用于治疗斯达加特氏病的反义寡核苷酸制造技术

本发明专利技术涉及医学和生物技术领域。特别地，本发明专利技术涉及可用于治疗、预防和/或延缓斯达加特氏病和/或与ABCA4相关的眼部疾病的新的反义寡核苷酸(AON)。更优选地，本发明专利技术涉及用于抑制或阻断人ABCA4前体‑mRNA中的外显子39跳读的AON。

Antisense oligonucleotides for the treatment of stagat's disease

【技术实现步骤摘要】
【国外来华专利技术】用于治疗斯达加特氏病的反义寡核苷酸专利
本专利技术涉及医学和生物
特别地，本专利技术涉及可用于治疗、预防和/或延缓眼部疾病、优选黄斑营养不良、更优选斯达加特氏病(Stargardtdisease)的反义寡核苷酸(AON)。
技术介绍
斯达加特氏病(STGD或STGD1)是最常见的遗传性黄斑营养不良引起的中心视觉的渐进性损害。通常在儿童或成年早期发作，而在成年晚期最不常见，通常发病越晚，预后越好。该疾病的患病率为8,000-10,000分之1，并且，该疾病具有常染色体隐性遗传方式，与疾病引起的编码感光细胞特异性ATP结合盒转运蛋白ABCA4的基因中的突变有关。该蛋白质包含2273个氨基酸，主要表达在视网膜中，并位于边缘和椎体外节片(coneoutersegmentsdisks)。据信它将N-亚视黄基(retinyl-idene)-磷脂酰乙醇胺从细胞腔(luminal)翻转到感光盘(photoreceptordisks)的胞质面。斯达加特氏病与视网膜色素上皮中脂褐素内容物的大量沉积、有毒物质清除失败以及感光细胞的大量损失紧密相关。当ABCA4缺失或功能异常时，形成脂褐素的主要成分二-维甲酸(retinoid)-吡啶鎓-乙醇胺。实际上，已经公开有许多报告，其证实了ABCA4是斯达加特氏病潜在的基因，显示出大量(～1000)致病的变体，其中一半以上仅被描述过一次。已在大约75％的斯达加特氏病病例和大约30％的常染色体隐性锥杆营养不良(come-roddysrophy，CRD)患者中识别出ABCA4中的双等位基因变体。大多数突变是错义的，其次是无义突变，少量的插入/缺失和影响RNA剪接的突变。来自北欧和美国的斯达加特氏病病例中异常高的比例(约30％)是仅一种ABCA4变体的结果。最近显示，存在于内含子38中的第三常见的ABCA4变体c.5461-10T＞C，由于ABCA4的mRNA中外显子39的跳读或外显子39+外显子40的跳读而导致严重形式的斯达加特氏病(Aukrust等人.TheintronicABCA4c.5461-10T＞Cvariant，frequentlyseeninpatientswithStargardtdisease，causessplicedefectsandreducedABCA4proteinlevel.ActaOphthalmol2016Oct24：1-7；Sangermano等人.2016.PhotoreceptorprogenitormRNAanalysisrevealsexonskippingresultingfromtheABCA4c.5461-10T＞CmutationinStargardtdisease.Ophthtalmology123(6)：1375-1385)。外显子39的跳读导致124个核苷酸的移码缺失，而外显子39和40的双跳读这则导致254个核苷酸的移码缺失。值得注意的是，未检测到这种较短版本的蛋白质，可能是因为它们不稳定(Aukrust等人，2016)。据估计，在西方世界大约有7000名斯达加特氏病患者患有这种特殊的突变。目前，治疗斯达加特氏病的三种主要干预途径是干细胞治疗、基因替代治疗和不同的药物方法。用于治疗遗传性眼部疾病的相对较新的治疗进展是使用反义寡核苷酸(AON)，其靶向从突变基因转录的前体-mRNA(pre-mRNA)。AON通常是小的多核苷酸分子(16-至25-聚体)，由于其序列与靶标前体-mRNA分子的序列互补，因此能够干扰剪接。预期的机制是，在AON结合与其互补的靶序列时，前体-mRNA内的靶向区域干扰剪接因子，其继而导致剪接改变。从治疗上讲，该方法学可以两种方式使用：a)重新指导(redirect)其中突变激活隐蔽的剪接位点的基因的正常剪接；b)跳过携带(蛋白质-截短)突变的外显子，使得mRNA保持完整，并产生(部分)功能性蛋白。两种方法都已成功应用于患有严重遗传疾病的患者(Scaffidi和Misteli.2005.ReversalofthecellularphenotypeintheprematureagingdiseaseHutchinson-Gilfordprogeriasyndrome.Nat.Med11(4)：440-445；Cirak等人.2011.RestorationoftheDystrophin-associatedGlycoproteinComplexafterExonSkippingTherapyinDuchenneMuscularDystrophy.MolTher20：462-467；Cirak等人.2011.ExonskippinganddystrophinrestorationinpatientswithDuchennemusculardystrophyaftersystemicphosphorodiamidatemorpholinooligomertreatment：anopen-label，phase2，dose-escalationstudy.Lancet378(9791)：595-605；Goemans等人.2011.SystemicadministrationofPRO051inDuchenne’smusculardystrophy.NEnglJMed364(16)：1513-1522)。关于眼部疾病，已经显示AON有望用于治疗雷伯氏先天性黑内障或LCA(WO2012/168435；WO2013/036105；WO2016/034680；WO2016/135334)。而且，WO2016/005514公开了用于治疗、预防或延缓II型Usher综合征的靶向USH2A前体-mRNA的外显子跳读AON，其导向外显子13、外显子50和PE40的跳读和/或保留外显子12。WO2015/004133公开了AON用于治疗斯达加特氏病在外显子10从ABCA4前体-mRNA的跳读中的用途。因此，尽管已有描述AON用于在包括斯达加特氏病的若干种遗传性眼部疾病的治疗中的外显子跳读，但在斯达加特氏病的治疗中，特别是当其涉及外显子保留时，更具体地，用于治疗由诱导外显子39跳读的c.5461-10T＞C突变引起的斯达加特氏病，对于基于AON的策略似乎存在非常强烈的需求。
技术实现思路
本专利技术涉及用于治疗、预防或延缓斯达加特氏病的反义寡核苷酸(AON)。更具体地，本专利技术涉及能够抑制人ABCA4前体-mRNA中至少一个外显子、优选外显子39的跳读的AON，其中外显子跳读由ABCA4基因中的(内含子)突变引起，例如内含子38中的c.5461-10T＞C突变。优选地，AON能够抑制、防止或阻断外显子39跳读和/或外显子39/外显子40双重跳读(doubleskipping)。在优选的实施方式中，本专利技术的AON包括SEQIDNO：1至37中任一个的序列或由其组成。本专利技术还涉及包括根据本专利技术的AON和药学上可接受的载体的药物组合物，其中药物组合物用于玻璃体内给药。在另一方面，本专利技术涉及表达根据本专利技术的AON的病毒载体。在另一方面，本专利技术涉及包括本专利技术的AON的纳米颗本文档来自技高网...

【技术保护点】
1.一种反义寡核苷酸(AON)，其能够抑制人ABCA4前体-mRNA中至少一个外显子的跳读，其中外显子跳读由ABCA4基因中的突变引起。/n

【技术特征摘要】
【国外来华专利技术】20170413 GB 1706009.61.一种反义寡核苷酸(AON)，其能够抑制人ABCA4前体-mRNA中至少一个外显子的跳读，其中外显子跳读由ABCA4基因中的突变引起。


2.根据权利要求1所述的AON，其中引起外显子跳读的突变是在内含子中。


3.根据权利要求2所述的AON，其中所述突变是人ABCA4基因的内含子38中的c.5461-10T＞C突变。


4.根据权利要求1-3中任一项所述的AON，其中所述AON能够抑制外显子39的跳读和/或外显子39/外显子40的双重跳读。


5.一种AON，其包括与以下序列互补的核苷酸序列：SEQIDNO：45、46、47、48、49、65或66或其部分的核苷酸序列；或者与人ABCA4前体-mRNA的内含子38/外显子39、外显子39/内含子39、内含子39/外显子40或外显子40/内含子40的边界重叠的序列。


6.根据权利要求5所述的AON，其中互补序列包括内含子38和外显子39之间的边界。


7.根据权利要求5或6所述的AON，其中互补序列包括人ABCA4基因的内含子38中的c.5461-10T＞C突变。


8.根据权利要求1-7中任一项所述的AON，其中，所述AON包括与SEQIDNO：44内的8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个连续核苷酸互补的序列或由其组成。


9.根据权利要求8所述的AON，其中所述AON包括20、21、22、23、24或25个核苷酸，并且还包括至多一个CpG基序。


10.根据权利要求8所述的AON，其中所述AON包括与SEQIDNO：65或SEQIDNO：66内的8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、21、22、23、24或25个连续核苷酸互补的序列或由其组成。


11.根据权利要求9或10所述的AON，其中所述AON包括SEQIDNO：1、3、4、5、6、9、12、13、14、17、20、24、25、29、31和32中任意一个的序列或由其组成。


12.根...

【专利技术属性】
技术研发人员：A·S·伊尔马兹，P·亚当森，K·C·杜拉，I·A·E·舒尔克斯，
申请(专利权)人：ProQR治疗上市公司Ⅱ，
类型：发明
国别省市：荷兰;NL