体一端的手柄，以及用于酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG的分析 试剂装置以及相应数量的配套试剂校准品、质控物和缓冲洗涤液的组份。5.根据权利要求4所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 基体一端的手柄上粘贴有检测试剂条形码的标帖，所述条形码的数值包含每项检测所对应 的检测项目代码、检测试剂生产批号、试剂有效期、定性校正值/定量测定标准曲线参数、 酶联免疫反应类型、试剂及分析装置的序列号的信息。6.根据权利要求4所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 孔位包括一个反应孔、一个样品孔、一个稀释孔和五个试剂孔，其中，1)样品孔盛容待测溶液；2)稀释孔用于样品的稀释；3)反应孔为平底并具有很高的光源/光路通透性，当盛装无色/空白试剂溶液时对可 见光/紫外光/荧光的吸光度值趋近于零，孔内包被有检测抗核小体抗体IgG所需的高度 纯化的核小体抗原，该孔用于盛容检测样品和检测试剂，并与这些样品和试剂发生酶联免 疫反应，是酶联免疫反应和色泽显示及检测的容器；4)每一个试剂孔盛装有酶联免疫法检测抗核小体抗体IgG所需的一种试剂，加注试剂 后用薄膜将微孔的开放口缘进行封闭。7.根据权利要求6所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 试剂孔内所盛装酶联免疫检测所需的试剂包括检测抗核小体抗体IgG之酶联免疫反应所 需的免疫反应抑制剂/中和剂/阻断剂/吸附剂、酶结合物溶液、显色底物溶液、显色终止 液、反应增强剂/促进剂、样品稀释溶液。8.根据权利要求6所述的用于测定抗核小体抗体IgG的试剂装置，其特征在于所述 样品孔、反应孔、稀释孔和试剂孔剖面形状包括平型、V型或U型，抑或是平型、V型和U型之 间的任意组合。9.根据权利要求1所述...

【专利技术属性】
技术研发人员：何林，潘荞，肖灿，伍坚，
申请(专利权)人：深圳市亚辉龙生物科技有限公司，
类型：发明
国别省市：94