OX2受体的同系物制造技术

编码哺乳动物，例如灵长类动物ＯＸ２的受体的核酸，纯化蛋白及其片段。还提供多克隆和单克隆抗体。描述了使用组合物用于诊断和治疗用途的方法。（*该技术在2020年保护过期，可自由使用*）

【技术实现步骤摘要】

本专利技术涉及影响哺乳动物生理学，包括免疫系统功能的组合物和方法。特别是，它提供可以调节发育和/或免疫系统的试剂或方法。还描述了这些材料的诊断和治疗用途。
技术介绍
OX2抗原(OX2)是一种在各种细胞，包括胸腺细胞，B淋巴细胞，活化的T淋巴细胞，神经元，内皮细胞，和滤泡树突细胞上鉴定的细胞表面蛋白。Barclay(1981)Immunology 44727-736。序列分析表明，它是一种包含两种胞外免疫球蛋白-样(Ig-样)区和短胞质区的跨膜蛋白。Clark等，(1985)EMBO J.4113-118。此区的构成较普通且可以在多种不同的白细胞表面蛋白中找到。Barclay等，(1997)Leucocyte Antigens Factsbook(2d.ed.)Academic Press，伦敦。这些类型的蛋白常常与其它也具有Ig-样区的细胞表面上的其它蛋白相互作用。OX2抗原的分布与一种假说相一致，即OX2通过结合配偶体，例如OX2受体(OX2R)，交换信号至白细胞谱系内的细胞内，其中该白细胞谱系包括巨嗜细胞，其表达受体(Preston等，(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918)，和单核细胞-巨嗜细胞谱系的其它细胞。且，OX2还可能参与在巨嗜细胞各种功能的调节。在此情况中，例如，OX2在神经元上的表达可以建立了一种可以表达OX2R的，被称作小胶质细胞的脑停留巨嗜细胞的直接通讯方法，因为它们来源于单核细胞-巨嗜细胞谱系。Perry和Gordon(1988)Trends Neurosci.11273-277。通常，巨嗜细胞的缺损或过度活化造成免疫疾病和其它疾病的广范围发病。见，例如，McGee等，(eds.1992)Oxford Textbook ofPathology Oxford University Press，Oxford；Lewis 和McGee(eds.1992)The Macrophage IRL Press，Oxford；和Bock和Goode(eds.1997)The Molecular Basis of Cellular DefenceMechanisms Wilev & Sons。且，OX2的相互作用蛋白，例如，OX2抗原的OX2R的鉴定较困难，这是因为相互作用的亲和力通常非常低。这意味着细胞表面蛋白的重组形式，例如，OX2，与其结合配偶体，相互作用的蛋白，例如，OX2R的结合不够稳定，以致不能用普通方法检测。因而，CD48和CD2间的相互作用，它们的配偶体在其胞外区均含两个Ig-样区，具有第二部分的半衰期。见，Van der Merwe等，(1993)Biochem.Soc.Trahs.21340S；和Van der Merwe和Barclay(1994)Trends Biochem.Sci.19354-358。细胞表面蛋白，如OX2的重组形式可以通过很多方法制成多价体，并用于检测新的蛋白。已经用基因工程方法改造了OX2，以包括来源于CD4的两个Ig-样区的标记物。重组可溶性蛋白是通过常规表达方法在真核细胞中表达的。在早期的研究中，相互作用是在荧光颗粒和小鼠巨嗜细胞上的多价重组OX2蛋白间观察的。Preston等，(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918。尽管如此，通过阻断抗体OX89，在小鼠巨嗜细胞上鉴定OX2R还未成功。Preston等，(1997)Eur.J.Immunol.271911-1918。如前所述，新的OX2-样分子受体的发现，鉴定，和理解是非常有利的。本专利技术提供OX2配位体新的受体同系物，和相关的化合物，及它们的使用方法。专利技术概述本专利技术涉及被称作OX2的配位体的新受体同系物，例如，啮齿类动物和灵长类动物的实施方案。这些通常被称作OX2的受体同系物(OX2RH)，有来源于各种啮齿类动物和灵长类动物物种的实施方案。已经建立了两种确实结合各物种OX2的受体同系物。特别是，提供被称作OX2RH1，OX2RH2，OX2RH3，和OX2RH4的同系物的描述。它包括编码多肽自身的核酸，和它们的生产和使用方法。本专利技术核酸的特征部分在于，它与本专利技术所包括的克隆互补DNA(cDNA)序列的同源性。本专利技术人已经生产出了一种新的，大鼠巨嗜细胞上OX2R的单克隆抗体(mAb)，称作OX102，其阻断OX2和OX2R之间的相互作用。它们已经被分离并表征大鼠OX2R的基因和多肽。其中提供大鼠OX2R的核酸分子和多肽(预测的氨基酸序列)的序列。从相似蛋白类推，本专利技术人教导人类OX2R的核苷酸和氨基酸序列与相应大鼠的OX2R序列至少50％同源。大鼠OX2R cDNA和预测的OX2R多肽序列的有效性能够鉴定等价的人类OX2R序列，或者通过筛选已知的人类序列，或通过细胞杂交或PCR技术分离人类的核酸。大的胞质序列在OX2R多肽中的存在表明OX2R在巨嗜细胞功能中具有某些作用，信号产生或与胞质成分相互作用。因而，本专利技术提供基于OX2R的试剂，其模拟或识别OX2R的多肽或核酸序列，例如被设计与OX2R结合位点反应的分子实体，相对于OX2R或反义序列培养的mAbs，该试剂构成治疗上有效的化合物，用于修饰携带OX2和/或OX2R细胞表面蛋白的细胞(例如，巨嗜细胞，活化的淋巴细胞，神经元，内皮细胞，树突细胞，胸腺细胞，和B淋巴细胞)的功能，提高或抑制细胞的活性。因而，基于OX2R的试剂，其模拟或者识别OX2R的多肽或核酸序列，具有潜在的，控制巨嗜细胞较宽范围的功能，包括对细菌感染，自身免疫疾病等应答的作用。因为OX2R的胞外区与OX2相互作用，因而本专利技术人提供一种筛选影响(积极地或消极地)OX2和OX2R间结合的侯选化合物的方法。因此，本专利技术提供的OX2R可用于检测抑制OX2和OX2R间相互作用的化合物，并因此可能影响巨嗜细胞和免疫系统其它细胞，如淋巴细胞或滤泡树突细胞间的相互作用。大鼠OX2R的核酸和氨基酸序列在表1中列出。下面陈述本专利技术的各个方面。根据详细的描述，其它方面是很清楚的。因此，在第一方面中，本专利技术提供一种含多肽的物质，该多肽具有表1中列出的氨基酸序列。在另一方面中，本专利技术提供一种含多肽的物质，该多肽至少50％的氨基酸序列与表1中列出的氨基酸序列相同。在另一方面中，本专利技术提供一种多肽，其是上述多肽的突变体，变体，衍生物或等位基因，且其具有全长OX2R的特性，例如，与OX2或全长OX2R抗体的结合能力。在另一方面中，本专利技术提供一种物质，其是上述多肽的片段(例如，具有表1中列出的氨基酸序列的多肽片段)，该片段显示全长OX2R蛋白的特性。例如，该片段可以与OX2蛋白或全长OX2R蛋白的抗体结合。在其中一个实施方案中，该片段包括部分或全部的OX2R胞质区或该区的活性部分。在另一个实施方案中，该片段包括部分或全部的OX2R胞外区或该区的活性部分。因为胞外区被认为决定与OX2相互作用，本专利技术包括部分或全部胞外区的这种片段可用于筛选干预OX2和OX2R间结合的侯选化合物。因此，本专利技术提供筛选侯选化合物的材料和方法，该侯选化合物可能具有干预巨嗜细胞和其它细胞，包括胸腺细胞，B淋巴细胞，活化的T淋巴细胞，神经元，内皮细胞和滤泡树突细胞间本文档来自技高网...

【技术保护点】
一种组合物，其物质选自：ａ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２区段相同的至少四个氨基酸的至少三个分离的非重叠区段；ａ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２区段相同的至少五个氨基酸的至少两个分 离的非重叠区段；ａ３）一种天然序列的啮齿类动物ＯＸ２ＲＨ１多肽，包含成熟的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：２；ａ４）一种包含大鼠ＯＸ２ＲＨ１序列的融合多肽；ｂ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４区段相同的至少四个氨基酸 的至少三个分离的非重叠区段；ｂ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４区段相同的至少五个氨基酸的至少两个分离的非重叠区段；ｂ３）一种天然序列的啮齿类动物ＯＸ２ＲＨ１多肽，包含成熟的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：４；ｂ４） 一种包含人ＯＸ２ＲＨ１序列的融合多肽；ｃ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６区段相同的至少四个氨基酸的至少三个分离的非重叠区段；ｃ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６区段相同的至少五个氨基 酸的至少两个分离的非重叠区段；ｃ３）一种天然序列的啮齿类动物ＯＸ２ＲＨ１多肽，包含成熟的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：６；ｃ４）一种包含小鼠ＯＸ２ＲＨ１序列的融合多肽；ｄ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８区段相同的 至少四个氨基酸的至少三个分离的非重叠区段；ｄ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：８区段相同的至少五个氨基酸的至少两个分离的非重叠区段；ｄ３）一种天然序列的啮齿类动物ＯＸ２ＲＨ１多肽，包含成熟的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ： ８；ｄ４）一种包含人ＯＸ２ＲＨ２序列的融合多肽；ｅ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０区段相同的至少四个氨基酸的至少三个分离的非重叠区段；ｅ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０区段 相同的至少五个氨基酸的至少两个分离的非重叠区段；ｅ３）一种天然序列的啮齿类动物ＯＸ２ＲＨ２多肽，包含成熟的ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１０；ｅ４）一种包含小鼠ＯＸ２ＲＨ２序列的融合多肽；ｆ１）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２区段相同的至少四个氨基酸的至少三个分离的非重叠区段；ｆ２）一种基本纯的或重组的多肽，包含与ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：１２...

【技术特征摘要】
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【专利技术属性】
技术研发人员：AN巴克莱，MH布朗，DM戈尔曼，LL拉尼尔，GJ赖特，H切尔温斯基，JH菲利普斯，RM赫克，JD塞德维克，
申请(专利权)人：医疗研究局，先灵公司，
类型：发明
国别省市：GB[英国]