一种用于血型测定的灵敏度控制物制备方法、由该方法制得的改造细胞及其该灵敏度控制物的应用、进行灵敏度控制的方法以及试剂盒技术

本发明专利技术提供了一种血型测定的灵敏度控制物制备方法，包括将一定数量的抗原溶解于水中，制得浓度确定的抗原溶液，并将此溶液与细胞接触，使抗原分子插入细胞膜内，或者将此溶液与经插入连接分子修饰的细胞接触，使抗原分子通过连接分子与细胞膜结合，得到改造细胞。淋洗改造细胞，并配成溶液，测定此溶液浓度，使其可用作血型测定的灵敏度控制物。（*该技术在2022年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及人工改造细胞的应用，这些细胞表达血型(或相关血型)抗原，可用于免疫血液学/血液学/免疫学/血清学检验的灵敏度控制。本专利技术尤其涉及使用一些输液用药物时的灵敏度控制，这些药物由插入A抗原和/或B抗原的细胞制备。
技术介绍
血站的一项重要职能是检测血液以准确测定提供血液(或其它制品)者的血型。血液分型的知识在一些治疗过程中极为重要，例如输血、器官移植、新生儿溶血症的治疗等。尤其在输血前，供血者血型必须提前被检测出来。血型错配可造成灾难性的后果，可能导致受血者死亡。在输血血清学中，ABO血型系统代表了人类红细胞(RBCs)表面最重要的几种抗原。人类的血型归属于下列四种主要的血型之一A，B，AB和O型。各血型的红细胞分别携带A抗原、B抗原、同时有A、B抗原、或者不表达任何抗原。针对红细胞不具有的抗原，体内天然存在其抗体，即A型血的人，体内存在抗B抗体；B型血的人则存在抗A抗体；O型血的人，则同时存在抗A和抗B抗体；AB血型的人，则不存在任何血型抗体。在输血前，必须先进行交叉配型(既可直接用供血者血液与受血者血清进行测试，亦可根据受血者医疗纪录对供血者血液进行电子配型)，以保证不将某型红细胞输入存在其抗体的受血者体内。使用含有已知抗体的试剂检查红细胞的抗原，称为正向定型；使用携带已知抗原的红细胞检查血清中的抗体，称为反向定型。从1980年代开始，单克隆抗体(MAbs)被使用于血液分型。相较于传统的多克隆抗血清，单克隆抗体可以增加检测的特异性、提供持久的反应性，以及在大多数情况下，可以增加检测的效能。分型系统(例如胶卡等)以及试剂的常规质量控制在血站实验室中是必备的，因为分型系统以及试剂有可能在运输、储藏或者在使用过程中由于污染而损失特异性和/或效能。单克隆抗体也被用于鉴定ABO血型系统的各种自然变异，包括A和B型的各个亚型。为保证正确的鉴定，血站实验室中的单克隆分型试剂及其分型系统必须用红细胞标准品进行质量控制。为达成这个目的，血型抗原表达弱的红细胞更适于用作这样的比较试剂。这是因为在检测血型抗原弱表达的表现型时，抗血清的效能能够更好地表现出来。天然存在着各种ABO亚型的抗原弱表达红细胞。A/B抗原浓度在各种细胞表现型中存在变异，通常这种变异是未知的，除非开展更为深入的分析。由于具有亚型表现型的个体的出现频率非常低，因此将抗原弱表达的红细胞作为对照试剂是难以实施的。例如，据估计A型血的Ax表现型在人群中的出现频率为0.003％，其他亚型的频率甚至更低。因此，人造的弱表现型红细胞能用于满足此目的。将O型红细胞人工改造成A型、B型或者AB型红细胞，能够获得相似的血清学弱表现型。这些抗原的表达量可以通过改变插入条件来控制，譬如，插入抗原的浓度、和/或红细胞和待插入抗原的比例、人工合成抗原的加入量等等。插入的抗原在特定的条件下，能够在红细胞膜上保持稳定至少六周，亦有可能更长。当前，用于检测糖基化抗原弱表达细胞的单克隆抗体，其血清学灵敏度的检测可通过几种方法进行1.用天然存在的弱表达亚型细胞来检测。这种方法需要寻找此种稀有亚型，并制备该亚型细胞备用，然后用作对照。2.使用正常细胞进行检测。这种方法检测普通细胞，但不能指示单克隆抗体的灵敏度。3.稀释单克隆抗体来测定其效能。这种方法将抗体稀释，用正常抗原来进行检测。此法在缺乏真实对照时，最为常用。鉴于天然弱表达亚型的低出现频率，其获得和供应均十分困难。此外，这些抗原弱表达细胞在个体间亦存在变异。这种天然细胞的稳定供应是困难的，甚至是不可能的。进一步说，弱表达亚型的发生频率在不同人群中也是不同的。正常细胞表达高水平的抗原，举例来说，在单个红细胞表面，表达多于500,000个拷贝。当检测这些细胞时，通常抗体要被稀释，以显示在低浓度时，抗体依然能够和红细胞发生反应，并给出血清学阳性结果。稀释抗体浓度来检测其灵敏度的方法较费时。其实验结果可以用于推断正常浓度时抗体能够检测出抗原的最低水平。这种有漏洞的方法很遗憾地实际应用于大多数场合。只有经常性地花费时间稀释抗体，或者使用弱表达亚型时，才可能检测出试剂本身的损坏。在进行单克隆抗体稀释的过程中，还可以有其它问题。单克隆抗体经常是由双克隆的抗体混合而成，并经调整而显示特异的抗体特性，众所周知某些克隆在检测ABO亚型时效果可能较另外一些要好，因此抗体通常是单克隆抗体的混合物。对这样的抗体进行稀释，将会破坏其内在的抗体特性，以至于不能真实地反映抗体的表现。另外，许多单克隆抗体被混合并预先载入测试卡系统(如胶卡)，因此不能再用稀释的方法进行检测。当前，许多实验室并不对他们的ABO分型系统抗体进行灵敏度控制。他们仅仅是依赖生产厂家提供的说明和这些抗体以往的表现。或者，实验室仅仅是使用前述的三种方法，每周或每月对一个批号的抗体进行测试。此外，有很多实验室还依赖于文献报道的结果，文献报道了某次偶然的输血，将一种弱表达亚型的血液输入血型不相容的受血者体内，提示这样的事件不是致命的。以往，交叉配型(用供血者的血液与受血者的血清反应)能够检测出错配的弱表达亚型与受血者之间的不相容性。然而，近年来，交叉配型在许多血液中心已不再进行，取而代之的是只对供血者和受血者血液进行检测。所以，正确配型显得更为重要。不对抗体进行检测将忽略一些问题，例如抗体被损坏，或由于不进行交叉配型而使得临床上重要的亚型可能被错配。这种错配将造成中等到严重程度的输血反应。因此，对抗体灵敏度质量控制的要求是明显的。使用携带已知表达量抗原的细胞来检测抗体或检测系统，来给出一个准确的、标准的血液分型鉴定。本专利技术的目的在于提供一种用于血型测定的灵敏度控制试剂，，或者至少提供一个可用的备选。专利技术概述本专利技术的一个方面，提供了一种血型鉴定灵敏度控制物的制备方法，包括●将一定量的抗原溶解于水中，亦可选择加入一种或多种可溶性盐，得到一定浓度的抗原溶液；和●将抗原溶液与已知浓度的液态细胞溶液接触一段时间，在可使抗原分子能够插入细胞膜中的温度，形成人工改造的细胞；或者●将抗原溶液与已知浓度的液态细胞(已经过修饰，在膜上插入了连接分子)溶液接触一段时间，在可使抗原分子能够和连接分子结合的温度，形成人工改造的细胞；和●用洗液洗涤经改造的细胞，并将洗后的改造细胞悬浮于水中，亦可选择加入一种或多种可溶性盐，得到改造细胞的溶液；和●测定改造细胞的浓度，并调整浓度使其能够用于血型检测时的灵敏度控制。在本专利技术的一个具体方案中，不对溶液中的细胞本身进行改造，改造细胞含直接插入细胞膜内的抗原分子。本专利技术的另一个具体方案中，溶液中的细胞膜上插入连接分子，改造细胞含由连接分子结合于细胞膜上的抗原分子。本专利技术中使用的细胞可以使用任意类型的细胞，包括动物细胞、植物细胞、细菌细胞或者拥有人造细胞膜的囊泡。然而，使用动物细胞更为理想。动物细胞中，人类的红细胞则更好。连接分子最好具有一条脂肪链尾巴，以及一个“桥”结构连接脂肪链尾巴和抗原分子。连接分子最好具有一个生物素化的糖脂结构。举例来说， “桥”结构可以由一个生物素-卵白素结构来实现。抗原最好是一个糖脂，或者是一个生物素化的糖。这个糖脂最好血型相关的，例如A、B、H、Lewis或Gal(alpha)鞘糖脂。生物素化的糖最好也是血型相关的，例如A、B、H、本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种血型测定的灵敏度控制物制备方法，包括：●将一定量的抗原溶解于水中（亦可是一种或多种可溶性盐的溶液），制备浓度确定的抗原溶液；和●将抗原溶液与已知浓度的液态细胞溶液接触一段时间，在可使抗原分子能够插入细胞膜中的温度，形成人 工改造的细胞；或者●将抗原溶液与已知浓度的液态细胞（已经过修饰，在膜上插入了连接分子）溶液接触一段时间，在可使抗原分子能够和连接分子结合的温度，形成人工改造的细胞；和●用洗液洗涤经改造的细胞，并将洗后的改造细胞悬浮于水中，亦 可选择加入一种或多种可溶性盐，得到改造细胞的溶液；和●测定改造细胞的浓度，并调整浓度使其能够用于血型检测时的灵敏度控制。

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：德波拉阿代拉布莱克，丽莎格威妮丝吉利佛，斯蒂芬迈克尔亨利，陈吉，
申请(专利权)人：科德生物工程有限公司，
类型：发明
国别省市：NZ[新西兰]