本发明专利技术涉及抗HER2-抗CD3 scFv双特异四价抗体。具体而言，本发明专利技术涉及包含抗HER2 IgG、连接片段和抗CD3 scFv的双特异四价抗体，其中抗CD3 scFv通过连接片段与抗HER2 IgG的C端连接。本发明专利技术的双特异四价抗体具有两个与HER2抗原结合的区域和两个与CD3抗原结合的区域，且包含人源化的Fc片段，免疫原性大大降低，可以采用简便的真核细胞表达系统生产，生产方便。
【技术实现步骤摘要】
本专利技术涉及一种双特异四价抗体，具体而言，本专利技术涉及同时靶向CD3和HER2的 抗体，更具体而言，本专利技术涉及抗HER2-抗CD3 scFv双特异四价抗体。
技术介绍
-直以来乳腺癌都是一种致命性疾病，从首次发现转移到累积生存率为50%时所 对应的生存时间仅为 17 至 20 个月（Piccart MAnticancer Drugs, 7:5-7, 1996)。有一 些激素、细胞毒素或者其他生物制剂在乳腺癌的保守治疗中表现出一定的作用，但是截止 目前并没有一致认可的乳腺癌标准治疗方案，并且通常的治疗方案都会带来严重的副反应 (Bernard Marty C，等人，Oncologist, 9:617_632, 2004) 〇 在二十世纪80年代，Denis Slamon首次在189个原发性乳腺癌病例中发现 HER2(人表皮生长因子受体2)基因在30 %的病例中都过度扩增，并表明HER2与总存活 率及复发时间密切相关（Salman DJ，等人，Science, 235:177-182, 1985)。目前的研宄 表明，大约25~30%的乳腺癌病人中的HER2都是过表达的（Revillion F，等人，Eur J Cancer, 34:791-808, 1998)，并且其与肿瘤的恶性生长程度相关（Wright C,等人，Cancer Res,49:2087-2090, 1989)〇 曲妥珠单抗（Trastuzumab)是一个抗HER2胞外区的人源化单克隆抗体（Carter P,等人，PNAS, 89(10) :4285-4289, 1992)。然而其在临床应用中的抗肿瘤效果往往没 有临床前实验那么好，所以通常需要与化疗药等联合用药（Slamon DJ，等人，N Engl J Med, 344:783-792, 2001)。 设计一种可以募集效应细胞的双功能抗体是提高抗体效能的有效手段。目前为 止，研宄最多的是利用⑶3分子的功能。通过⑶3分子将杀伤性T细胞激活，可以有效地清 除目的肿瘤（Haas C,等人，Immunobiology, 214:441-453, 2009)。其中 Micormet 公司开发 的一种重组双功能T细胞激动抗体为BiTE，具有很好的前景，但是其最大的问题在于血浆 半衰期非常短，人体半衰期仅为1小时（Loffler A，等人，Blood，95:2098-2103)。这是由 BiTE本身的结构所导致的，其由两个单链抗体片段组成，分子量仅60kDa，并且缺失了抗体 分子中对延长半衰期有重要作用的Fc片段。 卡妥索单抗（Catumaxomab)是另一种具有前景的多功能抗体，是一种祀向⑶3及 EpCAM的杂合Ig分子，目前该产品已经被批准用于腹水癌的治疗（Jager M,等人，Cancer Res, 72:24-32, 2012)。另一种处于临床二期的多功能抗体为厄妥索单抗（Ertumaxomab)， 其靶向⑶3及HER2。这种杂合抗体的一条重链及轻链来源于大鼠的IgG，靶向⑶3 ;另一条 重链及轻链来源于小鼠的IgG，靶向HER2。由此而带来的问题就是这种产品的生产非常困 难，因为，为了获得表达双功能厄妥索抗体的细胞系，首先要获得一株表达CD3抗体的二倍 体杂交瘤，以及一株表达HER2抗体的二倍体杂交瘤，然后将两株杂交瘤再次杂交，获得四 倍体杂交瘤，其可以表达抗⑶3以及HER2的双功能抗体。而生产普通的单个靶点的抗体， 只需要获得一株二倍体杂交瘤，与此相比较，双功能抗体的生产过程更复杂，而且四倍体杂 交瘤的获得更加困难，并且由于其鼠源的来源，导致其免疫原性很高。 因此，本领域需要一种人源化的并且能够高特异地靶向并杀死表达HER2的肿瘤 细胞，尤其是低表达HER2的肿瘤细胞的双功能抗体。
技术实现思路
因此，本专利技术的技术目的在于提供利用CD3分子募集效应细胞的活性从而增强 HER2特异性杀伤肿瘤细胞活性的双功能抗体。 因此，本专利技术的第一方面涉及一种双特异四价抗体，其包括一种靶向第一抗原 HER2的蛋白功能区和一种靶向第二抗原CD3的蛋白功能区，其中靶向第二抗原CD3的蛋白 功能区连接在靶向第一抗原HER2的蛋白功能区的C端。 在某些实施方案中，所述靶向第二抗原CD3的蛋白功能区通过连接片段连接在靶 向第一抗原HER2的蛋白功能区的C端。 在某些实施方案中，所述靶向第一抗原HER2的蛋白功能区为靶向HER2的免疫球 蛋白或其修饰物、功能等同物、功能片段或变体，在某些实施方案中，靶向第一抗原HER2的 免疫球蛋白为IgG、IgA、IgD、IgE、IgM抗体或者它们的杂合体，在某些实施方案中，靶向第 一抗原HER2的免疫球蛋白为IgG抗体。 在某些实施方案中，所述免疫球蛋白为嵌合的、人源化的或全人的免疫球蛋白。 在某些实施方案中，靶向第二抗原CD3的蛋白功能区为靶向CD3的免疫球蛋白或 其修饰物、功能等同物、功能片段或变体，在某些实施方案中，靶向第二抗原CD3的蛋白功 能区为革巴向⑶3的scFv或Fab。 在某些实施方案中，所述scFv或Fab为嵌合的、人源化的或全人的scFv或Fab。 在某些实施方案中，所述连接片段长度为5-30个氨基酸，在某些实施方案 中，所述连接片段长度为15个氨基酸，在某些实施方案中，所述连接片段的序列为 GGGGSGGGGSGGGGS〇 在某些实施方案中，所述双特异四价抗体由抗HER2 IgG-连接片段-抗⑶3 scFv 组成，在某些实施方案中，所述双特异四价抗体由两条包含SEQ ID No :1的轻链和两条包含 SEQ ID No :3的重链组成。 在某些实施方案中，所述轻链和重链分别为经取代、缺失或添加一个或多个氨基 酸而由SEQ ID No :1和SEQ ID No :3衍生而来并高特异地靶向并杀死表达HER2的恶性细 胞的序列，或者是与SEQ ID No :1和No :3所示的序列具有至少约70%同一性并高特异地靶 向并杀死表达HER2的恶性细胞的氨基酸序列。在某些实施方案中，所述轻链和重链分别为 与 SEQ ID No:l 和 No:3 所示的序列具有至少约 75%、80%、85%、90%、91%、92%、93%、 94%、95%、96%、97%、98%、99%、99.1%、99.2%、99.3%、99.4%、99.5%、99.6%同一性 并高特异地靶向并杀死表达HER2的恶性细胞的氨基酸序列。 本专利技术第二方面涉及如上所述的双特异四价抗体的编码核酸序列。 在某些实施方案中，所述编码核酸序列为分别包含SEQ ID No :2和No :4所示序列 的序列。 本专利技术的第三方面涉及一种包含有效连接其中的如上所述的编码核酸序列的载 体。 在某些实施方案中，所述载体中编码轻链和重链的核酸序列存在于不同的表达框 中。 在某些实施方案中，所述的载体为真核细胞表达载体，在某些实施方案中，所述的 载体为经改造而具有两个表达框的载体Y0GC。 本专利技术的第四方面涉及一种转化或转染有如上所述的载体的宿主细胞。 本专利技术的第五方面涉及一种药物组合物，其包含如上所述的双特异四价抗体和药 学上可接受的载体。 本专利技术的第六方面涉及一种生产双特异四价抗体的方法，其包括在适宜的本文档来自技高网...
【技术保护点】
一种双特异四价抗体，其包括一种靶向第一抗原HER2的蛋白功能区和一种靶向第二抗原CD3的蛋白功能区，其中靶向第二抗原CD3的蛋白功能区连接在靶向第一抗原HER2的蛋白功能区的C端。
【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：宋楠萌，杨亚平，刘家望，车美英，
申请(专利权)人：北京韩美药品有限公司，
类型：发明
国别省市：北京;11
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